细菌检验中用途最广泛的染色方法

细菌检验中用途最广泛的染色方法

姓名：李雪洁,❶,张龙❷

单位：巴中市中心医院 科室：检验科 邮编：636000

细菌检验是临床医学检验的重要组成，为病情的诊断与后续治疗提供有力依据。随着致病菌种类的不断增加和变异，细菌检验也在随之快速发展。相比于其他医学检验，临床细菌检验不仅具有较高的风险性及干扰性，且还体现在较高的技术性与严谨性。如脑脊液培养结果与患者的生命安全息息相关；标本在采集、存储、运送等流程中会产生诸多干扰检测准确性的因素；检测报告及解释结果可对临床疗效产生重要影响等。因此临床将细菌培养与药敏试验归纳为专业性及复杂性较强的试验范围。细菌检验包括多种染色方法，但最为经典，且使用最为广泛的莫过于革兰染色法，其次为抗酸染色，其他还包括鞭毛染色、芽孢染色、菌毛染色等。本文主要对革兰染色与抗酸染色进行科普。

1.革兰染色

作为细菌检验最为常用的染色方法，革兰染色被现代医学应用于多种微生物的初步类型划分中，且应用范围越来越广，具有简单易操作，价格低廉，识别细菌种类较快等优势。该染色方法最早起源于19世纪的丹麦，由Gram医生首次提出，因此被称为革兰染色。他把细菌划分成革兰阳性与革兰阴性菌两种类型[1]。

1.1革兰染色原理

（1）通透性机制：G+菌细胞壁结构致密，仅含有少量脂类，导致乙醇透入难度较大，进而促使细胞壁脱色产生新的屏障，确保染料无法从细胞中渗出。而G-菌的细胞壁则与之相反，且含有较多的脂类成分，很容易受到乙醇的溶解，进而增加其通透性，细胞中所含的结晶紫-碘复合物也就很容易被溶解，进而渗出容易脱色[2]。

（2）化学机制：G+菌细胞中的核糖核酸镁盐含量较多，且能够与结晶紫-碘复合物紧密结合，再加上其存在等电点较低的特征，结合的碱性染料多而牢固，因此也会被染成紫色[3]

1.2革兰染色步骤

（1）制作涂片并干燥固定；（2）初染：将草酸铵结晶紫染液滴在事先做好的涂片表面，等待1分钟，然后使用流动清水将染液冲洗掉，去除残留的水。（3）媒染：选用新配制的路哥氏碘液，随后再将其覆盖在涂片表面达1分钟，再进行清洗。（4）脱色：将残水去除后，加入95%的酒精开始脱色，时间介于15秒与20秒之间，随后马上使用流动的清水冲洗。（5）复染，加入番红染色液，留置3-5分钟后进行水洗，随后再用吸水纸吸干水分（6）镜检：低倍镜观察视野，再换油镜观察染色结果并进行记录[4]。（7）例如部分细菌革兰染色结果观察：①葡萄球菌：革兰阳性为紫色球形葡萄状，长时间培养物中的少量菌体为革兰阴性则呈红色。②肺炎链球菌为革兰阳性呈紫色，矛尖状，部分有荚膜，若一些菌体为革兰阴性则呈红色。乙型溶血性链球菌为革兰阳性呈紫色，长时间培养物易为革兰阴性。③铜绿假单胞菌、大肠埃希菌为革兰阴性杆菌呈红色。④鲍曼不动杆菌：其在呈现为革兰阴性球杆状并被染成红色后则被判定为革兰阴性，但也会显现部分革兰阳性菌的紫色、球状等特征。⑤枯草芽孢杆菌：革兰阳性呈紫色，待部分菌体出芽孢后，革兰阴性菌体则呈现为红色。⑥假丝酵母菌：革兰阳性为紫色[5]。

1.3革兰染色意义

革兰染色是细菌临床检验中应用频率最高且最为经典的染色方法，在众多检验标本中，大部分都需要在分离培养之前进行革兰染色与镜检，只有一小部分标本无需应用革兰染色，如粪便标本及血液标本等。革兰染色在细菌检验中具有重要的临床意义，首先，能够鉴别细菌种类，革兰染色通过对细菌的分类（G+菌和G-菌），而使细菌的识别范围有效缩小，进而实施下一步的种类鉴别。甚至有时结合细菌特殊形态结构及排列方式，初步鉴定病原菌的具体情况。其次，不同类别的细菌（G+菌和G-菌），在遇到部分抗生素药物时体现的敏感性也存在一定差异。最后，直接关系到致病性：大部分G+菌的致病物质为外毒素，大部分G-菌则能产生内毒素，二者在致病作用方面存在较大区别[6]。

2. 抗酸染色

2.1抗酸染色原理

大量的脂类物质存在于分枝杆菌的细胞壁中，以分枝菌酸为主，在通过加热与增加染色时间的前提下，确保其能够着色，待染料与分枝杆菌所含的分枝菌酸进行完全结合后，就很

难被酸性脱色剂脱色，因此，被称为抗酸染色[7]。

2.2抗酸染色步骤

（1）取痰液标本制作成较厚的图片，待其干燥、固定。（2）选用石炭酸复红加温染色达3-5分钟后，用水清洗。（3）选用3%的盐酸酒精进行脱色，时间在1-2分钟，脱色过程中还要轻轻摇动玻片，直至涂片脱色后再进行水洗。（4）复染：选用碱性美蓝复染1分钟后用水清洗。（5）染片干燥后进行镜检[8]。（6）结果：抗酸杆菌呈红色，形状以细长、微弯、分枝或者直杆菌为主；其余标本与非抗酸性细菌则呈蓝色；务必要仔细查看不同视野，直至涂片所有区域均未发现抗酸杆菌，才可在报告中表明未查见抗酸杆菌[9]。

2.3抗酸染色意义

抗菌染色也对细菌进行了类型划分，即抗酸性细菌和非抗酸性细菌两种类型。由于临床所见大部分细菌均属于非抗酸性细菌，因此，抗酸染色在临床医学检验中一般不作为常规细菌检验项目，只有在疑似结核、麻风等疾病的前提下，才使用此染色方法。针对结核分枝杆菌疑似感染的标本，可在进行抗酸染色后实施油镜检验，进而得出初步鉴定结果

[10]。一旦发现红色抗酸杆菌，则可在报告中表明找到抗酸分枝杆菌，进而协助医师展开后续治疗。

参考文献

[1]王亚茹,吕思遥,郑牛威,史雯舒.金胺“O”荧光染色法与萋—尼染色法在肺结核细菌学检验中的准确性[J].医学理论与实践,2023,36(09):1556-1558.

[2]许铠,李天立,肖荣,白梅,钟莉.呼吸道感染患者病原性细菌的临床检验效果分析[J].基层医学论坛,2023,27(11):86-88.

[3]廖丽琴,莫国富,邹毅梅.PCR检验法和细菌培养法在阴道细菌检验中的效果对比[J].中国现代药物应用,2023,17(06):81-84.

[4]肖国初.尿液细菌培养及耐药性分析对复发性尿路感染患者抗生素合理使用的影响[J].现代诊断与治疗,2022,33(17):2573-2575+2583.

[5]董爱民,董颜颜.细菌检验在复发性尿路感染中的应用观察及临床治疗效果分析[J].中国冶金工业医学杂志,2022,39(04):397-398.

[6]袁燕,郭利敏,郭珊.复发性尿路感染患者的细菌检验及药敏检验结果分析[J].中国卫生检验杂志,2022,32(08):1010-1012.

[7]李晓松,张凌凌,高川川,孙艳艳.复发性尿路感染患者细菌检验及药敏检验结果分析[J].中国现代药物应用,2021,15(20):242-244.

[8]杨璐.聚合酶链反应检验法、细菌培养法及革兰氏染色法在阴道细菌检验中的应用价值[J].现代医学与健康研究电子杂志,2021,5(18):108-110.

[9]易丽美.金胺“O”荧光染色法与萋-尼染色法在肺结核细菌学检验中的应用效果比较[J].中国民康医学,2021,33(18):127-128.

[10]吴斌,杨巧荣.革兰染色法、细菌培养法及PCR法在阴道细菌检验中的应用比较[J].甘肃科技纵横,2019,48(05):90-91+61.