免疫荧光法在小儿上呼吸道感染微生物快速检验中的应用价值

免疫荧光法在小儿上呼吸道感染微生物快速检验中的应用价值

武双

湖北省孝昌县第一人民医院  湖北孝昌  432900

【摘要】目的：探讨免疫荧光法在小儿上呼吸道感染微生物快速检验中的应用价值。方法：本文收集了112名上呼吸道感染病的临床资料，从2020年01月至2021年01月进行了调查。应用免疫荧光技术，对纳入病例的鼻、咽、喉分泌物进行微生物检测，并对纳入病例的病毒感染率和类型分布进行统计。结果：在112名病人中，共检测到100名病毒感染，其中病毒感染率达89.29%；其中30.00%的患者是腺病毒感染；流感病毒 A型和 B型流感病毒的比例分别为20.00%和15.00 %；合胞病毒的比例为12.00%；副流感病毒1,2,3例分别为6.00%,7.00%,10.00%。结论：应用免疫荧光技术可以快速检测上呼吸道感染的病毒类型和类型，为临床医生提供可靠的诊断依据。

【关键词】免疫荧光法；小儿上呼吸道感染微生物快速检验；应用价值

小儿上呼吸道感染是一种常见的呼吸系统疾病，主要发生在冬季和春季，季节性强。小儿鼻咽部、鼻咽、咽部等部位可引起各种病因引起的上呼吸道炎症。临床表现为干咳、乏力、头痛、腹泻、流涕、咽部不适、发烧等。如果不及时治疗，会导致病情恶化，还会出现鼻窦炎、颈淋巴结炎、支气管炎、中耳炎、肺炎等。临床上的研究表明，流感、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒等病毒都会引起上呼吸道感染。免疫荧光技术的作用机理是将免疫技术和荧光标记技术有机地结合起来，它的主要功能是检测特定的蛋白质在细胞中的分布。免疫荧光技术能较好地检测到荧光素发出的荧光，为精确定位抗原细胞提供了方便。该方法检测速度快，灵敏度高，特异度高，在细菌、真菌、病毒等方面得到了广泛的应用[1]。所以，在确定病因的基础上，给予病人合理的治疗，可以提高病人的预后。本研究本文收集了112名上呼吸道感染病的临床资料，从2020年01月至2021年01月进行了调查。应用免疫荧光技术，对纳入病例的鼻、咽、喉分泌物进行微生物检测，并对纳入病例的病毒感染率和类型分布进行统计，探析了免疫荧光法在小儿上呼吸道感染微生物快速检验中的应用价值，报道如下。

1资料和方法

1.1一般资料

本文收集了112名小儿上呼吸道感染病的临床资料，从2020年01月至2021年01月进行了调查。其中年龄4-12岁，平均（7.21±2.21）岁，男65：女47。

1.2方法

1.2.1检测试剂：用于流感病毒 A, B，腺病毒，呼吸道合胞病毒，副流感病毒1,2,3型。另外，还有封闭液、浓缩型洗涤液和病原体控制的玻片。

1.2.2标本采集和处置：①采用负压吸引器，将2~3 ml患者鼻咽、喉部的分泌物收集，然后用消毒的生理盐水将其取出。②重复吹干分泌物，把它送到离心机中。③离心除去上清液，转速为500转/分钟，约8分钟。④用磷酸盐缓冲剂清洗沉淀，混合均匀。⑤反复进行离心，及时除去上层，直至上清液的粘性消失。⑥将最后一次离心的沉淀物置于0.5-1 ml的磷酸钙缓冲盐溶液中，然后吹气，形成悬浮液。⑦将25微升的细胞悬液在病原体控制的玻璃薄片中精确地注入到每一个细胞样的孔隙中。⑧将点样孔吹干，然后用冷丙酮进行固定，时间为10分钟。

荧光染色方法：①将20 ul的荧光抗体注射到对照玻璃样孔洞中，然后用保湿箱培养，持续30分钟。也就是在1~7个样孔中分别滴加荧光标志抗体、荧光标志单克隆抗体做阴性和阳性对照，同时还可以用呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒 A、 B、副流感病毒1、2、3型试剂盒作为样本孔洞。②先将玻片细胞用洗涤剂清洗，然后用适当的蒸馏水冲洗1分钟。③在干燥蒸馏水后，将密封溶液1滴于玻璃薄片的孔洞内，然后将玻璃盖盖上，在荧光显微镜下进行观察。

1.2.3诊断标准：荧光显微镜检查呈绿色，没有荧光则判定为阴性。在显微镜下，200倍的放大后，至少有2个荧光细胞被确认为阳性。

1.3观察指标

对纳入病例的鼻、咽、喉分泌物进行微生物检测，并对纳入病例的病毒感染率和类型分布进行统计。

1.4统计学处理

SPSS23.0软件中，计数x2统计，计量行t检验，P＜0.05表示差异有意义。

2结果

在112名病人中，共检测到100名病毒感染，其中病毒感染率达89.29%；其中30.00%的患者是腺病毒感染；流感病毒 A型和 B型流感病毒的比例分别为20.00%和15.00 %；合胞病毒的比例为12.00%；副流感病毒1,2,3例分别为6.00%,7.00%,10.00%。

3讨论

上呼吸道感染疾病是一种比较常见的疾病，症状主要包括咳嗽、发烧、流鼻涕等。如果是在发病后，会在很短的时间内出现局部流行，并且有可能出现肾脏炎等并发症，会对病人的身体健康和安全造成不良影响，所以要根据病因来制定相应的治疗方案，但需要先通过诊断明确感染微生物类型[2]。

目前有多种检测呼吸道病毒的方法，例如病毒分离培养、病毒粒子电镜检测、免疫荧光分析等。但是，由于病毒的分离培养和电子显微技术的使用，需要大量的样本和操作，所以其阳性率很低，所以并不是很受欢迎。而荧光免疫则是一种检测抗原的检测手段，它是根据抗体的反应机理，将荧光蛋白与已知的抗原或抗体结合，制作成荧光标志物，再用这种荧光抗体（或抗原）作分子探测器，对细胞或组织中的各种抗体进行检测

[3-4]。通过荧光显微镜可以看到，因为在细胞或组织中存在抗原抗体复合物的表面主要成份中存在着荧光素，在激发光的作用下，磷光体产生强烈的荧光（桔红或黄绿），并能观察到细胞或组织中的荧光位置，确定抗体的性质、定位和定位，并通过定量技术进一步确定其含量，其使用时操作简单，采用负压法提取分泌物，经多次分离、清洗，制成玻璃薄片，经荧光显微镜观察。与之相比，荧光免疫方法可以缩短检测时间、简化操作，该方法对激素、病毒、微生物、蛋白质等生物活性物质的敏感性和特异性均有很大的提高[5-6]。

本研究显示，在112名病人中，共检测到100名病毒感染，其中病毒感染率达89.29%；其中30.00%的患者是腺病毒感染；流感病毒 A型和 B型流感病毒的比例分别为20.00%和15.00 %；合胞病毒的比例为12.00%；副流感病毒1,2,3例分别为6.00%,7.00%,10.00%。

综上，应用免疫荧光技术可以快速检测上呼吸道感染的病毒类型和类型，为临床医生提供可靠的诊断依据。

参考文献：

[1]夏存华. 免疫荧光法在小儿上呼吸道感染微生物快速检验中的应用[J]. 中外医疗,2021,40(14):189-191.

[2]刘芳,牛亚倩,常钰玲,宋艳梅,陈彻,楚惠媛,李鹏杰. 分子即时检验(POCT)在病毒性呼吸道感染疾病诊断中的应用前景[J]. 中国感染控制杂志,2021,20(03):279-282.

[3]钟佩敏,吴莉莉,黎丽冰,陈巧玲. 白细胞计数联合C反应蛋白及降钙素原在上呼吸道感染中的检验价值分析[J]. 中国实用医药,2021,16(07):67-69.

[4]孟令竹,尚帅. 白细胞联合C-反应蛋白与降钙素原对上呼吸道感染的检验价值[J]. 当代医学,2021,27(05):19-22.

[5]孙续禄. 免疫荧光法在小儿上呼吸道感染微生物快速检验中的应用效果[J]. 国际感染病学(电子版),2020,9(02):105.

[6]黄智明. 免疫荧光法在微生物快速检验中的应用分析[J]. 中国实用医药,2020,15(03):93-94.