ELISA法在诊断梅毒螺旋体感染中的临床检验价值

ELISA法在诊断梅毒螺旋体感染中的临床检验价值

高娟娟1,曲德鑫1,王颖1, 朱京伟2,孙超1,李磊1 

1.烟台国际旅行卫生保健中心（烟台海关口岸门诊部）山东烟台264000

2.烟台毓璜顶医院  山东 烟台264000

摘要：目的：探讨ELISA法应用于诊断梅毒螺旋体感染的价值。方法：纳入2020年9月~2022年9月期间的400例疑似梅毒螺旋体感染者，采集静脉血，分别采用ELISA法及TPPA法检验，将TPPA法的检验结果作为金标准，观察ELISA法对梅毒螺旋体感染诊断的敏感度、特异度及准确度。结果：ELISA法诊断梅毒螺旋体感染的敏感度为92.62%，特异度为87.77%，准确度为89.25%。结论：ELISA法诊断梅毒螺旋体具有准确、快速的优势，是大批量标本的重要筛查方法。

关键词：梅毒螺旋体；酶联免疫吸附试验；快速血浆反应素试验；甲苯胺红不加热血清试验；

梅毒螺旋体感染人体可造成患者罹患梅毒，该病作为性传播疾病，可通过性接触、血液传染及母婴垂直传播等多种途径传播，其特点在于对患者造成的危害性较大且具有较强的传染性[1]。梅毒螺旋体感染人体后，人体在一系列血清免疫反应变化下产生抗心磷脂抗体和抗密螺旋体，快速血浆反应素试验（RPR）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）基于前者进行检测，存在一定假阳性的风险[2-3]。酶联免疫吸附试验（ELISA）法使用梅毒螺旋体的基因工程抗原，应用于梅毒螺旋体感染的诊断中具有较高的敏感度和特异度，因此在检验科得到了广泛的应用[4]。本次研究主要探讨ELISA法应用于诊断梅毒螺旋体感染的价值，为实践工作提供一定参考，报道如下。

1、资料与方法

1.1 一般资料

2020年9月~2022年9月期间的400例疑似梅毒螺旋体感染者，其年龄为3~65岁、平均（43.3512.28）岁。最终确诊梅毒螺旋体感染122例，其中一期、二期、三期分别35例、51例、14例。

1.2 方法

ELISA试剂盒来源于广州中山生物公司，所使用到的仪器包括全自动酶标仪、洗板机、振荡器及水浴箱，采用双抗原夹心法，操作时根据说明书操作，根据试剂盒所提供的标准来对结果进行判定，在2d内完成对标本的复检。

1.3 观察指标与评价标准

将梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）检验结果作为金标准，观察ELISA法诊断梅毒螺旋体感染的敏感度、特异度、准确度。

2、结果

ELISA法诊断梅毒螺旋体感染的敏感度为92.62%（113/122），特异度为87.77%（244/278），准确度为89.25%（357/400），见表1。

表1 ELISA法与TPPA的检验结果对照

3、讨论

备血时及产前进行梅毒螺旋体感染情况的筛查对切断梅毒螺旋体传播途径意义重大。梅毒螺旋体在低温下及体外难以存活，但是漏检的发生对输血后疾病的传播不利，因此做好对梅毒螺旋体感染的检验是非常有必要的。

梅毒螺旋体侵入人体4w后，可从感染者的血清中发现抗心磷脂抗体和抗密螺旋体。抗心磷脂抗体也被称为反应素，可以与脂质发生反应，其特点在于没有保护作用，因此只能应用于梅毒的血清学诊断。抗密螺旋体在补体存在时可溶解、杀死梅毒螺旋体，可调理吞噬细胞。梅毒潜伏期时就可以产生梅毒螺旋体抗体，一期梅毒是主要是IgM型，二期时可见IgM型和IgG型，三期梅毒的毒性降低，以IgG型居。梅毒螺旋体抗体在整个病程中的免疫作用不明显，当梅毒患者治愈后再次感染时，梅毒螺旋体抗体没有预防再次感染的作用，但是梅毒螺旋体抗体的灵敏度和特异度都很高，即便是晚期梅毒或者是经过治疗后的梅毒患者血清中仍然可见梅毒螺旋体抗体阳性[5-6]。反应素则可见在梅毒一期增加，当二期时达到高峰，三期时则出现一定降低。

TRUST和RPR可用于对反应素的检测，二者长期以来应用于血站对献血者的筛查；TPPA则可应用于对后者的检测，该方法主要是应用于阳性样本的确认。TRUST和RPR是对梅毒螺旋体感染后免疫系统产生反应素而进行的非梅毒螺旋体抗原的检测方法，该方法在梅毒螺旋体的筛查和判定疗效时应用较多，其缺陷在于没有抗原特异性，一些非梅毒螺旋体感染的患者同样可产生反应素，由此可能造成误诊[7]。TPPA检验过程中需要反复吸液，完成后对结果进行判断时需要采用肉眼的方法进行判断及解释，不适合大批量检测。

ELISA法当前在检验科得到了广泛的应用，这一方法将做好标记的抗体或者抗原与载体附着，利用酶标过程记录目标物质，再利用洗涤去除其他成分，完成后对酶标记的反应产物进行光谱分析，测定吸收值以实现量化分析。ELISA法应用于梅毒螺旋体感染的诊断中，其特点在于操作简便，对梅毒螺旋体感染的诊断准确率高。ELISA法应用于梅毒特异性抗体的检测，从方法学上而言比TRUST更优，其具有较高的敏感度及特异度。ELISA法应用于梅毒螺旋体抗体的检验中，可实现自动化操作，可检测大批量样本，采用仪器对结果进行判断，这提高了诊断结果的准确性。

梅毒螺旋体的筛检试验允许假阳性的存在，但是要求最大程度地减少假阴性的发生。就灵敏度上，梅毒螺旋体感染后，抗秘螺旋体抗体的产生要比磷脂抗体的出现时间更早，且常见一些晚期梅毒患者转阴的情况[8]。上述原因造成一期梅毒的早期及三期梅毒采用TRUST和PRP进行检验的效果时常不理想。除此以外TRUST和PRP对神经梅毒和潜伏期梅毒的敏感性也不够高，作为筛选试验的局限性较多。

实践过程中，不能将TRUST应用于梅毒螺旋体感染的单一筛检试验，但是ELISA法可以。从本次研究结果上看来，ELISA法诊断梅毒螺旋体感染的敏感度为92.62%（113/122），特异度为87.77%（244/278），准确度为89.25%（357/400），证实该方法应用于梅毒螺旋体感染的临床检验中具有较高的敏感度，该方法的应用可减少假阴性的发生，适合应用于对梅毒螺旋体感染的筛查中。对ELISA法判定为阳性的，可进一步采用TPPA法进行验证从而减少误诊的发生。

综上所述，ELISA法诊断梅毒螺旋体具有准确、快速的优势，是大批量标本的重要筛查方法。

参考文献

[1] 职建军. ELISA联合TRUST在梅毒螺旋体感染患者中的诊断效果及效能ROC曲线研究[J]. 临床研究,2021,29(8):137-138.

[2] 邬冬冬. ELISA法在诊断梅毒螺旋体感染中的临床意义[J]. 首都食品与医药,2021,28(11):86-87.

[3] 李春树. 酶联免疫吸附试验法与甲苯胺红不加热血清试验法诊断梅毒螺旋体感染的临床价值比较[J]. 中国民康医学,2020,32(19):98-99.

[4] 宋胜伟,曾茜茜. 酶联免疫吸附试验法与甲苯胺红不加热血清试验法检测梅毒螺旋体感染的临床价值[J]. 医疗装备,2020,33(11):66-67.

[5] 郭志飞. 酶联免疫吸附试验诊断梅毒螺旋体感染的临床价值[J]. 中国实用医药,2022,17(4):91-94.

[6] 李荻菲,陈会超,金晓媚,等. 云南省2020年1-6月新报告HIV/AIDS的HCV与梅毒螺旋体感染状况分析[J]. 中华流行病学杂志,2021,42(11):1983-1988.

[7] 闫怡,杨宁,董潇阳,等. 梅毒螺旋体TpF1蛋白的克隆表达及鉴定[J]. 中国病原生物学杂志,2021,16(10):1134-1138.

[8] 贾易萌. TP-ELISA和CLIA在梅毒螺旋体抗体检测中的作用及准确性分析[J]. 皮肤病与性病,2021,43(4):499-500.