扶正祛瘀合剂中浙贝母薄层鉴别方法研究

扶正祛瘀合剂中浙贝母薄层鉴别方法研究

尹亮洁  ,龙园  ,闫壮壮

云南白药集团股份有限，云南  昆明  650500

【摘要】目的：建立扶正祛瘀合剂薄层鉴别的方法。方法：采用薄层方法对扶正祛瘀合剂中浙贝母进行鉴别。结果：建立的方法专属性强、耐用性好，可作为扶正祛瘀合剂的薄层鉴别。

【关键词】扶正祛瘀合剂、薄层色谱、浙贝母、贝母素甲。

1、新修订质量标准草案实验方案研究

1.1．仪器与材料

供试品：扶正祛瘀合剂1批，批号：20210530

贝母素甲对照品：批号：110750-201612，来源：中国食品药品检定研究院

贝母素乙对照品：批号：110751-201712，来源：中国食品药品检定研究院

1.2. 方法选择

参照《中国药典》2020年版一部浙贝母检测方法进行改进

《中国药典》2020年版四部通则0502薄层色谱法

1.3. 方法与结果

1.3.1供试品溶液的制备进行了以下方法比较：

1.3.1.1方法一：取本品100ml，加浓氨试液调节PH至碱性，加三氯甲烷振摇提取2次，每次50ml，三氯甲烷液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液20～40μl、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图1。

点样量：供试品溶液20μl、对照品溶液各10μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17∶2∶1）；显色剂：稀碘化铋钾试液；其中：S1为扶正祛瘀合剂，S2为贝母素甲、贝母素乙对照品。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。说明该方法可行。

2、新质量标准草案的检测方法的方法验证

为确保该方法的有效可行，按照《中国药典》2020年版四部9101分析方法验证指导原则，对新修订方法的专属性、重现性、耐用性进行验证，以保证检测方法合理可行。

2.1. 专属性

2.1.1方法要求：应能区分可能共存的物质或结构相似的化合物。不含被测成分的供试品，以及结构相似或组分中的有关化合物，应均呈阴性反应。存在其他成分的情况下，薄层色谱中对照斑点应能清晰分离出来。

2.1.2取方法一中3批扶正祛瘀合剂供试品溶液与阴性样品供试品溶液、贝母素甲、贝母素乙对照品溶液进行实验，结果见图2。

点样量：供试品溶液、阴性样品供试品溶液20μl、对照品溶液各10μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17∶2∶1）；显色剂：稀碘化铋钾试液。其中： S1、S2、S3为扶正祛瘀合剂，S4为阴性样品，S5为贝母素甲、贝母素乙对照品。

供试品色谱中斑点清晰，显与贝母素甲、贝母素乙对照品一致的斑点；阴性样品在贝母素甲、贝母素乙位置无斑点，其余斑点与制剂一致，说明阴性无干扰，方法专属性好。

结论：该方法分离度较好，供试品及对照品斑点清晰，无背景干扰，阴性样品无干扰斑点，系统适用性良好，专属性满足要求。

3.2. 重现性

取扶正祛瘀合剂3批，按方法一进行测试，结果见图3。

点样量：供试品溶液、阴性样品供试品溶液20μl、对照品溶液10μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17∶2∶1）；显色剂：稀碘化铋钾试液。其中： S1、S2、S3为扶正祛瘀合剂，S4为阴性样品，S5为贝母素甲、贝母素乙对照品。

供试品色谱中，在与贝母素甲、贝母素乙对照品相应的位置上，3批样品均显相同颜色的斑点，阴性无干扰。背景干扰较小。说明该方法可适用于不同批次样品。

3.3. 方法耐用性

3.3.1考察不同展开剂比例对结果的影响

取3批供试品溶液、贝母素甲、贝母素乙对照品溶液，点于同一硅胶G薄层板上。

标准展开剂为：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17∶2∶1），结果见图3。

调整展开剂比例，做2组实验，考察耐用性。

展开剂1：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（19∶2∶1），结果见图4。

点样量：供试品溶液20μl、对照品溶液10μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（19∶2∶1）；显色剂：稀碘化铋钾试液。其中： S1、S2、S3为扶正祛瘀合剂，S4为贝母素甲、贝母素乙对照品。

展开剂2：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（15∶2∶1），结果见图5。

点样量：供试品溶液20μl、对照品溶液10μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：默克  批号：HX03747226；展开剂：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（15∶2∶1）；显色剂：稀碘化铋钾试液。其中： S1、S2、S3为扶正祛瘀合剂，S4为贝母素甲、贝母素乙对照品。

试验结果：三种比例的展开剂检测结果Rf值略不同，但三批供试品色谱在与贝母素甲、贝母素乙对照品相应的位置上，均显相同颜色的斑点。背景干扰较小，说明稍微调整展开剂比例对结果无影响。

4.3.2更换不同品牌薄层板

以上薄层色谱法实验均采用默克公司硅胶G板，根据市面上用量较多的两家厂商，现分别更换为青岛海洋化工有限公司硅胶G板、百灵威公司硅胶G板进行测试。参照方法一，结果见图6、图7。

点样量：供试品溶液20μl、对照品溶液10μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：青岛海洋化工有限公司，批号：20220408；展开剂：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17∶2∶1）；

显色剂：稀碘化铋钾试液。其中： S1、S2、S3为扶正祛瘀合剂，S4为贝母素甲、贝母素乙对照品。

点样量：供试品溶液20μl、对照品溶液10μl；薄层板：硅胶G薄层板，品牌：百灵威，批号：L9C0U08；展开剂：乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17∶2∶1）；显色剂：稀碘化铋钾试液。其中： S1、S2、S3为扶正祛瘀合剂，S4为贝母素甲、贝母素乙对照品。

试验结果：更换不同品牌薄层板，Rf值略不同；供试品色谱中，在与贝母素甲、贝母素乙对照品相应的位置上，3批样品均显相同颜色的斑点，斑点清晰，背景干扰较小。说明该方法可适用于不同品牌硅胶G薄层板。

4. 结论

通过对新修订方法进行专属性、重现性、耐用性（不同展开剂比例、不同品牌薄层板）验证，结果表明：斑点清晰，分离效果好，批间重现性好，方法耐用性好，说明方法合理可行，可以用该方法对扶正祛瘀合剂进行浙贝母组分的质量控制。

参考文献

〖1〗《中国药典》2020年版一部浙贝母检测方法

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