高效液相色谱在中药真伪鉴别中的应用

高效液相色谱在中药真伪鉴别中的应用

高扬王宇(通讯作者） 危婷 黄雨鑫

延边州食品药品检验所， 吉林 延边，  136200

摘要：中药在疫情防控中起到重要作用，引发了学者对中药的广泛研究。然而市面上参差不齐的中药材和中药饮片质量，迫切需求一系列中药真伪方法的建立以保障医药的质量安全。本文以高效液相色谱出发，系统的阐述了高效液相色谱在中药单体和中药复方中的真伪鉴定的应用。旨在为高效液相色谱在中药真伪鉴定的应用中提供一定借鉴意义。

关键词：中药真伪鉴定；高效液相色谱；中药；中药复方

1. 高效液相色谱概述

高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）又被称为高压液相色谱、高速液相色谱，是色谱法的一个大的分支。高效液相色谱最初起源于60年代后期，是在经典液相色谱的基础上引入了气相色谱从而发展而来。经典的液相色谱所使用的固定相为＞100um的吸附剂如氧化铝、硅胶等，住效低，因此对物质的分离能力差。而与经典液相色谱相比，高效液相色谱具有高柱效，能够较快程度的对色谱中两种物质进行分离。主要因为高效液相色谱填料颗粒较小（5um-10um）。但这也不可避免的会引起高阻力，因此需要利用高压来输送流动相，故又称高压液相色谱[1]。

2. 中药真伪鉴定的意义

中医药文化是我国劳动人民在数千年与疾病作斗争中所总结的巨大精神财富，对中华民族的繁衍昌盛有着不可或缺的意义。随着近代科学事业的快速发展与巨大进步，能够运用现代科学技术对其进行认真的考证、分析、发掘而进一步的保证中药的质量，这对于有效继承发展中医药事业有着关键意义。目前在全国范围内有记载的中药种类可1000余种，然而很多黑心商人却为了利益造假，制造出一批又一批质量不过关的中药材来迷惑患者。从伪品的定义上来说，凡是不符合法规规定的品种或是以非药品冒充中药的皆是伪品。目前，我国的药品市场存在着数量极为多的伪品，需要等待被解决。比如，一些厂家为了增加利润选择使用成本更低的劣质中药来代替价格昂贵的中药进行药品生产。还有一些厂家为了降低药物成本会将一些非中药成分加入到中药中，比如假三七粉：商家将木薯淀粉和苦楝树叶混合、粉碎后，加入到真三七粉中，其外形和味道都和真三七粉有着极大的相似度。因此，为了进一步规范市场，避免劣质中药在市场的流通，丰富完善中药鉴定检测技术，熟悉并合理的运用现代的鉴定技术是相关人员必须要掌握的技能[3]。

中药的真伪鉴定是指鉴定中药的品种和质量是否符合规范。一般来说，中药的鉴定技术可以分为来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定四大类，故又称“四大鉴定”。中药的真伪鉴定可为中药品种的确定和质量标准的制订提供准确的科学依据，以保证中药品种的真实性及患者用药的安全有效。传统的中药鉴别包括性状鉴别、显微鉴别以及理化鉴别。性状鉴别是指通过对中药的形状、大小、颜色或是其他表面特征对中药进行鉴定，这需要对中药饮片有着较为深刻的了解和丰富的经验。因此，现代技术的合理应用极大的保障了中药质量标准体系的制定。

3. 高效液相色谱在中药真伪鉴别中的运用

3.1中药成分含量的检测

崔维恒将5μl板蓝根醇提物进样高效液相，其流动相分别为A液（0.1%甲酸的水溶液）和B液（0.1%甲酸的乙腈）。其梯度洗脱条件如下所述：5%B液（0～2 min）；5%～95%B液（2～22 min）；95% B液（22～27 min）；5% B液（27～30 min），0.3 mL/min流速。并结合Q Exactive质谱仪于板蓝根醇提物中定出111个主要化合物，其中分别为有机酸类化合物33个、苯丙素类化合物12个、氨基酸类化合物12个、生物碱类化合物11个、酰胺类化合物7个、核苷类化合物6个、黄酮类化合物5个、香豆素类化合物4个、萜类化合物4个、糖类化合物4个、酚类化合物2、甾体类化合物1个等。为板蓝根真伪鉴定和药效研究提供了物质基础和参考与借鉴[4]。刘月程等人将以超声为提取方法的柴胡甲醇醇提液3μl进样高效液相色谱，其流动相分别为A液（0.05%甲酸水溶液）和B液（0.05%甲酸乙腈溶液），其梯度洗脱条件如下所述：0%B液（0～5 min），0%～100%B液5～40 min，0.3 mL/min流速。并结合质谱仪以电喷雾离子源分离和鉴定出有效成分65个，其中皂苷类32个，黄酮类11个，酸类18个，以及其它类4个。壬二酸、甲氧基-十五烷酸、13-羟基-9，11-十八二烯酸、3，5，6-三羟基-4’，7-二甲氧基黄酮、4种化合物为首次在该植物中报道。这一研究为柴胡的质量控制，真伪鉴定和新型功效开发提供了研究基础[5]。

3.2中药复方成分检测

消瘀泄浊饮是治疗慢性肾衰竭的一个中药复方，由国家级名老中医李学铭教授在借鉴古往今来医家的学术基础上结合临床经验总结而来。消瘀泄浊饮由黄芪、桃仁、川牛膝、地龙、车前草、酒蒸大黄煎煮而成，有补虚泻实，祛瘀导滞之效。尽管消瘀泄浊饮在临床上已经被广泛使用和认可，但是该方的质量控制仍需要进一步规范。范桢亮等人使用高效液相色谱法测定了消瘀泄浊饮中的活性成分，以液质联用的方法共检测出了276种生物活性成份如苦杏仁苷、乔松素、大车前苷、雷公藤内酯甲、毛蕊异黄酮葡萄糖苷等。范桢亮通过进一步分析，选定了苦杏仁苷、杯苋甾酮、芦荟大黄素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、大黄素为消瘀泄浊饮的标志性生物活性成分。接着，作者又继续使用高效液相色谱法测定了消瘀泄浊饮中五大标志性生物活成分的含量，将五大成分的醇提液进样，流动相A是甲醇，流动相B是超纯水。洗脱条件为：5%→65% A液，0-25 min；65%→100% A液，25-30 min；100%A液，30-35 min；100%→5%A，35-37 min；5%A，37-40 min。对消瘀泄浊饮中主要活性成分的重复性，稳定性和回收率进行了检测，验证所得结果均较优化前更佳。为消瘀泄浊饮的作用机制的探究与开提供了实验依据

[6]。五神汤是用于治疗湿热蕴蒸而致的慢性骨髓炎的一大中药复方，源自于清代陈士铎，由金银花、牛膝、车前子、茯苓和紫花地丁5味药材组成。闫占宽等使用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱法对五神汤进行了成分鉴定，并确定了其中六种主要活性成分：秦皮甲素、京尼平苷酸、木犀草苷、咖啡酸、毛蕊花糖苷、β-蜕皮甾酮。闫占宽等在实验前期对高效液相色谱测定五神汤的条件进行了探索和进一步优化，考察了常见的流动相体系如乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液等对于五神汤中各物质的洗脱效果。闫占宽等在研究中发现以0.1%磷酸水（A）-乙腈（B）为流动相，基线相对平稳，峰形较好，对各物质的分离效果更加理想。对比203、254、330nm等不同波长情况下的出峰情况发现，在254 nm波长下的色谱峰响应值较高、信息较全，是五神汤定量测定最适宜的检测波长。闫占宽等对五神汤各成分的含量测定为规范建立五神汤的质量控制标准提供了重要借鉴意义[7]。

[1]周鹏妹. 高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展 [J]. 化学工程与装备, 2022, (08): 249-50.

[2]章一. 高效液相色谱法的优点与实际问题中的应用 [J]. 化工管理, 2014, (24): 127.

[3]李海洋, 桂新景, 侯富国, et al. 中药材和中药饮片快速鉴定技术研究进展 [J]. 分析测试学报, 2023, 42(08): 1026-38.

[4]崔维恒, 邓晓兰, 王思琴. 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱快速鉴定板蓝根的化学成分 [J]. 化学研究, 2023, 34(04): 313-8.

[5]刘月程, 田振华. 超高效液相色谱–四级杆静电场轨道阱质谱法快速鉴定柴胡化学成分 [J]. 化学分析计量, 2022, 31(08): 5-12.

[6]范桢亮, 鲁科达, 范军芬, et al. 消瘀泄浊饮中活性成分的鉴定以及HPLC法测定其中5种关键成分 [J]. 辽宁中医药大学学报: 1-9.

[7]闫占宽, 张敏, 刘钦伟, et al. 五神汤化学成分鉴定及京尼平苷酸、秦皮甲素、咖啡酸、木犀草苷、β-蜕皮甾酮和毛蕊花糖苷定量检测 [J]. 药物评价研究, 2023, 46(05): 1047-56.

作者简介：

    王宇（1986——）性别：女，民族：汉族，籍贯：吉林省，学历：硕士研究生，职称：副主任药师，研究方向：药物分析检验。