三种脂肪组织脱脂法的应用比较

三种脂肪组织脱脂法的应用比较

刘林华

(新疆维吾尔自治区人民医院病理科,乌鲁木齐，830001)

摘要：目的：探讨三种脱脂法对脂肪组织脱脂效果的比较。材料与方法：我院外科手术切除的乳腺组织，大网膜，脂肪化淋巴结组织各30例。运用3种脱脂法进行脱脂结果：常规脱水法脱水不良，制片困难。丙酮热浴组制片优良率为80%，改良脱水法制片优良率为100%。结论：通过三种脱脂法比较，改良脱水机法效果最好。

关键词：常规脱水脱脂，丙酮热浴，改良脱水机

中图分类号：R361.2

文献标识码：B

人体脂肪组织结构特殊，含大量油脂和水分，在日常工作中，若脱水脱脂不彻底，就会造成制片困难，染色不佳，诊断医师不能对疾病做出准确的判断，无法为临床提供更直观的理论依据。为了改善这种现象，我院病理科对常规脱水机脱脂法；丙酮热浴按压脱脂法，改良脱水机脱脂法，三种脱脂方法进行了深入探讨。现介绍如下：

1.资料与方法

1.1.一般资料

选取2022年1月至2023年1月新疆维吾尔自治区人民医院外科手术切除的乳腺组织，含脂肪大网膜，脂肪化淋巴结组织90例，乳腺组织30例，含脂肪大网膜30例，脂肪化淋巴结30例。均将三类标本常规取材，包埋，切片，染色，随后显微镜下观察制片效果。

1.2. 试剂与材料 10%中性福尔马林，丙酮，75%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，100%乙醇，二甲苯，石蜡，纱布。

1.3. 设备  新苗恒温水浴箱，徕卡全封闭脱水机，徕卡包埋机，徕卡2235切片机，徕卡染色封片一体机。

1.4.  方法  （1）取材和分组:分别将乳腺组织，含脂肪大网膜，脂肪化淋巴结组织进行常规取材，各取30块，其中乳腺，大网膜组织取材大小为：2.5cm×1.5cm×0.2cm。三种组织均固定于10%中性福尔马林中15小时，三类标本各取10块一组，常规脱水机处理的组织为A组，丙酮热浴处理后的组织为B组，改良脱水机处理的组织为C组。（2）将B组组织块提前从固定液中捞出，放入玻璃广口瓶中，倒入丙酮，并置于65℃恒温水浴箱内，待丙酮沸腾后开始计时30min，时间到后，取出组织，用纱布按压出多余水分和油脂。（3）把A,B,组放入常规脱水机（表1），C组放入改良脱水机（表1），两台机器同时开始脱水，均用同一台包埋机包埋，一台切片机切片，切片厚度均为4μm，展片温度均为42℃，将完成的切片统一置于65℃烤箱内，烤片1h后，进入染色封片一体机中进行染色，封片。

表1脱水机程序

操作顺序     常规脱水机                      改良脱水机

1     10%中性福尔马林120min     10%中性福尔马林120min

2     75%乙醇60min                75%乙醇60min

3     85%乙醇60min                85%乙醇60min

4     95%乙醇60min                95%乙醇60min

5     95%乙醇60min                95%乙醇60min

6     100%乙醇60min               100%乙醇60min

7     100%乙醇60min    100%乙醇和二甲苯（1：1）混合液90min

8     二甲苯 40min      100%乙醇和二甲苯（1：1）混合液60min

9     二甲苯40min                  二甲苯 40min

10    浸蜡60min                    浸蜡60min

11    浸蜡40min                    浸蜡40min

12    浸蜡40min                    浸蜡40min

1.5. 临床评价

    通过三种对脂肪组织的脱脂方法比较，统计三种脱脂方法的HE制片优良率，观察组织切片的完整度，组织结构的清晰度，染液上色的程度。

1.6. 统计学处理

使用SPSS 23.0软件对数据进行统计分析，服从正态分布的连续型计量资料以均数士标准差(Mean+SD)表示，不服从正态分布者进行对数转换，非连续型计量资料采用中位数(Median)和四分位间距表示，服从正态分布且方差齐的计量资料组间比较采用方差分析或非配对t检验；服从正态分布但方差不齐的计量资料组间比较采用 T 检验或非参数检验；计数资料采用率表示，率的比较采用χ2 检验或校正χ2 检验并计算优势比（OR）、95％可信区间（95％CI），双变量正态分布者采用直线相关，否则采用秩相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

经过脱水机脱水，包埋机包埋，切片机切片，染色机染色，封片机封片后，显微镜下观察A,B,C组的制片效果。A组三类标本均脱水不良，组织切片空洞，展片易散碎，制片困难，组织显微镜下观察：组织大面积缺失，结构不完整，折叠明显制片效果差。B组中乳腺组织，含脂肪大网膜组织脱水良好，切片流畅，显微镜下组织完整，平整无褶皱，染色均匀，但脂肪化淋巴结组织经丙酮处理按压后，组织明显变小，切片虽完整，但显微镜下细胞挤压明显，染色不均，结构模糊不清，切片优良率为80%。C组三类标本均脱水较好，切片完整，显微镜下脂肪结构清晰，色彩鲜艳切片优良率为100%。

3.讨论

脂肪组织脱水不足，是病理技术工作中最常见的问题，也是造成脂肪组织制片困难，最重要的原因之一。在日常组织脱水工作中，使用最普遍的就是常规脱水机，在常规脱水中，利用乙醇的理化性质，由低浓度乙醇逐渐向高浓度乙醇过渡,来达到组织脱水的目的。但当含脂肪丰富的组织和不含脂肪的组织一起常规脱水时，乙醇作用时间短，使脂肪组织内的水分脱不净，油脂溶解不完全，二甲苯和蜡液浸透困难，造成脱水不足。如果脂肪想要脱出良好的效果，可以薄取组织，适当调整脱水机程序，延长固定，乙醇作用及浸蜡的时间，这样就会给其他一起脱水的小组织带来脱水过度，组织干涸的麻烦。其他含脂肪较少的组织使用常规脱水程序，由于它们结构疏松，便于脱水剂的渗入，常规脱水也可以脱出理想的效果，但对含脂肪丰富的组织，常规脱水，脱脂的方法往往效果不佳，会出现蜡块渗水，久置凹陷，切片空洞，展片易碎，镜下组织结构不全的现象。当含脂肪组织丰富和不含脂肪的组织一起脱水时，乙醇作用时间短，脂肪组织内水分脱不净，油脂溶解不完全，二甲苯和蜡液难以浸透，出现蜡块渗水，久置凹陷，切片空洞，展片易碎，镜下组织结构不全的现象，严重影响医师诊断。丙酮对组织有固定，脱水，脱脂的作用，它脱水的能力大于乙醇，含脂多的大组织在脱水前使用丙酮处理可以达到脱脂的效果，但增大了小组织脱水太过的风险，造成组织过干，镜下细胞核收缩，染色效果不佳。除此之外，丙酮是一种强挥发的有毒液体，人体长时间吸入后会出现头晕，呕吐，甚至昏迷。丙酮易燃易爆，对科室存在安全隐患，不建议常规工作中大量使用丙酮对组织脱脂。在改良的脱水机中，将第一缸无水乙醇后，最后一缸二甲苯前，把无水乙醇，二甲苯更换成无水乙醇二甲苯(1:1)混合液,已有研究发现这种混合液为非极性有机溶剂，不仅能起到脱水的作用，对脂肪组织亦有脱脂功能。对含脂高的组织，前期脱脂不彻底，在混合液中进一步对脂肪脱水脱脂，来增强后一步二甲苯的渗透力，对于含脂少甚至不含脂肪的组织，混合液使组织脱水，透明更彻底，石蜡更易浸入组织，脱水效果理想。综上，改良脱水机既不用更改脱水机时间，也不需要对组织提前处理，不仅能使含脂肪丰富的组织脱水彻底，也不会引起其他组织脱水过度，是一种脂肪组织脱水效果较好的方法。

参考文献：

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