复方芦丁蛇油膏治疗Ⅱ度烧烫伤的机制研究

复方芦丁蛇油膏治疗Ⅱ度烧烫伤的机制研究

陈卉，朱文静，卢莉莉，罗锦花，王伟芳，张爱华

江西省 南昌市 南昌大学第一附属医院 邮编：330006

摘要:目的 探讨复方芦丁蛇油膏对深Ⅱ度烧伤大鼠模型创面愈合的作用和机制，为临床应用其治疗深Ⅱ度烧伤提供可靠的依据。方法将2-3月龄SD大鼠随机分为5组，每组10只， A 组(假伤组)10只、B 组(单纯烧伤组)10 只、C 组(低浓度复方芦丁蛇油膏组)10只和 D 组(中浓度复方芦丁蛇油膏）组10 只，E 组(高浓度复方芦丁蛇油膏组)10只。制备深Ⅱ度烧伤模型，A 组除常规喂养外不做任何处理，烧伤各组烧伤后除常规喂养外，B 组创面给予隆力奇蛇油膏进行治疗，每天三次，C 组创面涂抹低浓度复方芦丁蛇油膏，D组创面涂抹中浓度复方芦丁蛇油膏，E组创面涂抹高浓度复方芦丁蛇油膏。观察各组创面愈合率，并于造模后第3、7、14天取材,检测各组创面组织TNF-α、VEGF水平。结果 D 组创面愈合率最高；与单纯烧伤组相比，C、D、E 组各时相点TNF-α水平明显改善，而D组效果尤为明显( P<0.05);D 组创面组织中VEGF 含量的水平各时相点均高于 A、B、C、E 组( P <0.05)；结论 复方芦丁蛇油膏能改善创面炎症反应，提高生长因子水平而促进深Ⅱ度烧伤创面的愈合。

关键词: 复方芦丁蛇油膏;深Ⅱ度烧伤;创面愈合;炎症水平；血管内皮细胞生长因子

深Ⅱ°烧伤伤及皮肤真皮层，创面修复贯穿于其治疗的整个过程，也一直是研究及治疗的重点。积极有效的创面处理能促进间生态组织良性转归、防止创面加深，减少全身性感染及并发症的发生，缩短愈合时间，减少功能畸形及提高患者的生活质量[1]。芦丁有减低毛细血管通透性及脆性，防止血细胞凝集，促进细胞增生的作用，是天然的抗氧化剂，可调节众多疾病有关的细胞内和细胞外信号通路，影响细胞的生长、分化及其功能[2]。在中国，用蛇油治疗烧烫伤具有悠久的历史，可降低烫伤部位毛细血管的通透性、减少渗出、保持创面清洁干燥、防止感染、促进愈合。本课题组通过从槐米中提取芦丁，结合动物、植物材料制备复方芦丁蛇油应用于深Ⅱ度烫伤SD大鼠模型，从而验证一种比传统蛇油治疗烧烫伤能力更强的复方蛇油膏，报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及药品 选取2-3月龄SD大鼠,雌雄各半，由南昌大学医学院动物实验中心提供。每组10只， A 组(假伤组)10只、B 组(单纯烧伤组)10 只、C 组(低浓度复方芦丁蛇油膏组)10只和 D 组(中浓度复方芦丁蛇油膏组10 只，E 组(高浓度复方芦丁蛇油膏组)10只。制备深Ⅱ度烧伤模型，A 组除常规喂养外不做任何处理，烧伤各组烧伤后除常规喂养外，B 组创面给予隆力奇蛇油膏进行治疗，每天三次，持续治疗21天，C 组创面涂抹低浓度复方芦丁蛇油膏，D组创面涂抹中浓度复方芦丁蛇油膏，E组创面涂抹高浓度复方芦丁蛇油膏。

1.2 芦丁的制作 由于槐米中含有高达24%的芦丁，且槐米在中医上有着凉血止血，清肝泻火等多种功效，因此本研究使用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁[3]。取20 g槐米研成粉末，加入400 mL沸水溶解，加入饱和石灰水将pH调至9.0；70℃，40 kHz，200 W超声提取30min；加热回流60min；趁热抽滤，加入浓盐酸将pH调至9.0；静置沉淀24 h；抽滤，得到沉淀即为粗提取芦丁，60℃烘干备用。

1.3 各浓度复方芦丁蛇油膏的制备

取蛇油，均分为3等份，每份10 g，分别加入10 g、100 mg、200 mg芦丁粉剂，搅拌机搅拌至乳状，即制得各浓度复方芦丁蛇油膏。

1.4 检测指标

小鼠的创面组织用于ELISA检测，分别测定其TNF-α、TGF-β、EGF、VEGF含量用于评估炎症水平、生长因子水平及皮肤愈合效果。

1.5 统计学分析

将各组数据录入SPSS 22.0版统计学软件中进行处理，分别用百分比、（）的形式表示，并给予x²检验、t检验，如果P<0.05，说明各组数据比较差异显著。

2 结果

2.1 比较各组创面愈合率

观察各组创面愈合率，比较差异显著（P<0.05），详见表1

表1各组创面愈合率比较 ，%

注：#P<0.05是在相同时间点与单纯烧伤组相比；^P<0.05是在相同时间点与低浓度复方芦丁蛇油膏组相比；@P<0.05是在相同时间点与高浓度复方芦丁蛇油膏组相比。

2.2 比较各组创面TNF-α浓度含量变化

表2 各组创面组织检测TNF-α浓度含量变化，pg/mL

注：*P<0.05是在相同时间与正常对照组相比；#P<0.05是在相同时间点与单纯烧伤组相比；^P<0.05是在相同时间点与低浓度复方芦丁蛇油膏组相比；@P<0.05是在相同时间点与高浓度复方芦丁蛇油膏组相比。

2.3 比较各组创面TNF-α浓度含量变化

表3各组创面组织检测VEGF水平变化 ,阳性信号数/400*光镜视野

注：*P<0.05是在相同时间与正常对照组相比；#P<0.05是在相同时间点与单纯烧伤组相比；^P<0.05是在相同时间点与低浓度复方芦丁蛇油膏组相比；@P<0.05是在相同时间点与高浓度复方芦丁蛇油膏组相比。

3 讨论

芦丁属于黄酮类化合物，广泛存在于人们日常食用的各种蔬菜、水果和中草药中，尤其在槐米中含量达到24%[4]，产地广阔。芦丁有减低毛细血管通透性及脆性，防止血细胞凝集，促进细胞增生的作用，是天然的抗氧化剂，可调节众多疾病有关的细胞内和细胞外信号通路，影响细胞的生长、分化及其功能，对人们的健康、防病治病起着重要作用[5]。此外，芦丁还具有广泛的药理活性，可抗氧化、抗炎、抗病毒、抗癌、预防和治疗心脑血管疾病[6]。蛇油，为蛇类体内脂肪经炼制加工而成。在中国，用蛇油治疗烧烫伤具有悠久的历史，有关蛇油对烫伤的治疗效果也有一定的报道。现代科学研究表明蛇油主要由脂肪酸组成，其中以不饱和脂肪酸含量居多；此外还证实了蛇油具有抗氧化[7]、抑菌抗炎[8]、降血糖血脂[9]等生物活性，临床上主要用于治疗烧烫伤和冻裂伤，治疗皮肤病和护肤，以及防治运动损伤。许惠琴等[10]通过动物实验验证了蛇油具有治疗烫伤、抗炎、抗过敏的功效，并进一步揭示了其作用机理，即蛇油可降低烫伤部位毛细血管的通透性、减少渗出、保持创面清洁干燥、防止感染、促进愈合。钱美爱[11]将蛇油烫伤膏进行临床应用并与京万红软膏的临床应用效果进行了对比，结果发现在治疗烫伤方面蛇油的效果优于京万红，且患者无不良反应。此外，蛇油中富含丰富的饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸，对皮肤黏膜具有较强的渗透性、亲和性极易被皮肤吸收，民间一直用蛇油来理疗、保养皮肤。

本课题组用于芦丁蛇油组创面愈合时间及创面愈合率明显高于对单纯烧伤组，而中浓度组效果最佳，比较差异显著（P<0.05）。烧伤模型组炎症反应较假伤组重，TNF-α浓度含量复方芦丁蛇油组较单纯烧伤组各时相点均改善，中浓度复方芦丁蛇油膏组改善最佳。而创面组织中生长因子VEGF水平亦是使用复方芦丁蛇油后分泌明显增多。

总之，复方芦丁蛇油膏能改善创面炎症反应，提高生长因子水平而促进深Ⅱ度烧伤创面的愈合，值得临床进一步推广应用。

参考文献：

[1]Wang L,Hao C,Zhou B,et al.Application of Heparinized Selective Acellular Sheepskin in Wound-healing Promotion of Deep Second-degree Burns. Wounds. 2016.pii:WNDS20160929-3.

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[3]张依,周泽纯,全锦秋,蒙兰花.槐米中芦丁的提取工艺优化及检识[J].中国医药科学, 2020,10(03):38-41.

[4]龚盛昭，何远伦.从槐米中提取芦丁的研究[J].中国资源综合利用，2003(1):22-24.

[5]屠世忠,周伟登,蒋雪涛,罗奇石.半合成羟丙基芦丁及其抗渗效果初步观察[J].第二军医大学学报,1980(03):9-10.

[6]冯爽,马霄,冯亚莉,翟广玉.天然化合物芦丁的治疗潜力[J].化学通报,2021,84(12): 1338- 1344.

[7]刘一唯,杨成对,陈培榕,周华峰,段明星.蛇油中游离脂肪酸成份分析及其体外淬灭单线态氧能力的研究[J].现代科学仪器,2007(04):96-99.

[8]陈秀锦,黄佳宁,陈明中.蛇脂软膏的抑菌效果及毒性观察[J].海峡药学,2013,25(8): 38-39.

[9]Shirai N, Hayashi K, Suzuki H, et al. The effects of Erabu sea snake oil on the plasma lipids and glucose, and liver lipids in mice [J]. Nutr Res,2002,22: 1197-1207.

[10]许惠琴,金胜娥,徐立,等.蛇油治疗烫伤及其它药理作用的初步研究[J].南京中医学院学报,1990,6(2):52.

[11]钱美爱.蛇油烫伤膏治疗烧伤45例观察[J].江西中医药,1994,25:37-38.

基金项目：江西省卫生计生委中医药科研课题（2022B290）

作者简介：陈卉（1984-），女，主管护师，主要从事烧伤护理研究

通讯作者：罗锦花（1983-），女，副主任医师，主要从事烧伤救治及创面修复。