两种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒临床应用一致性评价

两种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒临床应用一致性评价

杨金婧  李仁杰  蔡娟  吴成志  曹平平  张雯  李超男

上海中冶医院检验科   200941

摘要：目的  评价上海科华生物工程股份有限公司研发的人心脏型脂肪酸结合蛋白(胶乳免疫比浊法)检测试剂盒与已批准上市的同类试剂盒临床应用的等效性及临床符合性。方法 采用平行、盲法、对照的对比试验设计，使用两种试剂盒共测定120份临床血液标本，比较试验产品和对比产品的一致性、等效性及临床符合性。结果 其中选取12例医学决定水平处即参考范围附近样本分析，试验产品和对比产品的一致性符合率为97.1%。对比产品和试验产品结果不一致的1例标本以临床诊断结果为标准进行验证后，试验产品与临床诊断结果的阳性符合率为100%，总符合率为100%。试验试剂与对比试剂测定血清样本的两组数据的相关系数r=0.9985；进行最小二乘法回归分析，回归方程为：Y = -0.3276 + 1.0330 X，斜率的95%可信区间(CI)为（1.0228～1.0433），截距的95%CI为（-0.6748～0.01959）；参考区间处（5 ng/mL）预期偏倚为-0.1626 ng/mL，95%CI为（-0.4881～0.1630）ng/mL，预期偏倚在可接受偏倚限值±15%（-0.7500～0.7500）ng/mL范围内。结论 两种H-FABP检测试剂盒的一致性较好，在临床应用中两者之间具有等效性。

关键词：心型脂肪酸结合蛋白，试剂盒，胶乳免疫比浊法，一致性

心脏型脂肪酸结合蛋白是心脏中富含的一种新型小胞质蛋白，分子量约为15 kDa，作为心肌细胞内长链脂肪酸的主要载体，与心肌细胞内长链脂肪酸结合后，将长链脂肪酸从细胞质膜向胞内脂化和氧化部位运输，进入能量代谢循环，为心肌收缩提供能量。正常情况下，血液和尿液中H-FABP含量极少[1]，当心肌细胞受损时，可从心肌细胞迅速释放进入血液中[2]。近年来，人们提出H-FABP可作为心肌损伤的早期诊断重要标志物[3-4]，因此H-FABP的检测至关重要。

本研究采用平行法、盲法对上海科华生物工程股份有限公司开发的心型脂肪酸结合蛋白测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）进行实验观察，通过测定一定数量的临床样本，对测定结果进行科学合理的统计分析，以评价试验试剂与已上市的对比试剂在统计学意义上的等效性和一致性。

1资料与方法

1.1 试剂与仪器

1.1.1 试验试剂盒信息

上海科华生物工程股份有限公司生产的心型脂肪酸结合蛋白测定试剂盒（胶乳免疫比浊法），包装规格：R1: 1×41mL、R2: 1×13mL；配套校准品和质控品；产品批号：20220730；有效期20230129；储存条件：2～8℃（避光）。

1.1.2 对比试剂盒信息

北京九强生物技术股份有限公司生产的心型脂肪酸结合蛋白测定试剂盒（胶乳免疫比浊法），包装规格：R1: 1×60mL, R2: 1×15mL；配套校准品和质控品；产品批号：21-1013；有效期20221012；储存条件：2～8℃（避光）；注册证编号：京械注准20162401082。

1.1.3检测仪器：贝克曼AU5800全自动生化分析仪。所有试剂盒均严格按照说明书进行操作。

1.2 样本收集

收集上海中冶医院120例临床诊断为包含但不限于心肌损伤及急性心肌梗死等相关疾病类型，以及其他疾病类型、体检人群等患者的既往诊疗检测后剩余的血清样本，样本H-FABP预计分布：异常值（≥5ng/mL）84例，正常值（＜5ng/mL）36例），3000r/min离心10min分离血清于2 ml冻存管中编号后置于-70 ℃冰箱保存待用。

1.3 试验方法

1.3.1检测方法：检测时取出冷冻的血清样本，平衡至室温并充分混匀后根据方案入排标准对样本进行筛选，对入组样本进行编盲，一份标本平均分成2份，使用试验试剂和对比试剂同时进行H-FABP的检测。

1.3.2 统计方法

（1）相关系数统计：采用统计学软件Medcalc，统计两组数据的相关系数；

（2）回归分析：以对比试剂检测血清样本的结果为X轴，试验试剂检测结果为Y轴，进行线性回归分析，建立回归方程Y=a+bX，计算斜率及截距的95%可信区间；

同源血清样本是以配对血清样本试验试剂的检测结果为X轴，以同源血清样本的试验试剂检测结果为Y轴，进行线性回归分析，建立回归方程Y=a+bX，计算斜率及截距的95%CI；

（3）偏倚分析：计算参考区间处的预期偏倚及95%CI；

（4）阳性符合率计算方法，见表1。

表1两种试剂阳性符合率计算方法

注：阳性符合率=A/(A+B)*100%，试验试剂与对比试剂一致性符合率=(E)/(E+F)*100%

2.结果

2.1 数据审查及离群值检查

（1）散点图

对119例样本有效测定结果，以对比试剂对血清样本检测结果为X轴、试验试剂对血清样本检测结果为Y轴，绘制散点图(图1)。

图1 H-FABP检测结果散点图

（2）绝对差异图

对119例有效血清样本的结果分别进行差值的绝对值Di和相对偏差的绝对值Di’的计算，并计算差值绝对值的均值E和相对偏差绝对值的均值E’，取差值绝对值均值的4倍（4E）为绝对检测限值和相对偏差绝对值均值的4倍（4E’）为相对检测限值，结果见表2。

表2两种试剂检测结果的检测限值统计

以试验试剂与对比试剂检测结果的均值为X轴，绝对差值为Y轴，以±4.0300为界限，做绝对差异图(单位ng/mL)。见图2。

图2  两种试剂检测结果的绝对差异图

（3）相对差异图

以试验试剂与对比试剂检测结果的均值为X轴，相对差值为Y轴，以±39.92%为界限做相对差异图（单位：ng/mL）。见图3。

图3两种试剂检测结果的相对差异图

图1～图3显示，无目测离群点及无同时超过两个检测限制的点，故无离群值。最终纳入统计的有效样本为119例。

2.2 相关性分析

采用统计学软件Medcalc，对上述两组数据进行相关性分析，相关系数 r=0.9985＞0.975，两者在统计学上相关性良好。

2.3 回归分析

血清样本是以对比试剂检测结果为X轴，试验试剂检测结果为Y轴，进行线性回归分析，建立回归方程Y= -0.3276 + 1.0330 X，其斜率95%CI为（1.0228 ～1.0433），截距的95%CI为（-0.6748～0.01959）。

2.4 偏倚分析

表3  参考区间处5ng/mL浓度水平预期偏倚及95%CI统计

表3显示：5ng/mL处的预期偏倚(-0.1626ng/mL)在可接受偏倚（-0.7500～0.7500）ng/mL范围内。

2.5 试验产品和对比产品在医学决定水平处及参考范围附近结果统计

两种产品在参考范围附近样本测定结果见表4，其中样本临床诊断均为冠状动脉粥样硬化性心脏病。

表4  试验试剂和对比试剂的测定结果

表4显示，在参考范围附近处样本，试验试剂和对比试剂的符合率为91.7%（11/12*100%），而对比试剂与临床诊断的阳性符合率为91.7%（11/12*100%），试验试剂与临床诊断的阳性符合率为100%（12/12*100%）。

3  讨论

H-FABP是心肌损伤的标志物[5]，用于诊断早期心肌损伤的持异性和敏感性优于其他心肌损伤标记物，在临床上的应用广泛受到人们的关注和重视[6]。H-FABP是急性心肌梗死（AMI）早期诊断的重要生化指标之一[7-8]，对急性冠脉综合征(ACS)的早期诊断和危险分层具有重要价值[9-11]。血清中H-FABP水平还可作为急性肺栓塞患者远期生存率的独立预测因子[12-14]。

目前H-FABP的实验室检测方法有ELISA法 、胶体金免疫层析技术、时间分辨荧光免疫层析、电化学发光法、免疫比浊法等，能定量或定性检测H-FABP，但存在检测时间长 (>1 h)、操作复杂、敏感度不够高、应用不够广泛等缺点[15]，胶乳免疫比浊法测定血清H-FABP快速、准确、可靠[16]，可适于临床全自动或半自动生化分析仪配套使用。

本研究对上海科华生物工程股份有限公司研发的H-FABP(胶乳免疫比浊法)检测试剂盒进行了考察，与已批准上市的同类产品北京九强生物技术股份有限公司生产的H-FABP测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）性能进行对比，结果表明2种H-FABP检测试剂盒的性能一致性较好，在临床应用中两者之间具有等效性。因此上海科华生物工程股份有限公司研发的H-FABP(胶乳免疫比浊法)检测试剂盒可广泛的应用于临床，作为心肌损伤的早期诊断重要标志物，为疾病的诊治提供参考依据。

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