微生物检验中的生化反应你知道几个

微生物检验中的生化反应你知道几个

何明旭

苍溪县妇幼保健院  四川广元  628400

所谓的生化反应主要指的是微生物内环境中，由酶催化以及酶和反应物融入水中后所出现的物质反应，而生化反应实际操作过程中，水是微生物检验物质的基础载体和反应介质，所以无论是怎样的实验流程，都需要依靠水。

生化反应特点

微生物检验所进行的生化反应，从本质上来看属于远离物质平衡点的反应，所以在整个反应环节中，微生物需要从外界获取能量；参与反应的蛋白质物质通常被固定在细胞结构上，致使细胞内的物质不断进行生物化学反应，同时不同物质之间相互并不干扰，具有一定独立性，比如：细胞核中的DNA无论是复制还是转录，都需要提前附着在细胞结构上才能正常开展生化反应实验。

微生物生化反应的主要类型属于氧化还原反应，所以在实际操作时，首先要将物质定位在实验薄膜或者结构组架上，确保蛋白质物质之间能够高速传递；在微生物检验过程中，由于细胞中的生物化学反应主要在膜分隔的空间进行，所以物质之间存在着位置信息反应，即生物大分子只有在特殊的位置上才能进行反应，或者物质在特殊的功能上才能发挥应有的作用。比如：RNA转录时只能在细胞核中一定区域进行；蛋白质生物想要合成则需要依靠细胞质；线粒体只能合成自身所需求的蛋白质。

生化反应中膜分隔会导致细胞中的化学反应成为一种由浓度等级驱动的方向性化学反应，比如：溶酶体膜上V-型ATP酶，叶绿体类襄体膜上的F-型ATP酶等都是由H+浓度等级所驱动和决定。由于细胞内想要正常开展生物化学反应，都需要酶物质的不断催化，所以酶物质的催化率越高，所出现的反应条件则越温和，越具有方向性和目的性；生物体、细胞物质进行生物化学反应时，无论是何种复杂的网络结构体系或者细胞结构，都能够通过正负反馈得到有效调整。

常见生化反应

1.糖酵解

由于在微生物检验过程中各种微生物包含不同类型的分解糖以及酶，因此物质之间对于糖类的分解能力各不相同，并且分解相应糖类物质后所形成的产物也会随着细菌的种类出现极大差异性，有些物质会产生酸，有些物质会产生气体，所以以上检测流程可以作为细菌种类鉴别的理论根据，尤其是对于肠道杆菌的鉴别更加明显。

持续进行实验操作时，首先要保证无菌操作，使用接种针或者接种环选择培养物，并将其接种在发酵液体中，以此培养实验物质，如果培养环境为半固体的培养基，则需要使用接种针进行穿刺接种，每天观察物质变化，比如：培养基颜色有无改变，小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性等；如果培养基为半固体状态，则需要沿着穿刺线以及管壁区域进行实验。

本次实验主要检查细菌物质，对于各种类型的糖醇、糖稀等物质的发酵能力，从而鉴别各种细菌属性，加上每次实验经常需要同时接种多管，所以指示剂通常使用酚红、澳甲酚紫、澳百里蓝和An-drade指示剂。

2.淀粉水解

由于部分细菌能够通过分解淀粉的酶，将淀粉分解为麦芽糖或者葡萄糖，并且淀粉物质经过水解后遇到碘同样不会变为蓝色，所以在实验时要以18-24小时的纯培养物，接种在淀粉琼脂斜面或者接种区域的平板上，并且在室内温度36度左右，培养至少24-48小时，或者在室内温度20℃下培养五天。

经过一段时间的培养后，可以将碘试剂直接滴在培养基的表面结构上，如果培养基为液体状态，则需要增加碘试剂在试管中，由于液体之间的结合速度较快，所以能够立刻得到检测结果，如果培养基呈现出蓝色或者菌落周围呈现出无透明环，则说明淀粉被分解，呈现出阳性反应；如果试管中无透明环或者实验液体呈深蓝色，则说明实验为阴性反应。

在淀粉水解实验中，水解的整个流程、实验结果均与淀粉酶能力、培养时间、培养基含淀粉量以及实验物质的ph数值具有紧密联系，其中想要保证实验结果的准确性，培养基的ph数值必须为中性或者微酸性，其ph数值要始终维持在7.2；在实验过程中，淀粉琼脂平板不能低于室内温度，所以在实验前要临时制作。

3.甲基红

实际开展甲基红实验时，由于肠道细菌科属于发酵葡萄糖，所以在分解葡萄过程中会产生大量的丙酮酸物质，由于糖类代谢的途径各不相同，不同途径会产生乳酸、琥珀酸、乙酸、甲酸等大量酸性物质，一旦进行实验后会导致培养基ph数值大幅度降低甚至降低至4.5以下，此种现状会导致甲基红指示试剂变红。

实际进行实验操作过程中要选择全新的培养物少许，并将其接种在通用的培养基上，在36-30℃的环境下，至少培养3-5天，并且从第二天起每天需要选取培养液1ml，并将甲基红指示剂加入其中，详细观察培养液的颜色变化，如果培养液呈现出阳性，则颜色鲜红；弱阳性为淡红；阴性为黄色，以此类推，每天记录培养液与甲基红试剂的反应状态。

由于甲基红物质为酸性的，所以试剂自身ph数值范围在4.4-6.0，当Ph数值在5.0以下，试剂会随着酸度的增加红色会逐渐增强；如果ph数值在5.0以上，试剂则会随着碱度的增加逐渐现出黄色；如果ph数值接近5.0，试剂的颜色不会出现明显变化，如果发生以上现象，则需要延长培养基的培养时间并重复实验，以此保证实验结果的准确性。