HPLC法测定芎菊上清颗粒中绿原酸含量

HPLC法测定芎菊上清颗粒中绿原酸含量

陈健

重庆市涪陵食品药品检验所，重庆 408000

摘要：目的  建立测定芎菊上清颗粒中绿原酸含量的反相高效液相色谱法（RP-HPLC法）。方法  采用采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm），以乙腈：0.4%磷酸（10:90）为流动相，流速为1.0mL/min，检测波长为327nm，柱温30℃。结果  绿原酸进样量在0.04~1.0μg范围内与峰面积线性关系良好，回归方程y=3186377X-189,r=0.9995(n=6)，平均加样回收率99.72%，RSD=0.91%（n=6）。结论 RP-HPLC法简便、准确，重现性好，稳定可靠，可用于芎菊上清颗粒的质量控制。

关键词： 反相高效液相色谱法 芎菊上清颗粒 绿原酸

芎菊上清颗粒由川芎、菊花等15味中药组成，对外感风热、头痛鼻塞有十分显著的疗效[1]。为了更好地控制该制剂的质量，有必要建立一种合理的含量测定分析方法。本研究结合参考文献[2-3]，以该制剂中的主要药材菊花中绿原酸的含量作为质量控制指标，采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC法）测定其含量，并进行方法学考察，为改进和提高芎菊上清颗粒的质量控制标准提供了依据。

1  仪器与试药

安捷伦1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；梅特勒-托利多XP204型和XP205型电子分析天平（瑞士梅特勒公司）。高效液相色谱检测用试剂（色谱纯），其它试剂（分析纯）。绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院提供，供含量测定用，批号为110753-202112）；芎菊上清颗粒（批号20210704，2021707，20092115，北京同仁堂制药有限公司）。

2  方法与结果

2.1  色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250mm×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈：0.4%磷酸（10:90）；流速：1.0mL/min；检测波长：327nm；柱温30℃；进样量：10μL。

2.2  溶液制备

取样品5g，精密称定，加石油醚（30~60℃）30 mL，加热回流1小时，放冷，滤过，滤渣加50%甲醇溶液25mL超声处理30分钟，滤过作为供试品溶液；精密称取绿原酸对照品适量，置棕色瓶中，加50%甲醇溶液制成每1mL含40μg的溶液作为对照品溶液[3]。

2.3  方法学考察

线性关系考察：取对照品溶液（40μg/mL）,分别进样1，5，10，15，20μL，测定峰面积，以峰面积为纵坐标（X）、进样量为横坐标（Y），作标准线性回归，得回归方程 y=3186377X-189,r=0.9995(n=6)。结果表明绿原酸进样量在0.04~1.0μg范围内与峰面积线性关系良好。

阴性对照试验：取不含菊花茶调散的阴性对照品溶液，按上述方法记录色谱图，结果在绿原酸相对应的位置上未见色谱峰（见图1）

精密度试验：分别精密吸取对照品溶液10μL，重复进样6次，测得绿原酸峰面积的RSD=0.64%，表明本方法精密度良好。

稳定性试验：对同一供试品溶液测定6次，每次间隔2小时进样1次，结果绿原酸峰面积的RSD=0.68 %，表明供试品溶液在12小时内稳定。

重现性试验：

取样品（批号为20090704）适量，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，分别依法测定。结果平均峰面的RSD=0.79%，表明本方法重现性良好。

加样回收试验：取6份同一批次的已测定含量的样品（批号为20210707 ）各10g，加入绿原酸对照品适量，按供试品溶液制备方法制备供试液，依法测定，结果见表1。

表1   绿原酸加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3批样品，按供试品溶液制备项下的方法制备样品溶液，依法测定。结果批号为20210704，2021707，20210715的3批样品中绿原酸含量分别为1.536 ，1.532 ，1.511mg/袋（n=3）。

3 讨论

3.1  取绿原酸对照品溶液，于TU-2006型双光束紫外可见分光光度计上在200~400nm波长范围内进行光谱扫描，结果绿原酸在327nm波长处有最大吸收。因绿原酸在327nm波长处灵敏度高，可减少取样量，减少对色谱柱的污染，本试验选择327nm作为绿原酸测定波长。

3.2  用本方法测定芎菊上清颗粒中绿原酸含量简便、准确、快速，专属性强，因此本法可作为该制剂质量控制的一种手段。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部药品标准（中药成方制剂）第十一册[M]·北京：中华人民共和国卫生部药典委员会编，1991：202

[2]中华人民共和国药典（一部）[M]·北京：化学工业出版式社，2020：323

[3] 陈述，席桂同 高效液相色谱法测定银花感冒冲剂中绿原酸含量[J] 世界中医院杂志 2015年第1期，97-99