Kv1.3离子通道在急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及与药物相关性的研究

Kv1.3离子通道在急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及与药物相关性的研究

黄龙平1，李奇1，叶艾珂2，盛秋慧1，罗德彦1，覃思尚1，蓝苑菱1，冯海1，通讯作者：叶芳1

 1：广西医科大学；2：佑棵智能科技（上海）有限公司

摘要

目的：探究Kv1.3表达与药物的相关性及其在急性淋巴细胞白血病细胞Jurkat中表达。方法：分析Kv1.3的mRNA含量与药物敏感性组学库中药物的相关性，并采用蛋白质印迹法检测Jurkat细胞的Kv1.3蛋白表达情况。结果：Kv1.3与其同家族的钾离子通道Kv1.2的mRNA水平对药物敏感具有高度相似性，并且Kv1.3通道在Jurkat细胞中高表达。结论：Jurkat细胞高表达Kv1.3通道，为Jurkat细胞的药敏实验提供理论依据。

关键词：Kv1.3通道；Jurkat细胞；T-ALL

急性T淋巴细胞白血病在成人中占ALL病例总数的25% [1]，T-ALL因常规治疗疗效差，长期生存率低，预后差且易复发，成为临床治疗的一大难题。Kv1.3通道是由6个跨膜部分组成的一类Shaker型钾离子通道，在多种肿瘤内表达，并成为多种肿瘤治疗的新靶标。本文分析了Kv1.3的mRNA水平与药物相关性，并采用蛋白质印迹法分析Kv1.3在Jurkat细胞中表达情况。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1 细胞株与试剂

Jurkat细胞购自中国科学院细胞库。RPMI Medium 1640培养基（美国Gibco公司）；胎牛血清（以色列Biological lndustries）；一抗Kv1.3（以色列Alomone Labs）；BCA蛋白浓度测定试剂盒、RIPA裂解液(碧云天生物技术有限公司）；ECL化学发光底物（兰杰柯科技有限公司）。

1.1.2 实验仪器

电泳仪和转膜仪（北京六一生物科技有限公司）；iBright™成像仪（Invitrogen公司）。

1.2实验方法

1.2.1 采用药物敏感性基因组学数据库分析钾离子通道Kv1.3及Kv家族中Kv1.1和Kv1.2钾离子通道的mRNA含量和库内200余种抗肿瘤药物的相关性。p < 0.05为有统计学差异。

1.2.2细胞培养

Jurkat细胞用RPMI 1640培养基于培养箱（37℃、5%二氧化碳）中培养，调整细胞浓度为1.5×105个/mL，培养48 h。

1.2.3Western Blot检测Kv1.3蛋白表达

RIPA裂解液提取Jurkat细胞蛋白，BCA法定量，沸水浴蛋白变性，取等量蛋白电泳，电泳后转移至PVDF膜上，封闭液（含5%脱脂奶粉）室温封闭，0.5 h后加入Kv1.3和GADPH一抗，4℃孵育过夜，洗涤3次，加入二抗，室温孵育2 h，加入ECL试剂显影曝光，测定Jurkat细胞中Kv1.3的表达情况。

2结果

抗癌药物敏感性基因组学分析结果表明（见图1），Kv1.3的mRNA水平与药物相关性与Kv1同家族且具有同源结构的Kv1.2通道相似度较高，如促烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂与Kv1.2和Kv1.3均呈负相关。但Kv1.1的药物相关性与Kv1.3有较大差异，例如非ATP竞争性抑制剂与Kv1.1呈显著性正相关，但与Kv1.3无显著性相关性。

图1Kv1.3、Kv1.1、Kv1.2与药物相关性分析

Jurkat细胞Kv1.3表达水平：结果如图2所示，内参蛋白GADPH在36 kDa左右，Kv1.3蛋白清晰可见，大小在70 kDa左右，证明Jurkat细胞高表达Kv1.3。

图2  Jurkat细胞中Kv1.3蛋白表达

3 讨论

Kv1.3通道是多种肿瘤的潜在治疗靶点，例如B细胞慢性淋巴细胞白血病、乳腺癌、胰腺导管癌、胶质细胞瘤、肺癌等[1, 2]。探究Kv1.3的mRNA水平和同家族成员蛋白Kv1.1和Kv1.2与多种抗肿瘤药物的相关性，可以为药物对Kv1.3通道的作用机制及效应的研究打下基础。本研究分析了药物敏感性基因组学库中200余种药物与Kv1.3及其同源通道Kv1.1、Kv1.2的相关性，并检测了本课题组收集的Jurkat细胞中Kv1.3表达情况，结果证实Jurkat高表达Kv1.3蛋白，为T-ALL治疗提供了有潜力的、新的分子靶点，及后续Jurkat细胞的药敏实验提供了实验基础。

基金项目：广西医科大学“大学生创新创业训练计划”项目No. 202210598036, S202210598060, 202210598004, 202210598011, 202110598003, and 202210598050, 未来学术之星项目No. WLXSZX22121。

参考文献:

[1].赖玉, sCD40L对白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡影响的研究, 2022, 遵义医科大学.

[2].李艳灵等, 蝎毒肽作为Kv1.3离子通道阻滞剂研究进展. 世界科学技术-中医药现代化, 2021. 23(12): 第4632-4640页.