缬沙坦氨氯地平片对映异构体的测定

缬沙坦氨氯地平片对映异构体的测定

谢万清

（海南妙音春制药有限公司，  海口  570311）

摘要：目的  建立缬沙坦氨氯地平片对映异构体的测定方法。方法  用HPLC法测定。采用α-酸性糖蛋白柱，检测波长为227nm。结果  缬沙坦对映异构体在0.1207～4.525µg/ml浓度范围内线性关系良好（r=1.0000），平均回收率为101.9%（RSD= 0.48%）。结论  该方法适用于缬沙坦氨氯地平片对映异构体的测定。

关键词：缬沙坦；氨氯地平；缬沙坦氨氯地平；高效液相色谱；对映异构体

缬沙坦属于血管紧张素II拮抗剂类药物，氨氯地平属于钙通道阻滞剂类药物，这两种成份在控制血压方面作用机制互补。对于老年高危高血压患者，应用缬沙坦氨氯地平复方制剂治疗，能更有效地控制血压，血压达标率更高，另外安全性也较高，可大范围进行临床应用。

缬沙坦存在对映异构体，虽然这些对映体理化性质一致，但它们的药效与毒性可能并不完全相同。本文对缬沙坦氨氯地平片的缬沙坦对映异构体从各方面进行验证和考察，建立准确的对映异构体测定方法，保证其用药的安全有效。

1. 试药

缬沙坦对映异构体对照品（批号：100836-201802）由中国食品药品检定研究院提供；缬沙坦氨氯地平片（商品名：倍博特，批号：B3116）由北京诺华制药有限公司提供；缬沙坦氨氯地平片（批号：191001、191002、191003）由海南妙音春制药有限公司提供。

2. 测定方法与验证
   1. 方法重现

分别重现ChP2020、JP17、USP43的分析方法检测供试品溶液（添加杂质），结果在JP17方法下，对映异构体与缬沙坦的保留时间较短且分离度符合要求，理论板数更高，峰形更佳，因此以JP17色谱条件为基础进行再优化。

2.2.方法优化

为提高色谱柱耐受性，将流速调整为0.6ml/min，考虑到复方制剂的影响，将等度洗脱调整为梯度洗脱，依次进样空白溶液、空白辅料溶液、苯磺酸氨氯地平定位溶液、供试品溶液（添加杂质），结果空白溶液、空白辅料及苯磺酸氨氯地平均不干扰对映异构体检测，专属性强。

2.3.拟定的检测方法

色谱条件：用α-酸性糖蛋白柱；以磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠14.68g和磷酸二氢钾3.81g，加水溶解并稀释至1000ml）-异丙醇（980：20）为流动相A；以磷酸盐缓冲液（同前）-异丙醇（850：150）为流动相B；检测波长为227nm；柱温为35℃；流速为0.6ml/min；进样体积10μl。按下表进行梯度洗脱：

对映异构体贮备液：精密称取对映异构体对照品适量，用流动相A使溶解并稀释制成约含150μg/ml的溶液，摇匀，即得。

系统适用性溶液：精密称取缬沙坦对照品约15mg，置100ml量瓶中，加适量流动相A使溶解，再精密加入对映异构体贮备液1ml，用流动相A稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：精密称取缬沙坦对照品适量，用流动相A使溶解并稀释制成约含1.5μg/ml的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液：取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（相当于缬沙坦30mg），置200ml量瓶中，用流动性A使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

系统适用性要求：缬沙坦与对映异构体的分离度应符合规定。

测定法：精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液中如有对映异构体峰，按外标法以峰面积计算，不得过缬沙坦标示量的1.0%。

2.4.方法验证

2.4.1.专属性

依次取系统适用性溶液、混合对照品溶液、供试品溶液，依法操作。结果空白溶液和空白辅料均无干扰，对映异构体与缬沙坦分离度为2.71，专属性强。

2.4.2.定量限

取对映异构体贮备液、缬沙坦对照品贮备液，逐级稀释成定量限溶液，平行配制6份，依法操作。结果对映异构体、缬沙坦的定量限分别为0.08%、0.16%，峰面积的RSD分别为2.69%、6.68%。

2.4.3.检测限

精密量取定量限溶液，逐级稀释成检测限溶液，依法操作。结果对映异构体、缬沙坦的检测限分别为0.02%、0.03%，检测灵敏度高。

2.4.4.线性与范围

取对映异构体贮备液、缬沙坦对照品贮备液分别配制成50%、100%、150%、200%、300%的线性溶液，依法操作。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归，结果缬沙坦在0.2373～4.450μg/ml范围内线性关系良好，线性方程：y=877.8963x-0.0344，r=1.0000，Y轴截距百分比为2.72%；对映异构体在0.1207～4.525μg/ml范围内线性关系良好，线性方程：y=865.2862x-0.0124，r=1.0000，Y轴截距百分比为0.96%；对映异构体相对缬沙坦的校正因子为1.0。

2.4.5.重复性

按加标法分别配制6份供试品溶液及混合对照品溶液，依法操作。按外标法计算，结果6份供试品的对映异构体平均含量为1.1%，RSD 为0.37%，重复性符合要求。

2.4.6.中间精密度

    由第二组分析人员于不同天采用不同色谱仪按“2.4.5重复性”同法操作。结果6份供试品的对映异构体平均含量为1.1%，RSD 为1.04%。两组平均值的差值为0.0%，中间精密度符合要求。

2.4.7.准确度

按加标法分别配制成50%、100%、150%回收率溶液，各浓度平行配制三份，依法操作。按外标法计算，结果定量限浓度下对映异构体的平均回收率为101.9%，在85%～115%范围内，RSD为0.48%；50%、100%、150%各浓度下对映异构体的平均回收率分别为100.7%、100.6%、101.8%，均在90%～108%范围内，3 个浓度下的RSD 为0.91%，该方法准确度符合要求。

2.4.8.耐用性

    分别配制供试品溶液（不加杂）、供试品溶液（加杂），室温放置，在0、4、12、24、48h进样。按外标法计算，结果供试品溶液（不加杂）各时间点测定值与0h比较，差值均小于0.10%，溶液48h稳定；供试品溶液（加杂）各时间点测定值与0h比较，差值均小于0.20%，溶液48h 稳定。

3. 样品测定

按拟定的检测方法对相关样品进行检测，结果如下：

4. 结论

缬沙坦氨氯地平片按拟定的检测方法经上述一系列的方法验证，结果均符合要求，拟定的检测方法适用于缬沙坦氨氯地平片对映异构体的测定。

参考文献：

[1] 卫娜，尚亮，杨小丽.缬沙坦氨氯地平对老年高危高血压患者的疗效及相关影响.西北药学杂志，2017，32(5)：656-659.

[2] 王峰，房磊，孙飞.缬沙坦氨氯地平片治疗高血压的有效性和安全性分析.中国实用医药，2019，14(7)：6-8.

[3] 缬沙坦质量标准（ChP2020）

[4] 缬沙坦质量标准（USP43）

[5] 缬沙坦质量标准（JP17）

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