大肠埃希菌ESBLS菌株检出及其耐药性分析

大肠埃希菌ESBLS菌株检出及其耐药性分析

邓克林

四川省第一退役军人医院检验科  四川 成都 610000

【摘要】目的 了解临床分离大肠埃希菌中产ESBLS株的检出情况及其耐药性，为临床合理使用抗生素提供参考。方法 收集了某院2021年1月-12月间临床分离到的大肠埃希菌，并用贝克曼MicroScan WalkAway 40全自动细菌鉴定药敏分析仪并使用配套试剂进行鉴定和药敏试验，对于结果为ESBLS阳性株按照美国临床和实验室标准化研究所（CLSI）推荐方法进行ESBLS确认。结果 该院在12个月内从患者送检非粪便标本中共分离出大肠埃希菌剔除重复菌株后剩余233株,其中产ESBLS菌株111株，检出率为（47.6%）。产ESBLS菌株主要分布科室为泌尿外科28株占25.2%和老年医学科25株占22.5%等，主要标本类型为尿液61株占54.9%、痰液19株占17.1%、血液11株占10.0%等。从药敏结果看产ESBLS菌株对除碳青霉烯类抗生素的耐药率明显高于非产ESBLS株，尤其对青霉素类、头孢类、喹诺酮类、磺胺类的抗生素耐药率较高，而对头孢西丁、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星耐药率较低，往往呈现出多重耐药现象，造成医院内的感染传播。结论 在治疗ESBLS菌种感染时，应根据药敏报告选择敏感药物治疗，同时要做好院感监测，防止院内耐药菌株传播。

【关键词】大肠埃希菌  超广谱β-内酰胺酶  耐药菌   医院感染

Detection and drug resistance analysis of ESBLS strain of Escherichia coil

      Deng Kelin,Clinical laboratory,Sichuan First Veterans Hospital

【Abstract】Objective To investigate the detection and drug resistance of ESBLS strains isolated from clinical escherichia coil,and to povide

reference for rational clinical use of antibiotics.Methods Clinical escherichia coli isolated from a hospital form January to December 2021 were collected and used beckman MicroScan WalkAway 40 Automatic bacterial identification drug sensitivity analyzer and the use of supporting reagents for identification and drug sensitivity test,ESBLS positive strains according to the clinical and laboratory Standardization Institute(CLSI)recommended methods for ESBLS confirmation.Results A total of 233 escherichia coli strains were isolated  from non-defecate samples of patients within 12 months,including 111STRAINS producing ESBLS,with a detection rate of47.6%.ESBLS producing strains were mainly

distributed in urology department(25.2%,28strains)and geriatrics department(22.5%,25strains).The main specimen types were urine(54.9%,61strains),sputum(17.1%,19strains)and blood (10.0%,11strains).Seeproducing ESBLS strains form the result of drug susceptibility of carbon removal penicillium alkene antibioticresistant rate significantly higher then producing ESBLs strain,especially to penicilin, cephalosporin,quinolone,sulfa antibiotics resistant rate is higher ,and of cefoxitin,throat raschig/he lin temple,cephalosporins relief ketone/shu tenple ,amikacin resistant rate is low,often oresent the phenomenon of multipe drug resistance,to build Thespread of infection in hospital.Conclusion in the treatment of treatment of ESBLS infection,sensitive drugs should beselected according to the drug susceptibility report,and nosocomial should be done to prevent the spread of durg-resistant strains in hospital.

【Key word】Escherichia coli, ultra-broad-spectrum B-lactamase resistant bacteria ,nosocomial infection.

大肠埃希菌是临床感染的常见条件致病菌，也是我们分离的革兰阴性杆菌中最常见的一种菌。随着我们对广谱抗生素大量使用，细菌在抗生素选择性压力下产生了耐药。由其引起感染呈现类型多样化，感染部位也较广泛，且耐药机制种类繁多，变化迅速，其中产β-内酰胺酶是其对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制〔1〕。而ESBLS引起的耐药，在全球范围内都有传播，目前已知ESBLS型别已超过400种，大多数是由于基因的突变引起〔2〕为了解大肠埃希菌产ESBLS菌株感染和耐药情况，对某院2021年1月-12月从患者非粪便标本中分离大肠埃希菌剔除重复菌株后剩余的233株菌进行ESBLS的确认检测及药敏分析，为临床合理使用抗生素提供数据支持。

一材料与方法

1.1菌株来源 收集2021年1月-12月某院临床送检的尿液、分泌物、痰液、肺泡灌洗液、血液、脓液、组织等标本，剔除重复菌株后共分离大肠埃希菌233株，其中产ESBLS菌株111株

1.2仪器与试剂 上海力申HF160W CO2培养箱、贝克曼MicroScan WalkAway 40全自动细菌鉴定药敏分析仪、法国梅里埃Bac TALERT+3D血培养仪、上海力申Heal Force HP safe 1200LC 生物安全柜、郑州安图MH平板、中国蓝琼脂平板、成都瑞奇哥伦比亚血琼脂平板、Oxoid药敏试验纸片等。

1.3质控菌株 大肠埃希菌ATCC25922作为阴性质控菌株，肺炎克雷伯菌ATCC700603作为阳性质控菌株，均购自卫建委临床检验中心。

1.4细菌鉴定及药敏试验 微生物收到临床提供的标本后，进行细菌培养和分纯鉴定。用贝克曼MicroScan WalkAway 40全自动细菌鉴定药敏分析仪及配套试剂对分纯阳性菌株进行鉴定和药敏试验。对于鉴定出产ESBLS菌株，我们按照CLSI推荐方法纸片琼脂扩散法进行确认。用头孢他啶（30ug）、头孢他啶/克拉维酸（30ug/10ug）的组合，当加入了酶抑制剂克拉维酸后，抑菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈比较≥5mm判断为ESBLS阳性。

1.5数据处理 采用了Whonet 5.5和杭州创业软件系统

二结果

2.1各科室大肠埃希菌中产ESBLS菌株分布情况 见表1，2021年全年剔除重复的菌株后共分离产ESBLS菌株111株，由表可知检出数最多为泌尿外科占25.2%，其次为老年医学科和肾内科占22.5%和15.3%。

          表1某院2021年全年产ESBLS大肠埃希菌临床分布情况

临床科室                 检出数量                     占比

泌尿外科                    28                         25.2%

老年医学科                  25                         22.5%

肾内科                      17                         15.3%

内分泌科                    10                          9.0%

重症医学科                  7                           6.3%

中医科                      6                           5.4%

消化内科                    5                           4.5%

呼吸内科                    5                           4.5%

妇科                        4                           3.6%

普外科                      3                           2.7%

神经内科                    1                           0.9%

2.2不同种类标本大肠埃希菌ESBLS菌株分布 见表2 由表可知大肠埃希菌产ESBLS菌株主要感染部位为尿路占54.95%，其次为痰液和血液分别占17.12%和9.9%

              表2某院大肠埃希菌ESBLS菌株的标本类型分布

标本类型                  检出数量                     占比

尿液                        61                         54.95%

痰液                        19                         17.125

血液                        11                         9.9%

脓液                        10                         9.0%

组织                        6                          5.4%

分泌物                      4                          3.6%

2.3产ESBLS菌株与非产ESBLS大肠埃希菌对抗生素耐药率比较 见表3

            表3产ESBLS与非产ESBLS大肠埃希菌耐药率比较

抗菌药物                   产ESBLS耐药率            非产ESBLS耐药率

头孢唑林                      100%                       25.1%

头孢呋辛                      100%                       14.3

头孢吡肟                      75.3%                      0

头孢曲松                      100%                       9.5%

头孢他啶                      62.8%                      5.0%

头孢西丁                      12.5%                      4.7%

庆大霉素                      43.75%                     28.57%

氨苄西林                      100%                       82.6%

头孢哌酮/舒巴坦               18.75%                      0

哌拉西林/他唑巴坦             12.5%                      4.7%

替卡西林/棒酸                 42.53%                     9.52%

美罗培南                        0                         0

亚胺培南                        0                         0

阿米卡星                       6.23%                     3.76%

复方新诺明                     76.25%                    66.66%

左氧氟沙星                     71.25%                    57.14%

环丙沙星                       77.5%                     61.9%

米诺环素                       12.5%                      0

三讨论 本研究结果显示，大肠埃希菌产ESBLS菌株检出率为47.6%，与其他地区报道略有差异。 欧洲统计资料显示，大肠埃希菌的ESBLS检出率约9.8%，在美国的检出率约6%[3].中国大肠埃希菌产ESBLS耐药菌株形式严峻，这与我们不合理使用抗生素有一定关系。而大肠埃希菌产ESBLS菌株之所以呈快速增长趋势，这与其细菌本身特性有关，因为ESBLS菌株的编码基因位于质粒上，可通过转化、转导、接合等方式使耐药基因在细菌间传递而造成医院交叉感染[4]，所以说ESBLS菌株是水平传播方式，它的传播速度就非常快。结果显示本院的ESBLS菌株主要分布在泌尿外科（25.2%）、老年医学科（22.5%）、肾内科（15.3%）、内分泌科（9%）等。主要的标本类型为尿液，引起感染多为尿路感染。这与有关研究表明，产ESBLS大肠埃希菌感染的主要危险因素有反复使用抗生素、留置尿管、反复住院、老年人、基础疾病、（糖尿病、免疫功能低下等）、呼吸机辅助通气等[5]相符合。本结果显示了ESBLS菌株对除亚胺培南和美罗培南外其他抗生素都有不同程度的耐药，其中对头孢西丁（12.5%）、头孢哌酮/舒巴坦（18.75%）、哌拉西林/他唑巴坦（12.5%）、阿米卡星（6.23%）耐药率比较低，可作为经验用药考虑。而对其他种类的抗生素如青霉素类、头孢类、喹诺酮类抗生素耐药率比较高，在60%以上。所以说碳氢霉烯类、头孢西丁以及β-内酰胺酶抑制剂复合物、阿米卡星是治疗产ESBLS菌株的有效抗菌药物[6]。而当前，ESBLS菌株的种类和数量正以惊人的速度在发展，至少有150种已经在世界各地流行，其中TEM/SHV型ESBLS在临床上检出率较高[7]。国内外资料显示，肠杆菌科细菌中ESBLS携带常见于肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌，从遗传特征看，现今流行的ESBLS菌株大多源于TEM-1、TEM-2和SHV-1型突变[8]。而我们在关注ESBLS菌株耐药的同时，还更应该关注其引起的院内感染，因为ESBLS菌株是由质粒介导，属于水平传播方式，具有很强传播性，可以使敏感的菌株变为产β-内酰胺酶的耐药菌株，同时ESBLS菌株可通过医护人员的手在患者之间传播，容易引起医院内感染[9]。总的来说，大肠埃希菌ESBLS菌株的耐药普很广，对一些反复严重感染的患者，药敏可选择余地很小，给临床治疗带来了很大的难度，所以一定要以预防为主，严格检测，以实验结果为依据选择药物，防止院内耐药菌株的传播[10]。

1 Chaibi EB,eduzzi J P,Farzaneh S,et al.Clinical inhibitor-resistant mutants of theβ-lactamase TEM-1 at amino-acid position 69.K-inetic analysis and modeling[J].Biochim biophys Acta,1998,1382:38

2 Jacoby GA,Munoz-Price LS.The New Bete-Lactamases[J].N Eng J Med,2005,352(4):380-391

3 Harris AD,Kotetishvili M,Shurland S,et al.How Impor-tant Is Patient-to-Patient Transmission in Extended-Spec-trum Beta-Lactamase Escherichia Coli Acquisition[J].Am J Infect Control,2007,35(2):97-101

4 Colodner R. Extended-spectrum beta-lactamases:a challenge for clinical microbiologists and infection control specialists[J].Am J Infect Cntrol,2005,33(2):104-107

5 周华，李光辉，陈佰义，等。中国产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科细菌感染应对策略专家共识[J]。中华医学杂志，2014,94（24）:1847-1849

6 李国宏。对673株大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶的耐药分析[J]。医学检验与临床，2009,20（6）15.

7 龙北国，江丽芳。高级医学微生物[M]。北京：人民卫生出版社，2003,90

8 Branger C,Zamfir O,Geoffroy S,et al.Genetic back-ground of escherichia coli and extenged-spectrum beta-lactamase type[J].Emerg Infect Dis,2005,11(1):54-61

9 孙自镛，程黎明，产超广谱β-内酰胺酶49株细菌耐药基因调查[J]。中华检验医学杂志，2006,29（9）：793-796

10 Moustaoui N,SouKri A,Elmdaghri N,et al.Molecular biology of ex-tend-spectrumβ-lactase-producing Enterobacteriaceae respo-nsible for digestive tract colonization[J].Hosp Infect,2004,57:202