过表达长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞癌侵袭能力的影响

过表达长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞癌侵袭能力的影响

张洋 宿伟鹏 赵化荣 龚忠诚*(通讯作者）

新疆医科大学第一附属医院 新疆 乌鲁木齐 830054

摘要 目的：本研究拟探讨长链非编码RNA HOTAIR对舌鳞癌细胞SCC9侵袭能力的影响。方法：用慢病毒转染至SCC-9细胞中，使HOTAIR过表达，利用Transwell检测实验组及对照组细胞侵袭能力变化。结果：过表达HOTAIR后，舌鳞癌细胞SCC9侵袭能力增强，，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：过表达HOTAIR促进舌鳞状细胞癌细胞SCC9的侵袭。

关键词： HOTAIR; 舌鳞癌；侵袭

口腔癌是头颈部恶性肿瘤中的一组疾病，其发病率居头颈部恶性肿瘤的第二位。口腔癌的症状及特点与解剖部位关系密切。口腔的范围从唇皮肤黏膜交界（唇红缘）处至口咽入口，上界由软腭和硬腭连接构成，侧面为扁桃体前柱，下面有舌乳头环绕。口腔黏膜由非角化复层鳞状上皮黏膜构成。黏膜下有许多小涎腺，并且高度集中在硬腭和软腭[1]。lncRNAs 作为一个新兴的基因表达调节器而备受关注，HOTAIR 作为其主要成员在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用[2-3]。本文拟探讨HOTAIR对舌鳞状细胞癌侵袭力的影响，旨在探寻降低舌癌区域淋巴结转移及远处转移的指标，为提高舌癌患者生活质量，降低转移风险提供理论基础。

1 材料与方法

1.1细胞培养SCC9人舌鳞状细胞癌细胞购自于武汉普诺赛生物，细胞培养条件为DMEM/F12+10%FBS+1% P/S+0.5mM丙酮酸钠+400ng/ml氢化可的松，37℃，5% CO2，饱和湿度。取对数生长期的细胞用于后续实验。

1.2慢病毒转染 收集SCC9细胞，至细胞汇合度为30 %左右开始感染慢病毒。选取助感染A液或助感染P液、MOI=100为最佳感染条件，进行后续实验。

1.3 Transwell检测细胞侵袭力 将经过稀释的100 μl基质胶垂直加入至chamber上室底部中央，收集细胞，调整细胞悬液密度至2×105个/mL；将100 μl细胞悬液加入上室，600 μl完全培养基加入下室（即24孔板底部），在培养箱中继续培养，培养72h；用PBS将取出的小室冲洗2次，4%的甲醛室温固定20 min；取出小室，再用PBS冲洗2次，移到预先加入400 μl的Giemsa染液A液的孔中，室温染色1 min；不弃去A液。加入Giemsa染液B液800 μl 染色5 min；小室取出后用PBS冲洗2次，后用湿棉棒小心擦去上室表面的细胞，底面朝上晾干；移至载玻片上，显微镜下计数细胞侵袭数量。

1.4 统计分析 统计使用SPSS 26对实验数据进行分析，所有数据采用均值±标准差（）表示，两组之间的差异用独立样本t检验，P＜0.05表明差异有显著性。

2 结果

为明确HOTAIR对舌鳞状细胞癌侵袭的影响，利用Transwell侵袭实验计数穿膜细胞数量，在SCC9细胞中，过表达HOTAIR组细胞侵袭能力较空载对照组增强，差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。该实验表明在SCC9中，过表达HOTAIR促进舌鳞状细胞癌细胞的侵袭能力。

3 讨论

尽管口腔的所有部位都非常容易看到和摸到，病变部位多数较表浅，而且口腔病变的检查手段也较为简单，可以通过仔细查体，以及辅助检查如镜检、影像学检查，容易发现病变，且容易活检明确诊断，因此口腔肿瘤相对来说容易早期发现、早期诊断，早期治疗。但因为患者警惕性不高，口腔发生的肿瘤早期也缺乏特征性症状，加之没有很好的口腔癌筛查体系，疾病早期容易被忽视，造成误诊或漏诊，所以在确诊时相当一部分口腔恶性肿瘤为中期、晚期病变。肿瘤分子生物学发展迅速，肿瘤发生发展不能单一的认为仅与蛋白质编码序列的组区域相关。非编码RNA（ncRNA）在几乎所有生物过程中发挥的至关重要作用。这包括长链非编码RNA（lncRNA）、环状RNA、微小RNA（miRNA）、piwiRNA等等。由于其长度超过200个核苷酸且缺乏蛋白质编码潜能，lncRNA一直是研究人员特别关注的对象，因为出现了它们作为多维度调控元素的证据。已经证明lncRNA能够调控基因转录、表观遗传修饰以及其他转录后调控机制。与肿瘤发生发展密切相关，参与肿瘤的进展、侵袭及转移过程[4-5]。

在子宫内膜癌中，沉默HOTAIR抑制子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭及转移。提示HOTAIR参与子宫内膜癌的侵袭及转移过程[16]。我们的研究结果与多数人结论一致，显示过表达HOTAIR后，SCC9的细胞侵袭能力增加，差异有统计学意义。提示HOTAIR参与舌鳞状细胞癌的侵袭。

综上所述， HOTAIR 作为lncRNAs主要成员之一，在恶性肿瘤的发生、发展过程中起重要作用。HOTAIR同样参与舌鳞状细胞癌发生和发展，可能为舌鳞状细胞癌靶向治疗带来新策略，降低舌癌患者复发转移风险。

参考文献

[1].Buranjiang G, Abuduwanke A, Li X, Abulizi G. LncRNA HOTAIR enhances RCC2 to accelerate cervical cancer progression by sponging miR-331-3p. Clin Transl Oncol. 2023 Jun;25(6):1650-1660

[2].Khaliefa AK, Desouky EM, Hozayen WG, Shaaban SM, Hasona NA. miRNA-1246, HOTAIR, and IL-39 signature as potential diagnostic biomarkers in breast cancer. Noncoding RNA Res. 2023 Feb 10;8(2):205-210.

[3].Baili E, Gazouli M, Lazaris AC, Kanavidis P, Boura M, Michalinos A, Charalabopoulos A, Liakakos T, Alexandrou A. Genetic Impact of HOTAIR, LINC00951, POLR2E and HULC Polymorphisms in Histopathological and Laboratory Prognostic Factors in Esophageal Cancer in the West: A Case-Control Study. Cancers (Basel). 2024 Jan 26;16(3):537.