艾滋病实验室自制室内质控品的质量评价

艾滋病实验室自制室内质控品的质量评价

余建波

彭泽县人民医院检验科  江西彭泽  332700

摘要：目的：提升艾滋病实验室监督管理、检测、校准以及比对能力，确保实验室室内检测工作有序开展。方法：收集艾滋阳性样本，依次收集艾滋病实验室室内肉眼无法可见的溶血、黄疸、乳糜颗粒等原料血浆、血清，而后按照特定顺序进行病毒灭活、离心、防细菌污染和稳定蛋白处理，以相关规范和实验室生物安全要求为遵循进行各项操作，评价质控品均一性、稳定性。结果：无论是高浓度质控品还是低浓度质控品，标准差（SD）均在0.1、变异系数均在10％以内，同时，当上述两种不同浓度的质控品分别存放于2—8℃、37℃以及室温条件下一定时间后，两种质控品抗-HIV的S/CO值的CV皆在15％以内。结论：在艾滋病实验室室内，自制质控品质量良好，均一性、稳定性理想，可以在相关验证工作中有效发挥价值。

关键词：质量；实验室；艾滋病；质控品

前言

在艾滋病病毒抗体筛查工作中，酶联免疫吸附试验广泛应用，而为进一步保障试验结果有效性，务必要于实验室内构建完善、全面的质量管理体系。在此期间，室内质量控制这一环节不容忽视，为保障室内质量控制成效，不仅要重点关注试剂质量、试验人员操作规范性和仪器精密性，还要高度重视实验室内质控品的保存和质量。当前，试验人员在应用酶联免疫吸附试验检测抗-HIV时，需要设立内、外部质控对照，以内部对照值为依据对试验活动的有效性加以判定，根据外部质控品对样品检测有效性加以判定，且在试验期间必须要应用室内质控品。就商业质控品而言，其多为专业公司生产，虽然使用便捷，但具有成本高、有效期短的限制，难以一次性大规模购买，因此不宜将其应用于实验室日常检测工作。本研究即结合检测需求对应配制HIV室内质控品，并从均一性、稳定性层面出发，对不同浓度的质控品加以评价。

1资料与方法

1.1材料

于临床收集试验所需的人体HIV抗体阳性、阴性血浆作为样品，56℃水浴灭活处理30min，转速3000 r/min离心15min，为避免细菌进一步生长，在上述操作基础上加入0.2%的庆大霉素、0.1%的硫柳汞，同时加入蛋白稳定剂。在血浆内存在较多肉眼可见杂质的情况下，需对其进行真空抽滤处理。原料质控品应在2—8℃条件下进行存储，并避免直接阳光和湿度。所有质控品在保存期间应密封，并在有效期内使用。对于长时间的保存，建议存放于-20℃的深冷冻条件下。

1.2试剂

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（抗-HIV-1/抗-HIV-2）（英科新创厦门科技股份有限公司，批号：2022086616），有效期内使用。

1.3仪器

本试验所需仪器为酶标仪、洗板机、生物安全柜、恒温孵育箱和精密移液器。

1.4方法

质控品均一性评价方法为：于同一批制备的高、低浓度的HIV自制室内质控品中随机各抽取20支，而后开展酶联免疫吸附试验。依次对每支质控品进行双孔检测，根据检测均值对应计算变异系数。

质控品稳定性评价方法为：于同一批制备的高、低浓度的HIV自制室内质控品中随机各抽取18支并分为3组，将第一组的6支置于37℃条件下，6支质控品放置天数分别为1、2、3、4、5、7 d，取出后置于-20℃条件下保存；第二组的6支置于室温条件下，6支质控品放置天数分别为1、2、3、4、5、7 d，取出后置于-20℃条件下保存；第三组的6支置于2—8℃条件下，6支质控品放置天数分别为1、2、3、4、5、7 d，取出后置于-20℃条件下保存。以酶联免疫吸附试验法对18支质控品进行双孔检测，对应计算变异系数，探索质控品于不同温度下保存稳定性。

为确保试验结果无误，需于同样的试验条件下反复试验3次。

2结果

2.1均一性试验结果

应用抗-HIV诊断试剂对同一批制备、不同浓度的质控品进行双孔检测，经过反复3次试验后，高浓度质控品OD（及S/CO）值的标准差分别为0.157、0.237、0.243，变异系数为5.5%、8.0%、9.7%，低浓度质控品OD（及S/CO）值的标准差分别为0.057、0.106、0.105，变异系数为7.4%、13.3%、14.1%。由此可见，不同浓度质控品的标准差和变异系数皆在0.1、10%以内，证明室内质控品有着良好的均一性。

2.2稳定性试验结果

应用酶联免疫吸附试验对全部质控品进行双孔检测、并计算变异系数后，发现在2—8℃温度下，高浓度质控品在存放不同天数后，变异系数在10％以内（见表1），小于其在室温、37℃温度条件下的变异系数（见表2、表3）；在室温条件下，低浓度质控品存放不同天数后，变异系数值≤6.5%（见表2）。结果表明：在不同温度条件下，两种质控品存放不同时间后，变异系数皆在15％以内，表示质控品有着良好的稳定性。

表1  不同浓度质控品于2—8℃存放不同天数的S/CO值

表2  不同浓度质控品于室温存放不同天数的S/CO值

表3  不同浓度质控品于37℃存放不同天数的S/CO值

3讨论

对于均一性的评估，结果显示，无论是高浓度还是低浓度的质控品，其标准差（SD）均在0.1以内，且变异系数均在10％以内，这说明质控品在其制备过程中的重复性和可靠性都较为理想。这与多数文献中关于质控品制备的标准一致，即质控品在制备过程中需要确保其均一性，以确保在使用时能够得到可靠的结果。

在稳定性方面，研究发现，在不同的温度条件下，两种浓度的质控品存放不同时间后，其变异系数皆在15％以内，这一发现也与外部文献中的观点相吻合，即质控品在存储过程中需要保持其稳定性，以确保在使用时的准确性。

值得注意的是，在37℃和室温条件下，低浓度质控品显示出较好的稳定性，而在2—8℃条件下，高浓度质控品的稳定性较好。这可能是因为不同的浓度下，质控品中的病毒抗体与其他成分的相互作用不同，导致其在不同温度下的稳定性也有所不同。

为确保HIV抗体检测结果准确无误，艾滋病实验室人员必须进行室内质量控制，并通过实验室间对比确定检测能力，使试验人员及时发现问题，提高工作质量，在此期间，质控品的一致性、稳定性至关重要，因此，务必要对其进行均一性、稳定性检验。本研究自制质控品可大体反映出实验室常规情况下存在的问题，但研究并未确定靶值，故在后续工作中要进行结果汇总，积累、确定靶值。

综上所述，在艾滋病实验室室内，自制质控品质量良好，均一性、稳定性理想，可以在相关验证工作中有效发挥价值。

参考文献

[1]邢文革,肖瑶,潘品良等.以防治工作需求为导向  全面建成艾滋病检测技术平台及标准化质控体系[J].中国艾滋病性病,2019,25(10):993-996.

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