T淋巴细胞亚群及绝对计数在结直肠癌中的应用探讨

 T淋巴细胞亚群及绝对计数在结直肠癌中的应用探讨

刘楷,袁梦甜,陈袁丽,罗志强,李沁雅

乐山市人民医院医学检验科  四川乐山 614000

摘要：目的：探讨T淋巴细胞亚群绝对计数在结直肠癌病程进展过程中的变化，为结直肠癌的诊治提供参考。方法：选取我院35例结直肠癌患者作实验组，35例健康人作对照组，流式细胞仪检测两组T淋巴细胞亚群及绝对计数，比较两组间相关结果的差异。结果：结直肠癌患者CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴细胞百分比分别为52.90±3.38、29.38±2.23、26.48±7.72、CD4+/CD8+的比值为1.21±0.37，CD3+T、CD4+T淋巴细胞百分比及CD4+/CD8+的比值较正常对照组明显下降；结直肠癌患者T淋巴细胞亚群绝对计数为CD3+：421±105/ul、CD4+：234±62/ul、CD8+：213±79/ul较正常对照组也明显下降；结肠癌转移组T淋巴细胞亚群百分比分别为：CD3+：53.53±2.49、CD4+：29.25±2.53、CD8+：24.94±8.71、CD4+/CD8+的比值为1.30±0.40；与未转移组相比，两组无显著差异；结直肠癌转移组T淋巴细胞亚群绝对计数为CD3+：418±99/ul、CD4+：225±56/ul、CD8+：197±76/ul；未转移组相比，两组无显著差异。结论：结直肠癌患者存在明显的免疫功能下降，可对结肠癌患者进行免疫监测以期为后续治疗提供依据。

关键词  结直肠癌；T淋巴细胞亚群；流式细胞术

Application of T lymphocyte subsets and absolute counts in colorectal cancer

Liu Kai Yuan Mengtian Chen Yuanli Luo Zhiqiang Li Qinya

(Medical Laboratory Department, People's Hospital of Leshan, 614000)

Abstract：Objective: To explore the changes in the absolute count of T lymphocyte subsets during the progression of colorectal cancer, and to provide evidences for treatment and diagnosis of colorectal cancer. METHODS: 35 colorectal cancer patients in our hospital were selected as the experimental group, and 35 healthy people were selected as the control group. The absolute counts of T lymphocyte subsets in the two groups were detected by flow cytometry, and the differences between the two groups were compared.Results: Compared with the healthy control , the percentages of CD3+T, CD4+T, and CD8+T lymphocytes in patients with colorectal cancer were 52.90±3.38, 29.38±2.23, 26.48±7.72, respectivelyand the ratio of CD4+/CD8+ was 1.21±0.37. the percentage of CD3+T, CD4+T lymphocytes and the ratio of CD4+/CD8+ were significantly decreased; the absolute counts of T lymphocyte subsets in patients with colorectal cancer were CD3+: 421±105/ul, CD4+: 234± 62/ul, CD8+: 213±79/ul were also significantly lower than those in the normal control group; the percentages of T lymphocyte subsets in the colon cancer metastasis group were: CD3+: 53.53±2.49, CD4+: 29.25±2.53, CD8+: 24.94±8.71, The ratio of CD4+/CD8+ was 1.30±0.40; compared with the non-metastatic group, there was no significant difference

, the absolute counts of T lymphocyte subsets in the colorectal cancer metastasis group were CD3+: 418±99/ul, CD4+: 225±56/ ul, CD8+: 197±76/ul; compared with the non-metastatic group, there was no significant difference. Conclusion: The patients with colorectal cancer have obvious decline in immune function, and immune monitoring can be carried out in patients with colorectal cancer in order to provide the basis for the follow-up treatment.

Key words colorectal cancer; T lymphocyte subsets;

结直肠癌（Colorectal cancer，CRC）是一种常见恶性肿瘤，大多数CRC患者在就诊时已经处于中晚期。近年来，我国CRC的发病率和死亡率呈明显上升趋势[1]。CRC的发生、进展与患者免疫状态、肿瘤微环境等存在密切联系[2]。T细胞来自淋巴干细胞，其主要参与抗肿瘤、抗感染等过程，T淋巴细胞亚群的监测可用于探究疾病的发病机理、病程进展、指导临床治疗方案。研究证实肿瘤浸润性T细胞可改变的肿瘤微环境，参与或抑制了恶性肿瘤的生长和迁移[3]。但针对CRC发生远处转移患者研究较少，因此本研究对35例结直肠癌患者和健康体检人群外周血T淋巴细胞亚群及绝对计数检测，结果如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

选取我院2021年8月至12月收治的诊断为结直肠癌的35例患者作为实验组，年龄在52-70岁之间，所有患者均病理诊断为结直肠癌。选取我院体检健康人35例作为对照组，年龄在47-73岁。所有实验者均无免疫性疾病,血液系统疾病。

1.2  主要试剂与仪器

CD3/CD4/CD8试剂、红细胞裂解液、磷酸盐缓冲液（PBS）、FACSCanto流式细胞技术仪、绝对计数管及同型对照抗体购买自美国BD公司

1.3  检测方法

采清晨空腹外周静脉血约2-3ml，给予EDTA-K2抗凝，在72h内进行检测。加20ul试剂至绝对计数管的底部；加50ul全血；混匀4℃避光孵育15分钟，加溶血素；避光10min混匀后上机。所有操作严格按照试剂及仪器说明书进行。

1.4  统计学处理

用spss22.0进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差来表示，独立样本T检验比较两组间差异，以Ｐ＜0.05为差异具有统计学意义。

2  结果

2.1  两组临床资料比较

收集临床资料，测定血清CEA，实验组、对照组的CEA浓度为27.69±5.83ng/L、0.46±0.41ng/L，实验组CEA值明显高于对照组（P=0.024）。

2.2  两组外周血T淋巴细胞亚群及绝对计数比较

实验组CD3+T、CD4+T、CD8+T百分比分别为52.90±3.38、29.38±2.23、CD4+/CD8+的比值为1.21±0.37，实验组CD3+、CD4+及CD4+/CD8+比值较对照组均显著下降（P<0.05）。实验组T淋巴细胞亚群绝对计数为CD3+：421±105/ul、CD4+：234±62/ul、CD8+：213±79/ul；实验组T淋巴细胞亚群绝对计数CD3+、CD4+和CD8+较对照组明显下降（P<0.05，见表1）。

表1 CRC组与对照组T淋巴细胞亚群及绝对计数比较

2.3  转移组与未转移组的T淋巴细胞亚群及绝对计数比较

转移组CD3+T、CD4+T、CD8+T百分比分别为53.53±2.49、29.25±2.53、24.94±8.71，CD4+/CD8+的比值为（1.30±0.40），转移组T淋巴细胞亚群绝对计数CD3+：418±99/ul、CD4+：225±56/ul、CD8+：197±76/ul，转移组T淋巴细胞亚群及百分比与未转移组无明显差异（P>0.05）。

表2 转移组与未转移组T淋巴细胞亚群绝对计数比较

3  讨论

肿瘤的发生、发展和转移是一个复杂的生物免疫过程，细胞免疫作为适应性免疫应答重要“成员”之一，在抗肿瘤中发挥着重要的作用[3]。

CD3+淋巴细胞主要包括CD4+和CD8+两类,两者处于动态平衡状态，任何一类的变化均可导致机体的免疫系统紊乱。我们发现结直肠癌患者外周血CD3+、CD4+、CD8+比例及CD4+/CD8+均低于正常组，但CD8+细胞比例无显著变化，与文献报道一致，说明结直肠癌患者的免疫功能明显受损，其机制可能与肿瘤发生和发展过程中释放的大量免疫抑制因子，使CD4+T淋巴细胞下降，进而导致结直肠癌患者的CD4+ /CD8+ 比值相对不平衡[4-5]。研究表明，由CD4+ 和CD8+ 细胞的形成的细胞网络调节和维持免疫系统的稳定性十分重要，其比值降低时，可削弱其抗击肿瘤的能力[6]。CD8+ T细胞在抗肿瘤免疫中起着重要的作用，可通过颗粒酶识别肿瘤抗原，CD8+T细胞数量的下降，使肿瘤细胞杀伤减少，加速肿瘤的进程。我们还发现，T淋巴细胞细胞亚群及绝对计数在结直肠癌转移与未转移患者之间无明显差异，T淋巴细胞亚群在监测结直肠癌是否转移效果不佳，这可能与我们纳入样本量偏小有关。

我们证实结直肠癌患者免疫力降低，受肿瘤的影响，T淋巴细胞亚群发生变化，但T淋巴细胞亚群在结直肠癌转移与否中的作用还需进一步探讨。

参考文献

[1]肖体先,张冠南,邱志峰,邢春根,李太生.结直肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群的研究[J].中华内科杂志,2019:453-455.

[2]郑莹,王泽洲.全球结直肠癌流星数据解读[J].中华流行病学杂志,2021,42(1):149-152.

[3]CREMONESI E,GOVERNA V,GARZON J F G,et al.Gut microbiota modulate T cell trafficking into human colorectal cancer [J]. GUT,2018,67(11):1987-1994..

[4]Zheng Hu,Jie ding, Zhicheng  Ma, et al.Quantitative evidence for early metastatic seeding in colorectal cancer  [J]. Nature Genetics,2019.

[5]肖秀英,于宝华,颜歌,丁新,余琛,杜祥.结直肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞检测的临床意义[J].中国医药导刊,2009:27-28+30.

[6]Bengsch B,Johnson AL,Kurachi M, et al.Bioenergetic insufficiencies due to metabolic alterations regulated by the inhibitory receptor PD-1 are an early driver of CD8(+) T cell Exhaustion[J]. Immunity,2016,45(2):358-373.

基金项目：乐山市2020年度重点科技计划项目 (项目编号：20SZD141）

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