在无菌隔离器内进行冻干制剂生产操作的规范性研究

在无菌隔离器内进行冻干制剂生产操作的规范性研究

孙迎春

杭州明德生物医药技术有限公司 浙江省杭州市310000

摘要：隔离技术最初是在二战时期被采用的一种技术，它是用来处理放射性材料来保护操作者的出口。从80年代起，隔离技术得到了越来越多的应用。起初，欧洲出现了用于实验室的消毒隔离装置，这种装置可以有效地保护被检测物体的微生物，从而降低了假阳性率。目前，国内外应用最多的是限制出入屏障（RABS）和消毒隔离（isolator）。与之相比，无菌隔离机具有显著的优越性，它是一种完全封闭的体系，使生产区域与外界及操作者彻底隔绝，从而避免了对环境的污染（包括由于操作人员在进行过滤和密封时所造成的污染）。根据2015年的统计，有30%的原料药有毒，使用无菌隔离装置可以有效地防止有毒有害物质对操作员造成的危害。另外，该设备还配有独立的高效过滤器、空气处理系统和无菌隔离器，可以实现对无菌隔离器内的生产环境进行自动控制。用负分法或过量杀灭法证明，用消毒隔离器可以将细菌数量降低到10，而常规的洁净室中，细菌数量仅为10。

关键词：无菌隔离器；无菌工艺模拟；干预操作

1无菌隔离室的运行设计

冷冻干燥剂是一种粉末，容易随人的呼吸而进入体内，对身体有害。另外，在充填时，如果操作不当，会造成制品的污染。所以，车间对操作人员的行为进行了严格的管理：①在消毒隔离室内，一切操作都不能太大或太快；②不能与任何与工艺操作无关的表面接触。以上的需求在工厂有关的标准作业规程中有说明。同时，为检验操作人员的操作是否达到标准及标准，车间应定期进行无菌流程仿真及空气流动方式的试验，以消除上一批次作业对检验结果的影响。

1.1消毒间的运行设计

为确保无菌隔离室的操作规范，必须严格设计操作人员在隔离室中的工作内容。设计内容包括在无菌隔离室中的操作，在无菌隔离室中发生异常情况时，保证在无菌隔离室中发生的一切干扰都是真实发生的，没有任何不合理的干涉。

每个批次的正常和计划的制造过程都会发生的干涉作业，其中包括环境监测，过渡点对接，在线称重，取样等。纠错干涉作业（也就是在制造工艺中进行修正或调整的作业，其中包括在使用消毒隔离器时，如倒瓶、炸瓶、碎瓶、传感器异常和针头调整等。

1.2消毒隔离室中的运行规范

1.2.1空气流型试验

空气流型试验是对无菌隔离室内的空气流动进行可视化，以确认装置运行和人员操作对空气流动方式的影响。特殊的检测方式是由有资质的检测员用烟雾发生器进行检测。确认灭菌隔离装置已关闭，验证员将设定的烟道与烟道相连，调整方向，将烟道对准工作区域30厘米及均匀流膜之下，然后开启烟道，让烟气进入空气中，与空气一起流通。

1.2.2消毒过程仿真

APS是用大豆胰蛋白酶的液体培养液来替代药品。在大多数条件下，微生物的生长和增殖都要比在真实的环境中更容易。因此，与常规生产相比，用培养基生产的无菌危险更大。该系统不但可以对产品的无菌性进行评价，也可以对生产工艺的稳定性和有效性进行检验。在APS对各公司进行的抽查中，FDA药物评价中心也表示，有关企业在人员培训和经营上有很多问题。所以，确认无菌隔离机内的工作是十分重要的。

2消毒隔离室内部运行的确认

2.1空气流型试验

在无菌隔离器内的设备处于正常生产状态且人员在各个岗位上进行模拟干预操作的条件下，由相关验证人员完成气流流型测试。验证人员应根据实际情况，选择无菌隔离器内的流型测试点，确保人员在无菌隔离器内的模拟干预操作均在烟雾气流下方。气流流型测试动作，人员在无菌隔离器内进行操作时，无菌隔离器内的单向流动没有发生改变，未产生紊流现象，且与静态测试相比，气流流型相同，则说明人员在无菌隔离器内的操作规范，不会对无菌隔离器内的环境产生影响，进而影响产品质量。

2.2 当无菌隔离室中的设备正常生产，工作人员在各个工作场所进行仿真干涉时，由相关的认证人员进行空气流动模型试验。在无菌隔离室内，验证员要根据现场条件选择流动式试验点，以保证在无菌隔离室内进行模拟干扰作业。空气流动方式试验：在无菌隔离室工作时，不会发生单向气流变化，也不会产生紊流。另外，与静态实验比较，其流动方式基本一致，说明在无菌隔离室内工作人员的操作规程不会对隔离室内的环境产生影响，进而对产品的品质产生影响。

2.2.1制作无菌隔离器的制作

在生产之前，对隔离机进行清洗、消毒，确保设备在使用之前没有受到任何细菌的污染，不会影响到检验的效果。使用异丙醇喷洒并擦拭无菌隔离室中的固定装置及手套，以便清洗和消毒。对无菌隔板中的充填压塞机进行泄漏测试，通过测试后，采用在线高温湿热消毒（121℃，30 mim）。然后，将在该装置操作时所需要的一些附属设备（例如不锈钢条、培养皿等）进行预处理，然后置于消毒隔离器内。在指定位置放置后，进行无菌隔离器的泄漏试验，试验合格后，使用第三方机构对消毒工作参数（前处理10分钟，充气15分钟，保压40分钟，通风120分钟）进行消毒，直至过氧化氢的浓度低于10，并根据工作规范的模板曲线，对消毒曲线进行审查，以保证消毒效果符合规定。

2.2.2    APS过程的环境监测

对APS过程中的沉降菌、浮游菌、悬浮颗粒及表面微生物进行了检测。取样点的测定及评价，并严格按照 GMP要求进行。

除了消毒隔离机的设备和手套的表面之外，对表面微生物的监控还包括人员的监控（例如工作人员所穿的洁净衣物的表面和工作人员所佩戴的手套的表面），从而使工作人员在无菌隔离室内的工作受到更大的限制。监测结果显示，在整个模拟期间，微生物的污染浓度均未超出标准，说明在无菌隔离室工作中，工作人员的工作对周围环境没有任何影响。在APS全过程中，风速、压差、温度、湿度等指标均满足有关规定，并对其进行了数据采集。

2.2.3   APS中的基质检验

APS完成后，所有的产品都要经过车间的灯光检查。在灯检后，对培养物进行充分的摇晃（保证与西林瓶的内壁接触），然后在20-25℃的培养室中进行培养，最长不能超过7天；然后，将充填物反转，置于30~35℃的培养室中，培养期不能少于7天，进行培养观察，并按照ChP2020的规定，进行清洁性检验。

3总结与展望

综上所述，在空气流型试验中，确定静止隔板内的空气流动方式为竖直、单向流动，不会对制品造成污染。在生产和员工的全动态运行中，无菌隔离室内的气流速度是稳定的，且内部流动呈单向不变，符合A类标准。实验期间，无扰动，且在无菌隔离间内，单向流动均匀，没有空气盲区，不会对制品产生任何污染。APS中，通过对填料的培养和环境监控的观察，证实了 APS工艺不会对产品造成任何的污染。通过对检验结果的确认，既证实了该车间的产品制造过程是合理的，同时也说明了隔离机操作员的生产作业规范化。操作消毒隔离器的人经过严格的训练，操作过程缓慢，清洁，没有任何多余的操作；即使有不正常的情况，如设备故障，操作者也能进行正确的操作。

参考文献

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