沙门氏菌的检验方法与注意事项

沙门氏菌的检验方法与注意事项

李春容

乐山市犍为县人民医院，四川省乐山市，614400

在日常微生物检验中，沙门氏菌比较常见，是一种致病性细菌，国家规定在每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌，所以在检验沙门氏菌时，对试剂与培养基有很高的要求，下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍！

一、沙门氏菌检测的原因和意义

根据相关统计显示，我们国家因细菌性食物中毒的人中，有70%-80%左右的人是通过沙门氏菌造成的。人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物，就会造成细菌性感染，以此在毒素的影响下产生食物中毒，造成伤寒、胃肠炎及副伤寒。而且沙门氏菌的传播途径较多，肉、蛋和其他食物，从加工至销售的整个过程当中都极易引发感染情况，所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。

二、沙门氏菌的检验

（一）前增菌(无选择性)

BPW（缓冲蛋白胨水）属于一种比较常见的增菌培养基，不包括任何抑制物质，有助于修复受损的沙门氏菌。促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生理状态。

（二）选择性增菌

TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）内含有硫代硫酸钠，结合四硫磺酸钠，能够对肠道共生菌进行有效抑制，而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌，可以在这一培养基当中生长繁殖；煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖，而伤寒沙门氏菌依旧可以生长。SC（亚硒酸盐胱氨酸增菌液）能够对其他和伤寒沙门氏菌进行选择性增菌，其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸，促使亚硒酸与硫的复合物生产，对细菌硫的代谢产生干扰，进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌的繁殖生长。

（三）分离培养基(选择性)

①BS（亚硫酸铋琼脂）内含亚硫酸铋指示剂，可对大肠菌群、革兰氏阳性菌进行抑制，但不会对沙门氏菌的繁殖产生影响；其他沙门氏菌、伤寒杆菌可以借助葡萄糖，还原亚硫酸铋，使其形成硫酸铋，使黑色菌落附近有黑棕色的环，对光可看到金属光泽。BS的压力和温度不可过高，避免选择性下降，需在使用前配制，放置阴暗处储存，48小时后丧失选择性，储存不合理会造成色浅，表示效果开始减弱，联合TTB、SC使用能够提高检出率。

②HE琼脂内的溴麝香草酚兰、胆盐、去氧胆酸钠等，可对革兰氏阳性菌繁殖进行抑制；将檬酸铁铵与硫代硫酸钠运来检验H2S的形成，导致菌落中心为黑色；酸性复红及溴麝香草酚兰属于pH指示剂，发酵糖产酸的菌落表现橙黄色，不发酵糖菌落表现蓝绿色。HE不可以高压灭菌，开水煮应在1分钟之内，通过水浴方式冷却，可以储存24小时。

③通常在对沙门氏菌进行快速筛选、分离时，采用沙门氏菌显色培养基。其原理主要是通过沙门氏菌显色基团和特异性酶的独特反应，游离出色原，进而将沙门氏菌于培养基上表现出相应的颜色，而其他肠道杆菌颜色则不一样。

三、沙门氏菌检验的注意事项

（一）前增菌和二次增菌必不可少

食物内含有的沙门氏菌通常不多，且会同时存在很多菌种，前增菌能够恢复受损菌，而增菌能够对部分杂菌的繁殖进行有效抑制，因此通过前增菌及增菌实施筛选、培养操作，能够提高后续培养分离的检出率。

（二）注意典型或可疑沙门氏菌菌落

XLD及HE：在XLD及HE琼脂上，不典型的沙门氏菌表现为黄色，存在或没有黑色中心。XLD及HE平板通过24h左右的培养之后，无典型沙门氏菌菌落，就应选择两个或多个不典型的沙门氏菌菌落。BS琼脂：部分不典型菌株呈现为绿色，附近培养基有或没有轻微发暗。倘若在BS平板培养24h之后，未形成典型菌落，就不选择菌落，继续在平板上培养24h。倘若培养48h之后，依旧未形成典型、疑似菌落，就应选择两个或多个不典型的菌落。

（三）TSI应制备为高柱斜面

倘若H2S呈较高，或是可能将试管塞顶开。在TSI上，典型沙门氏菌斜面表现为红色，底端表现为黄色，可形成气体，绝大多数生成H2S，琼脂呈黑色。但是针对乳糖阳性的沙门氏菌，其斜面也会表现为黄色，所以不可以只针对三糖铁培养结果，就确定是沙门氏菌。

（四）须选择多种选择性培养基进行筛选

显色培养基虽然整体选择性较强，但是实验者也不可以仅仅考虑TSI 特征与选择性培养基相符，而未完成重要的生化反映及血清学鉴定的状况下，就提交结果，这种做法极易造成结果呈假阳性。

（五）血清学鉴定是沙门氏菌检验的重要方式

检测血清的过程当中，应采用不超过24小时的纯菌，在要求时间内查看结果，并进行自凝实验。放在凝集差的室温中24-48小时，或是传代1次进行凝集，注意不可放置在冰箱中，这样可能会改善凝集状况。倘若实验室条件允许，建议应购入泰国和丹麦等地的血清，如使用国内血清，应尽可能采用两个厂家的血清，以便相互验证。

（六）应以生化试验结果为主判定血清学

采用多价血清开展实验，直接略过生化试验是错误的。由于血清学的作用原理为抗体结合抗原，不属于沙门氏菌的微生物，也极可能含沙门的类似抗原，这种操作易造成假阳性，所以实验人员在鉴定过程中，应首先开展生化试验，然后根据实验结果开展

血清学鉴定。

（七）如只需鉴定某个菌株，只做O多价和H多价血清即可

倘若需鉴定某一菌株到底属于哪类沙门氏菌，就应开展血清学分型实验，由多价血清做到O、H抗原的单因子，之后根据国家出台的食品安全相关标准文件，找到相应的沙门氏菌名。

以上就是本文对沙门氏菌的检验方法与注意事项作出的简单介绍，希望可以给实验人员提供帮助！