制药设备清洁残留物哌拉西林钠他唑巴坦钠分析方法验证

制药设备清洁残留物哌拉西林钠他唑巴坦钠分析方法验证

陈曼 巫捷灵

海南通用三洋药业有限公司，海南 海口 570312，

摘要：目的：验证制药设备中清洁残留物哌拉西林钠及他唑巴坦钠浓度符合GMP中化学残留物浓度限度要求。检验方法：利用高效液相色谱法分析制药设备中清洁残留物哌拉西林钠及他唑巴坦钠的浓度，色谱柱为Kromasil/P442801，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm,柱温为30 ℃,进样量为10 µL。结果：制药设备淋洗样品及擦拭样品中哌拉西林钠他唑巴坦钠残留物均符合GMP中的限度要求。结论：本分析方法简单，灵敏度高，科学、准确、可用于制药设备中哌拉西林钠及他唑巴坦钠残留物的分析及生产后设备清洁效果的评估。

   关键词：分析方法；高效液相色谱法；设备清洁残留物；哌拉西林钠他唑巴坦钠

哌拉西林钠是半合成青霉素类抗生素，具有广谱抗菌作用，通过抑制细菌细胞壁的合成发挥杀菌作用[1]。他唑巴坦钠为不可逆的β-内酰胺酶竞争性抑制剂，能对哌拉西林敏感的细菌和因生产β-内酰胺酶而耐哌拉西林钠的细菌有抗菌作用[2]，因此两者的复方制剂即哌拉西淋钠他唑巴坦钠注射液具备广谱抗生素以及β-内酰胺酶抑制剂的双重特征[3]。因哌拉西淋钠他唑巴坦钠注射液在本公司生产车间存在其他共线产品，为验证清洁残留物符合GMP标准及避免交叉污染，需对该生产线的制药设备中的残留物进行分析检测[4]。本研究中参照2015年版四部通则0512药典[5]检测哌拉西林钠及他唑巴坦钠含量测定法，通过淋洗法及擦拭法取样，建立制药设备清洁后哌拉西林钠及他唑巴坦钠残留物的分析方法，并验证其分别符合GMP[6]中淋洗水化学残留物浓度要求（13.75 µg/mL）及擦拭化学残留物浓度要求（7.7 µg/mL），确定清洁方法的有效性，防止其对后续产品造成污染。现报道如下：

1.仪器-试剂

a.仪器:高效液相色谱仪型号与编号：Agilent1260（QC2032）

b.赛多利斯电子分析天平MSA125P（QC2049）（十万分之一）

c.试剂：甲醇,磷酸二氢钠,10%四丁基氢氧化铵，纯化水,均为分析纯

2.溶液制备

a.供试品制备:车间清洗后，质量保证部人员收取，配送至质量控制部高效液相检测。（该样品应在4个小时内检测）

b.对照液制备

1. 擦拭化学残留物浓度（7.7 µg/mL）对照品的制备：精密称定量他唑巴坦17.11 mg，置于100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为他唑巴坦对照品储备溶液。精密称定量哌拉西林13.68 mg，置于200 mL量瓶中，加少量流动相溶解，另取他唑巴坦对照品储备溶液10 mL，置含哌拉西林的200 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为哌拉西林，他唑巴坦对照品储备溶液。精密量取哌拉西林，他唑巴坦对照品储备溶液10 mL，置于100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。（备注：对照品称定只能小于固定值，且不得小于1 mg）
2. 淋洗水化学残留物浓度（13.75 µg/mL）对照品的制备：精密称定量他唑巴坦15.26 mg，置于100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为他唑巴坦对照品储备溶液。精密称定量哌拉西林12.21 mg，置于100 mL量瓶中，加少量流动相溶解，另取他唑巴坦对照品储备溶液10 mL，置含哌拉西林的100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为哌拉西林，他唑巴坦对照品储备溶液。精密量取哌拉西林，他唑巴坦对照品储备溶液10 mL，置于100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。（备注：对照品称定只能小于固定值，且不得小于1 mg）

3.色谱条件

a.色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Kromasil/P442801

b.流动相：甲醇:纯化水:0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液：10%四丁基氢氧化铵（450：447：100：3）

c.柱温要求:30℃。

d.检测波长：220 nm。

e.流速：1.0 min/mL。

f.进样量：10 µL。

4.结果限度要求：

a.擦拭供试品溶液的哌拉西林峰面积及他唑巴坦峰面积均小于对应擦拭对照品溶液（7.7 µg/mL）的哌拉西林峰面积及他唑巴坦峰面积。

b.淋洗水供试品溶液的哌拉西林峰面积及他唑巴坦峰面积均小于对应淋洗水对照品溶液（13.75 µg/mL）的哌拉西林峰面积及他唑巴坦峰面积。

5.系统适用性试验

a.系统溶液的配置：精密称定哌拉西林和他唑巴坦对照品适量，加流动相溶解，制成每1 mL中约含哌拉西林1.6 mg和他唑巴坦0.2 mg的溶液，在60 ℃水浴中加热60分钟，得含他唑巴坦降解物的混合液，取10 µL注入液相色谱仪，记录色谱图，他唑巴坦峰保留时间约0.87倍处的较大杂质峰为他唑巴坦降解峰，他唑巴坦降解峰与他唑巴坦峰分离度应大于2.4，哌拉西林峰与他唑巴坦峰的分离度应大于20.0，哌拉西林峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求（大于等于1.50）。

四、实验结果

1.分离度

按上述色谱条件，取系统溶液10 µL注入液相色谱仪，记录色谱图。

表1分离度测试

图1 系统适用性

由表1和图1可知，各峰之间的分离度均＞1.5，各峰都得到良好的分离。

2.对照品分析

按上述色谱条件，取对照品溶液10 µL注入液相色谱仪，记录色谱图。

表2对照品分析结果

图2 对照品HPLC质谱图（a）7.7 µg/mL对照品1（b）7.7 µg/mL对照品2（c）13.73 µg/mL对照品1（d）13.73 µg/mL对照品2

3.样品分析

表3样品分析结果

图3 擦拭样品HPLC质谱图（a）擦拭样品1（b）擦拭样品2（c）擦拭样品3（d）擦拭样品4

图4 淋洗样品HLPC质谱图（a）淋洗样品1（b）淋洗样品2（c）淋洗样品3（d）淋洗样品4

4讨论

本研究采用2015年药典[5]中的分析方法，利用高效液相色谱法验证本公司生产设备中清洗后哌拉西林钠及他唑巴坦钠化学残留物分别符合GMP中的淋洗化学残留物浓度限度及擦拭化学残留物浓度限度要求。经检验，清洁后制药设备中哌拉西林钠及他唑巴坦钠清洁残留物浓度均符合GMP的限度要求。本方法科学准确、操作简单，灵敏度高，可作为哌拉西林钠他唑巴坦钠残留物的分析方法，并为生产设备清洁验证过程残留物的检验和结果的准确判断提供了依据。

参考文献

[1]李家泰.临床药理学[M].2版，北京：人民卫生出版社，1998.

[2]张润平. β-内酰胺酶抑制剂他唑巴坦的研究[J].药学研究，2001（6）.

[3]周卫明，李健和，彭六保，等.高效液相色谱法测定注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠含量及相关物质[J].中国当代医药，2009（9）.

[4]张振，汪广厚.帕立骨化醇残留物清洁分析方法的验证和应用[J]. 中国药业，2020，29(01)，67-70.

[5]国家药典委员会.中国药典(四部)[M],北京：中国医药科技出版社，2015,通则0861，9101.

[6]国家食品药品监督管理局药品认证中心.口服固体制剂：药品GMP指南[M]. 北京：中国医药科技出版社，2011：181-193.