沉默长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞癌侵袭能力的影响

沉默长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞癌侵袭能力的影响

张洋 宿伟鹏 赵化荣 龚忠诚*(通讯作者）

新疆医科大学第一附属医院 新疆 乌鲁木齐 830054

摘要 目的：本研究拟探讨沉默长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞癌细胞SCC9侵袭能力的影响。方法：用慢病毒转染至SCC-9细胞中，使HOTAIR沉默，利用Transwell检测实验组及对照组细胞侵袭能力变化。结果：沉默HOTAIR后，舌鳞癌细胞SCC9侵袭能力减弱，，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：沉默HOTAIR抑制舌鳞状细胞癌细胞SCC9的侵袭。

关键词： HOTAIR; 舌鳞癌；侵袭

头颈部肿瘤是常见的恶性肿瘤之一，发病率有上升和年轻化趋势，每年有逾50万例新发病例。男性人群中高发。在我国男性肿瘤患者中的发生率、死亡率分别为第6位，第7位。鳞状细胞癌为头颈部肿瘤最常见的病理类型，烟草和酒精是主要病因[3]，除此之外，头颈部鳞状细胞癌的发生，还可能与口腔卫生、嚼槟榔、营养缺乏、遗传因素、人类乳头状病毒感染有关［1-3］。本文拟探讨HOTAIR对舌鳞癌侵袭能力的影响，为舌癌的临床诊疗带来新的思路。

1. 材料与方法

1.1细胞培养SCC9人舌鳞状细胞癌细胞购自于武汉普诺赛生物，细胞培养条件为DMEM/F12+10%FBS+1% P/S+0.5mM丙酮酸钠+400ng/ml氢化可的松，37℃，5% CO2，饱和湿度。取对数生长期的细胞用于后续实验。

1.2慢病毒转染 收集SCC9细胞，用完全培养基制备2 mL的细胞悬液，其细胞密度为5×104个/mL，在96孔板中共接种12孔，每孔为100 μL，其中3孔为Control组，37℃培养24 h，至细胞汇合度为30 %左右开始感染慢病毒。选取MOI=100为最佳感染条件，进行后续实验。

1.3 细胞侵袭检测 提前将基质胶在4℃过夜融化；用4℃预冷的无血清培养基稀释基质胶至终浓度1 mg/ml，冰上操作；将经过稀释的100 μl基质胶垂直加入至chamber上室底部中央，放置37℃温箱约5 h使其成为胶状；收集细胞，用PBS将收集的细胞洗涤一次后，再用无血清培养基洗涤一次，用无血清培养基悬浮细胞，调整细胞悬液密度至2×105个/mL；将100 μl细胞悬液加入上室，600 μl完全培养基加入下室（即24孔板底部），每组3个复孔，在培养箱中继续培养，培养72h；用PBS将取出的小室冲洗2次，4%的甲醛室温固定20 min；取出小室，再用PBS冲洗2次，移到预先加入400 μl的Giemsa染液A液的孔中，室温染色1 min；不弃去A液。加入Giemsa染液B液800 μl 染色5 min；小室取出后用PBS冲洗2次，后用湿棉棒小心擦去上室表面的细胞，底面朝上晾干；移至载玻片上，显微镜下计数细胞侵袭数量。

1.4 统计分析 统计使用SPSS 26对实验数据进行分析，所有数据采用均值±标准差（）表示，两组之间的差异用独立样本t检验，P＜0.05表明差异有显著性。

2 结果

利用Transwell侵袭实验计数穿膜细胞数量，明确HOTAIR对细胞侵袭的影响，结果显示：在SCC9细胞中，沉默HOTAIR组细胞侵袭能力较阴性对照组减弱，差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。该实验表明在SCC9中，沉默HOTAIR表达抑制细胞的侵袭能力。

3 讨论

恶性肿瘤是全球面临的重大健康问题之一，随着人口老龄化和生活方式的改变，恶性肿瘤发病率和死亡率一直居高不下，使其成为威胁人类健康和缩短预期寿命的最大挑战之一，严重威胁人类健康。根据世界卫生组织/国际癌症研究机构(世卫组织/国际癌症研究机构)最新的《全球癌症报告》，到2020年，全世界将有大约1930万新的癌症病例，大约1000万人死亡。此外，据预测，未来20年癌症病例可能会增加60%。几乎所有国家的临床癌症发病率都在上升，2022年国家癌症中心发布最新癌症报告[4]，2016年我国新发癌症病例约406.4万例，相当于我国平均每天有1万多人会被诊断为新发癌症，每小时有464人新患癌症，平均每分钟有7人确诊。

周围组织局部侵袭是肿瘤转移的必要初始步骤。虽然癌症的诊断和治疗取得了快速的进展，但是转移性癌症患者的预后仍然很差。HOTAIR在乳腺癌组织中高表达，过表达HOTAIR可促进乳腺癌细胞MCF-7侵袭、转移及EMT的发生。在体内研究显示，过表达HOTAIR的荷瘤裸鼠更容易出现肝脏转移。提示过表达HOTAIR提高了乳腺癌的侵袭能力。我们的研究结果与大多数人研究结果一致。显示沉默HOTAIR可抑制舌鳞状细胞癌的侵袭。

综上所述，HOTAIR 可作为参与舌鳞状细胞癌发生和发展，放化疗敏感性的分子机制中的一个关键调控因子，可能为舌鳞状细胞癌治疗带来新策略。

参考文献

[1].Baili E, Gazouli M, Lazaris AC, Kanavidis P, Boura M, Michalinos A, Charalabopoulos A, Liakakos T, Alexandrou A. Genetic Impact of HOTAIR, LINC00951, POLR2E and HULC Polymorphisms in Histopathological and Laboratory Prognostic Factors in Esophageal Cancer in the West: A Case-Control Study. Cancers (Basel). 2024 Jan 26;16(3):537.

[2].Pan S, Liu Y, Liu Q, et al. HOTAIR/miR-326/FUT6 axis facilitates colorectal cancer progression through regulating fucosylation of CD44 via PI3K/AKT/mTOR pathway[J]. Biochim Biophys Acta Mol Cell Res,2019,1866(5):750-760.

[3].Chen P, Liu Z, Xiao H, Yang X, Li T, Huang W, Zhou H. Effect of tumor exosome-derived Lnc RNA HOTAIR on the growth and metastasis of gastric cancer. Clin Transl Oncol. 2023 Dec;25(12):3447-3459