扶正益胃颗粒对顺铂处理荷瘤小鼠食欲及Ghrelin的影响

扶正益胃颗粒对顺铂处理荷瘤小鼠食欲及Ghrelin的影响

郑蔚婵[1]  ,李辉2, 龚雯婧1

湖南中医药大学，湖南 长沙   410208  2、常德市第一中医医院，湖南 常德   415000）

[摘要] 目的：研究通过构建荷瘤小鼠模型，探讨扶正益胃颗粒对顺铂处理荷瘤小鼠食欲及Ghrelin的影响；方法：C57BL/6小鼠皮下注射 Lewis 肺腺癌肿瘤细胞建立荷瘤模型，随机分为荷瘤组、顺铂组、扶正益胃颗粒组、醋酸甲地孕酮组，荷瘤组生理盐水每隔一天0.2mL腹腔注射，余各组小鼠每隔一天分别予以2.5 mg/mL顺铂0.2ml腹腔注射，在此基础上荷瘤组和顺铂质组予以生理盐水0.2mL灌胃，扶正益胃颗粒组小鼠予以扶正益胃溶液浓度0.6g/mL，0.2mL灌胃，醋酸甲地孕酮组小鼠予以醋酸甲地孕酮组悬浊液浓度4mg/mL，0.2mL灌胃治疗，7天后，脱颈处死小鼠，将胃内容物用生理盐水冲洗干净，将胃组织制成胃匀浆，备用于 ELISA 实验。观察测量小鼠饮食量，ELISA法检测血清Ghrelin含量；结果：给药前，四组小鼠组间饮食量差异无统计学意义（p>0.05），给药7天后，四组小鼠的饮食量均减少，顺铂组、扶正益胃颗粒组、醋酸甲地孕酮组与荷瘤组饮食量比较差异有统计学意义（p<0.05）；扶正益胃颗粒组、醋酸甲地孕酮组饮食量与顺铂组相比差异有统计学意义（p<0.05）；扶正益胃颗粒组较醋酸甲地孕酮组小鼠饮食量差异无统计学意义（p>0.05）；较荷瘤组，顺铂组 Ghrelin含量明显降低（p<0.05）；醋酸甲地孕酮组 Ghrelin含量明显升高（p<0.05），醋酸甲地孕酮组Ghrelin含量稍升高（p>0.05）。结论：扶正益胃颗粒可提高顺铂处理荷瘤小鼠食欲，其机制可能与提高Ghrelin含量有关。

 [关键词] 扶正益胃颗粒；化疗；小鼠；食欲；Ghrelin

化学治疗是恶性肿瘤的有效治疗方式，随着化疗技术不断优化，应用率逐步提高，化疗药物杀伤肿瘤细胞以外，也对机体正常细胞造成破坏产生一定的毒副反应，以食欲减退、恶心、呕吐、腹痛腹泻的胃肠道反应最为多见，发生率高达77.5% ~ 97.4%[1][2]，食欲减退是胃肠道不良反应最常见症状[3]。食欲减退会导致患者营养摄入不足、代谢功能紊乱、免疫功能降低，影响患者对化学治疗的的耐受性和配合程度，包括化疗延缓、减量、中途停止，持续食欲减退易引发癌症恶病质预后不良。现代医学认为引起食欲减退的机制与化学药物对胃肠黏膜直接刺激导致的炎性反应、抑制胃肠细胞的增殖[4]，有研究表明Ghrelin是主要由胃黏膜泌酸腺区的内分泌细胞分泌的具有促进生长激素分泌及增强食欲作用的内源性配体，啮齿动物在外周和脑内使用Ghrelin有促进胃促进动力及增强食欲作用[5]。临床中缓解化疗中食欲减退的方法有激素、促胃肠动力药、消化酶、维生素等，分别存在副作用大，效果不佳、价格昂贵等问题导致使用受限，而中医药能有效减少化疗中胃肠道反应、增强免疫力、抗肿瘤、提高患者生存质量发挥整体调理优势。本研究通过研究建立荷瘤小鼠模型，扶正益胃颗粒对顺铂处理荷瘤小鼠食欲及Ghrelin的影响

材料与方法

1.1实验动物与瘤株

   选用SPF级别的健康成年雄性C57BL/6小鼠40只，体重（20±2）g，鼠龄4-6周，湖南斯莱克景达实验动物有限公司[许可证号: SCXK（湘）2019-0004]。Lewis肺癌细胞株,由上海中科院细胞库提供。

1.2 药品、主要试剂及仪器

扶正益胃颗粒（湖南省天江制药有限公司加工的中药浓缩制剂，1包为1剂，相当于汤剂剂量。组成：白参10g，黄芪20g，白术10g，茯苓10g，陈皮12g，灵芝10g，木香8g，砂仁8g，佛手10g，法半夏10g，山楂20g，谷芽20g，炒麦芽20g，鸡内金20g，枳实12g，白花蛇舌草20g，半枝莲20g，甘草5g）；醋酸甲地孕酮片（生产企业：西安远大德天药业股份有限公司,批准文号：国药准字 H20040001；产品批号：05190601；产品条码：6933279510045）；顺铂（规格：6mL:30 mg(5 mg/mL)批号：160802）为江苏豪森药业股份有限公司产品。临用时加生理盐水配制成 2.5 mg/mL的顺铂溶液，作为治疗用药。Ghrelin酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司;恒温水浴锅（上海博迅实业有限公司医疗设备厂，型号：SSW-420-2S4）；倒置显微镜（OLYMUS，型号：BX51）；高速离心机（EPPENDORF，型号：5180R）；电子天平（中国凯丰集团，型号：KFS-400）；数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，型号：KQ-800DE）；旋转蒸发器（上海雅荣生化设备仪器有限公司，型号：RE-52AA）。

1.3分组、建模、给药

40只小鼠随机分到荷瘤组、顺铂组、扶正益胃颗粒组、醋酸甲地孕酮组，每组10只，将Lewis细胞株于1640培养基（含 10% FBS、1%双抗）中培养，0. 25%胰酶（含EDTA、酚红）消化，调整细胞密度约为2×107/mL，各组小鼠分别在右腋皮下接种Lewis肺癌细胞悬液0.2mL/只，荷瘤组生理盐水每隔一天0.2mL腹腔注射，余各组小鼠每隔一天分别予以2.5 mg/mL顺铂0.2ml腹腔注射，在此基础上荷瘤组和顺铂质组予以生理盐水0.2mL灌胃，参照《中药药理研究方法学》[6]，“以人与动物表面积折算等效计量比率表（小鼠20g,成人60kg）”计算，即扶正益胃颗粒组小鼠予以扶正益胃溶液浓度0.6g/mL，0.2mL灌胃，根据临床常用有效安全剂量范围及人和动物的体表面积计算法，醋酸甲地孕酮组小鼠予以醋酸甲地孕酮组悬浊液浓度4mg/mL，0.2mL灌胃：按照成人给药剂量160mg/kg，将醋酸甲地孕酮单体粉末用生理盐水稀释，小鼠给药浓度为 4mg/mL，连续给药7天。7天后，脱颈处死小鼠取胃。

1.4观察指标

1.4.1 饮食量：在治疗过程中，均喂养同一种饲料，每天记录小鼠的饮食量。

1.4.2 Ghrelin测定：将胃内容物用生理盐水冲洗干净，滤纸擦干胃组织，加9mL生理盐水研碎得浑浊液，以 4000r/min 的转速离心 15min，取上清液即得胃匀浆，放置于尖底EP管中，于-4°C 冷冻保存，备用于 ELISA 实验。按照ELISA试剂盒说明书进行操作，使用酶标仪在 450 nm波长处测定其吸光度（OD）。根据标准孔OD值，绘制标准曲线，计算胃匀浆样本中Ghrelin的含量。

1.5统计学方法

采用 SPSS 26.0 软件进行统计学分析，组间比较用t检验，实验结果用（x±s）表示，以P<0.05为差异具有统计学意义。

1.结果

2.1各组小鼠饮食量比较

给药前，四组小鼠组间饮食量差异无统计学意义（p>0.05），给药7天后，四组小鼠的饮食量均减少，顺铂组、扶正益胃颗粒组、醋酸甲地孕酮组与荷瘤组饮食量比较差异有统计学意义（p<0.05）；扶正益胃颗粒组、醋酸甲地孕酮组饮食量与顺铂组相比差异有统计学意义（p<0.05）；扶正益胃颗粒组较醋酸甲地孕酮组小鼠饮食量差异无统计学意义（p>0.05）。

2.2各组小鼠血清 Ghrelin含量比较

较荷瘤组，顺铂组 Ghrelin含量明显降低（p<0.05）；醋酸甲地孕酮组 Ghrelin含量明显升高（p<0.05），醋酸甲地孕酮组Ghrelin含量稍升高（p>0.05）。

2.讨论

化疗后食欲减退是肿瘤病人常见症状之一，症状单独出现时病情较轻施加干预易于改善，严重则可导致恶病质发生且不易改善，能量摄入不足以及肿瘤本身的过度消耗容易导致电解质紊乱、代谢异常、乏力等问题也会引发并发症出现，导致患者病情预后差、治疗依从性和耐受性降低、生活质量降低，改善化疗引起的食欲减退成为临床中不可忽略的问题[7]。Ghrelin是一种内源性脑肠肽，它可以增强食欲促进摄食、胃酸分泌、胃的排空、调节胃肠运动、食物消化吸收[8]，也可以与GHRH发挥协同作用促进GH释放增加食欲，通过激活神经肽Ｙ及食欲素神经元调节进食；抑制致炎细胞因子如TNF-ɑ、IL-6、IL-1的释放减轻炎症反应，减轻炎症因子阻断产生食欲兴奋剂NPY的神经元导致厌食，减少肌肉和脂肪分解代谢[9],动物实验表明顺铂会导致老鼠饮食量及血浆 Ghrelin减少，注射外源性Ghrelin可增加食欲[10]，rikkunshito 改善了食物摄入量的减少和血浆酰化ghrelin 水平增加食欲[5]。传统统中医学认为，食欲减退病机为脾胃损伤，脾胃升降失常，受纳失司，治疗原则为健脾和胃；《黄帝内经》曰：“有胃气则生，无胃气则死。”《伤寒明理论》：“脾者，土也，处四脏之中，为中州，治中焦，生育荣卫，通行津液。一有不调，则荣卫失所育，津液失所行，必以此汤温建中脏，是以建中名之焉。”重视脾胃功能在中医治疗中很重要，在恶性肿瘤改善食欲中也获得了很好的疗效，张敏妮收集肿瘤相关性食欲减退60例，随机抽签法随机分成观察组（附子理中汤组）和对照组（甲羟孕酮组）各30例证明认为运用附子理中汤治疗脾阳虚型肿瘤相关性食欲减退是一种安全、有效的方法

[11]，涂轩把40例恶性肿瘤化疗患者分为常规组与观察组，证明香砂六君子汤能调节肿瘤患者化疗期间食欲调节因子水平，影响肠道微生态，使化疗患者食欲调节因子分泌及肠道菌群趋于稳态[12]；翟向阳通过荷瘤小鼠化疗模型证明慈济化癌保生II号方能显著改善化疗所导致的胃肠黏膜的病理损伤状况，减轻氧自由基对胃肠道的攻击，调节胃肠道激素分泌，并通过影响下丘脑中枢神经系统摄食区域的食欲调节因子及外周食欲调节因子来缓解化疗后的胃肠道毒副反应，从而缓解肿瘤化疗所导致的胃肠道毒副反应[13]；本研究扶正益胃颗粒以益气健脾，和胃消积为原则，通过构建荷瘤小鼠模型，探讨扶正益胃颗粒对顺铂处理荷瘤小鼠食欲及Ghrelin的影响，方中白参、黄芪补中益气健脾，共为君药。白术、茯苓、灵芝益气扶正，健脾和胃；木香、砂仁、佛手行气导滞，调和脾胃；山楂、炒谷芽、炒麦芽、鸡内金具有健脾消积之功，共为臣药。枳实破气散痞，消积，陈皮具有行气健脾，调中开胃，燥湿化痰之功，法半夏燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结，白花蛇舌草、半枝莲清热解毒消瘤，均为佐药。甘草益气和中，调和诸药，为使药。实验结果：给药前，四组小鼠组间饮食量差异无统计学意义（p>0.05），给药7天后，四组小鼠的饮食量均减少，顺铂组、扶正益胃颗粒组、醋酸甲地孕酮组与荷瘤组饮食量比较差异有统计学意义（p<0.05）；扶正益胃颗粒组、醋酸甲地孕酮组饮食量与顺铂组相比差异有统计学意义（p<0.05）；扶正益胃颗粒组较醋酸甲地孕酮组小鼠饮食量差异无统计学意义（p>0.05）；较荷瘤组，顺铂组 Ghrelin含量明显降低（p<0.05）；醋酸甲地孕酮组 Ghrelin含量明显升高（p<0.05），醋酸甲地孕酮组Ghrelin含量稍升高（p>0.05）。

综上所述，扶正益胃颗粒可以增强顺铂处理荷瘤小鼠食欲，其机制可能与提高Ghrelin含量有关。

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基金项目：常德市科技计划一般项目，项目编号：2020S048

第一作者：郑蔚婵，女，硕士研究生，研究方向：恶性肿瘤的中医药防治研究。

通讯作者：李辉，男，硕士研究生导师，副主任医师，研究方向：恶性肿瘤的中医药防治研究。邮箱：37540225@qq.com。