注射用头孢西酮钠过敏性试验研究

注射用头孢西酮钠过敏性试验研究

王中连

山东基钥生物医药科技有限公司   山东济南  250012

【作者信息】：王中连，男，汉族，1981年05月，山东潍坊人，硕士研究生， 初级

研究方向：医药工程、药理毒理学研究。

【摘要】：目的：评价注射用头孢西酮钠制剂在过敏性方面用药的安全性，为临床用药提供参考。方法:按照国家CFDA颁发的《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》进行了全身主动过敏和被动皮肤过敏性试验。结果：注射用头孢西酮钠致敏浓度为6mg/ml和12mg/ml，致敏期间腹腔注射1ml/只，激发时足趾静脉注射2ml/只，对豚鼠无主动全身过敏性反应；③注射用头孢西酮钠致敏浓度为180mg/ml和360mg/ml，给药容积0.5ml/只，对BN大鼠无被动皮肤过敏反应；结论：在本试验条件下，注射用头孢西酮钠无过敏性反应。

【关键词】：注射用头孢西酮钠；过敏性

引言

急性呼吸道细菌感染是一种常见病，可以发生于各个年龄阶段。目前，各种不同类型的头孢类化合物依然是临床上用于治疗该类疾病最为广泛的药物之一。其中的头孢西酮钠

是由E．Merck Darmstadt实验室研制的第一代半合成头孢菌素类抗生素，为头孢菌素C衍生物，其作用机制与其他头孢菌素类药物相似，主要是通过干扰和阻止细菌的细胞壁合成来达到抑菌和杀菌目的。本研究系根据国家食品药品监督管理局.化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则(【H】GPT4-1)中方法和要求展开进行，对本品的过敏性进行了评价，为临床用药提供参考。

1、试验材料

1.1药品与试剂

注射用头孢西酮钠，规格1g，批号130101，本品为白色或淡黄色粉末，无臭。韩国新丰制药株式会社生产，由天津新丰制药有限公司进口分装；卵清白蛋白，规格10g，批号326A058，由北京索莱宝生物技术有限公司提供；戊巴比妥钠，规格25g，批号330C032，由德国merk公司生产，进口分装；依文思蓝，规格10g，批号EF4R008743，由美国Sigma公司生产，进口分装；0.9%氯化钠注射液，由辰欣药业股份有限公司提供，规格250 ml，批号1301248202，本品为无色的澄明液体，味微咸。

1.2 试验所用动物

豚鼠24只，雌雄各半，体重300～400g。购于济南西岭角养殖繁育中心，普通级，质量合格证号№:0017407。BN大鼠40只，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，雌雄各半，体重100～200g，SPF级，质量合格证号№:11400700021604。

1.3 剂量换算

1.3.1豚鼠全身主动过敏性试验：本品临床通常日用量为1.0～4.0g。根据人与豚鼠之间等效剂量换算得350.0g豚鼠的给药量为27.61～110.44mg。按照致敏期间1.0ml/只，则给药浓度分别为27.61mg/ml和110.44mg/ml。本品为头孢类抗生素，因此试验通常采用临床拟用最小剂量的1/5~1/60设置为致敏的最高剂量，同时也是不产生毒性的剂量，因此本试验低、高剂量组给药浓度分别设计为6mg/ml和12mg/ml的溶液。

1.3.2 BN大鼠被动皮肤过敏性试验：本品临床每日最大用药量为6 g。按照体表面积换算BN大鼠临床最大用药量约91mg。按照致敏期间给药体积为0.5ml/只计，给药浓度分别为180mg/ml和360mg/ml。

2、试验方法

2.2 豚鼠全身主动过敏性试验

取健康的豚鼠24只，按体重随机分为阴性对照组，阳性对照组，供试品低、高剂量组。每组6只豚鼠，♀♂各半。各组豚鼠隔日分别腹腔注射（ip）给予1ml/只的氯化钠注射液、3 mg·ml-1的卵清白蛋白溶液和浓度分别为6 mg·ml-1、12 mg·ml-1的注射用头孢西酮钠溶液进行致敏，共计3次。末次致敏后第10日各组豚鼠以2倍致敏量足跖静脉注射（iv）2.0 ml/只进行激发。按照表1对记录每只激发后的症状，打分，并按照表2判定药物是否对豚鼠产生一定的过敏反应。

     表1过敏反应症状                         表2 全身致敏性评价标准

2.3 BN大鼠被动皮肤过敏试验

抗血清制备阶段：取BN大鼠16只，♀♂各半，随机分为阴性对照组，阳性对照组，和供试品低、高剂量组，每组4只，♀♂各半。各组大鼠隔日分别颈部皮下注射（sc）给予0.5ml相应剂量组的溶液+0.5ml Al(OH)3佐剂溶液，共3次致敏。末次致敏后第10d腹主静脉取血（约5ml），2000 r/min离心10min，分离血清。被动致敏阶段：取BN大鼠24只，♀♂各半，随机分为阴性对照组，阳性对照组，供试品低、高剂量组，每组6只，♀♂各半。各组大鼠用电推剪背部脱毛，脱毛面积约3㎝×4㎝。制备的各组抗血清用氯化钠注射液按1：2、1：8和1：32稀释，在大鼠脱毛区皮内注射（id）各相应组的抗血清0.1ml，进行被动致敏。激发：被动致敏24 h后，各组大鼠尾静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加等量的1%依文思蓝染料共1ml。结果测定：激发30min后颈椎脱臼处死各组大鼠，剪取背部皮肤，测量皮肤内层的斑点大小，直径大于5mm者判定为阳性。不规则斑点的直径为长径与短径之和的一半。

3、试验结果

3.1豚鼠全身主动过敏性试验

激发后即刻至30min连续观察可见，阳性对照组豚鼠激发后即刻出现搔鼻、喷嚏、咳嗽、呼吸困难、步态不稳等明显过敏反应，6只豚鼠均在激发后5min内死亡，按全身致敏性评价标准评判为“++++”，属极强阳性。供试品低、高剂量组豚鼠激发后一般状况良好，无明显过敏反应。阴性对照组豚鼠激发后一般状态良好，未见明显过敏反应症状。供试品低、高剂量组豚鼠与阴性对照组豚鼠比较未见明显差异，按全身致敏性评价标准评判为“－”，过敏反应为阴性。致敏结果见表3。

表3 全身主动过敏反应评判结果

3.2 BN大鼠被动皮肤过敏性试验

试验期间大鼠一般状态良好，未见明显异常。激发后30min颈部脱臼处死BN大鼠，剪取注射部位皮肤：阴性对照组大鼠皮内注射抗血清部位均未见明显的蓝斑，过敏反应呈阴性；阳性对照组大鼠皮内注射抗血清处可见明显蓝斑，抗血清稀释比为1:2 、1:8和1:32的皮内注射部位蓝斑直径均大于5mm，过敏反应呈阳性，发生率为100％，与阴性对照组比较有明显差异。供试品低、高剂量组大鼠注射抗血清部位均未见明显的蓝斑，按照被动皮肤过敏反应判断标准，判定为阴性。被动致敏试验结果见表4。

表4　注射用头孢西酮钠被动皮肤过敏试验结果（mm）

4、讨论

注射药物的安全性评价是药物临床试验的一个重要组成部分，主要由体外溶血试验、过敏性试验、血管（肌肉）刺激性试验等组成。只要其中任何一项试验出现阳性结果，则表明该药不符合安全性评价的标准，不能予以生产及上市销售。本试验着重考察了受试药物在全身主动过敏和大鼠被动皮肤过敏，未发现过敏性。但由于动物试验并不能完全的暴露药品进入临床后所表现出的症状，且本类药物有过敏的报道，因此临床用药仍需慎重，过敏体质不易应用或在用之前需进行皮试。

5、主要参考文献

[1] 国家食品药品监督管理局.化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则(【H】GPT4-1)  2005.03

[2] 张永江，陈洪岩，夏长友. 实验研究中实验动物的选择及其相关干扰因素[J]. 中国实验动物学杂志，2002, l2(5):316~319

[3] 韩重，杨威. 头孢菌素类抗生素过敏反应临床前安全性评价的探讨[J].国外医药抗生素分册，2009，30（3）：135～138

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