1广州汇元医药科技有限公司,510378;
2佛山市第一人民医院,528000)
摘要:建立一种专属、灵敏的气相质谱分析方法,用于测定奥利司他中苯磺酸甲酯。实验结果表明,苯磺酸甲酯检测限是1 ng/ml,在1~60 ng/ml范围内呈良好的线性关系,相关系数R2为0.9981,在33.36~50.04 ng/ml范围内平均回收率为80.7~104.6%之间。本方法灵敏度高,重现性好,可用于奥利司他中苯磺酸甲酯的检测。
关键词:奥利司他、苯磺酸甲酯、气相质谱
Detection methyl benzenesulfonate in orlistat by GC/MS
(Guanqiong Yang, Guangzhou Huiyuan Pharmaceutical Technology Co., Ltd ;Huaxing Yang 510378;the First People's Hospital of Foshan,528000)
【Abstract】A specific and sensitive gas chromatography-mass spectrometry analysis method was established for the determination of methyl benzenesulfonate in orlistat. The experimental results show that the detection limit of methyl benzenesulfonate is 1 ng/ml, and there is a good linear relationship in the range of 1~60 ng/ml. The correlation coefficient R2 is 0.9981, and the average recovery rate in the range of 33.36~50.04 ng/ml is between 80.7~104.6%. This method has high sensitivity and good reproducibility, and can be used for the detection of methyl benzenesulfonate in orlistat.
【Keywords】orlistat、 methyl benzenesulfonate、GC/MS
奥利司他为长效和强效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂[1],临床主要用于体重超标及肥胖症的治疗能够竞争性抑制食物中的脂肪类成分在人体内的吸收,从而起到减轻体重和降低血脂的作用,是一种应用广泛的抗肥胖药[2]。随着人们认知的逐渐提高,对于药物中有害物质的关注度越来越重视。有资料表明,苯磺酸甲酯是奥利司他的工艺杂质,含有警示结构的潜在遗传毒性杂质。本研究采用了气质联用技术对其进行检测,可以有效检测奥利司他中的苯磺酸甲酯。
1材料与方法验证
1.1仪器与试药
气相质谱Agilent 8860-5977B
正庚烷,色谱级
奥利司他(中山万汉制药有限公司,批号WT194-06-02、WT151-18-901、WT170-05-901)
苯磺酸甲酯对照品,中国检定研究院
1.2色谱条件
气相条件:Agilent® HP-5MS(0.25 mm × 30 m × 0.25 μm)毛细管柱;初始柱温为50°C,保持1分钟,以每分钟20°C的速率升温至280°C,保持0分钟;进样口温度250°C;载气为氦气,流速为每分钟1mL,不分流进样。
质谱条件采用EI离子源,离子源温度为280°C;传输线温度为280°C;检测模式为MRM,定量检测参数见表1。
表1MRM参数表
化合物 | 母离子 (m/z) | 产物离子 (m/z) | 碰撞能量 (eV) |
MBS | 172 | 77 | 27 |
141 | 77 | 9 | |
77 | 51 | 15 |
1.3溶液配制
空白溶液:正庚烷
对照品溶液:精密称取苯磺酸甲酯对照品适量,加正庚烷稀释成每ml约含41.7ng苯磺酸甲酯的溶液。
供试品溶液:精密称取奥利司他0.1g置10ml量瓶中,加正庚烷稀释至刻度,摇匀,即得(10mg/ml奥利司他)同法制备2份。
定量限溶液:用对照品溶液稀释成约每ml约含1ng苯磺酸甲酯的溶液。
1.4方法验证
1.4.1系统适用性和专属性:取空白溶液和对照品溶液进样。
1.4.2定量限:取定量限溶液连续进3次,考察信噪比和RSD。
1.4.3线性与范围
精密称取苯磺酸甲酯对照品适量,加正庚烷稀释成每ml约含5、10、20、40、60 ng的线性溶液2-8,另取定量限浓度作为线性溶液1。
线性溶液1-8进样,每个样进样3次,记录色谱图。
1.4.4准确性
准确度对照品溶液:精密量取苯磺酸甲酯对照品储备溶液(1000ng/mL)适量,加正庚烷稀释成每ml含苯磺酸甲酯417ng溶液。
准确度空白供试品溶液:精密称取奥利司他0.1g置10ml量瓶中,加正庚烷稀释至刻度,摇匀,作为空白供试品溶液(10mg/ml )。
准确度溶液1~3:精密称取奥利司他0.1g置10ml量瓶中,加入准确度对照品溶液0.8ml、1.0ml、1.2ml,加正庚烷稀释至刻度,摇匀,即得准确度溶液1(加标80%苯磺酸甲酯)、准确度溶液2(加标100%苯磺酸甲酯)、准确度溶液3(加标120%苯磺酸甲酯)。分别同法制备3份。
取空白溶液,准确度对照品溶液,准确度空白供试品溶液,准确度溶液1~3进样,记录色谱图。
1.4.5精密度
两名人员分别配制6份供试品溶液,进行重复性和中间精密度实验,考察浓度RSD。
1.4.6溶液稳定性
在室温条件下,取对照品溶液,供试品溶液分别于0、2、4、6、8小时进样,进样量1μl,记录色谱图。
1.4.7耐用性
进样口温度改变±10°C,载气流速改变±0.1mL/min,传输线温度±10°C,离子源温度±10°C,分别进样1针空白、1针对照品溶液,记录对照品溶液色谱峰出峰时间、峰面积。
2结果
2.1系统适用性和专属性
空白溶液对苯磺酸甲酯无干扰;连续进样6针,主峰响应RSD5.1%≤10.0%,主峰保留时间RSD 0.1%≤1.0%(图1、图2)。
图1 空白溶剂
图2 苯磺酸甲酯对照品
2.2定量限
定量限为1 ng/ml,信噪比在9.1~10.6之间,RSD为8.0%。
2.3线性与范围
以浓度值为X轴,峰面积为Y轴作线性回归,得到线性回归方程y = 551.41x + 433.10, R2为0.9981,在1~60 ng/ml范围内线性良好(见表2和图3)。
表2 线性结果
理论浓度(ng/mL) | 苯磺酸甲酯 | |
响应值 | 实际浓度(ng/mL) | |
1 | 1190 | 1.36 |
1196 | 1.37 | |
1218 | 1.42 | |
5 | 3605 | 5.76 |
3638 | 5.82 | |
3796 | 6.10 | |
10 | 5441 | 9.10 |
5428 | 9.07 | |
5561 | 9.32 | |
20 | 10951 | 19.12 |
11121 | 19.43 | |
11659 | 20.41 | |
40 | 21808 | 38.87 |
21989 | 39.20 | |
22170 | 39.53 | |
60 | 33679 | 60.47 |
34335 | 61.66 | |
38842 | 69.86 | |
线性回归方程 | y = 551.41x+ 433.10 | |
R2 | 0.9981 |
图3 线性回归图
2.4准确度
测定结果(表3~表5)表明,加标供试品回收率在80.7%~104.6%之间,能准确测定苯磺酸甲酯。
表3 准确度溶液1(加标80%苯磺酸甲酯)结果
苯磺酸甲酯投入量(ng/mL) | 空白供试品溶液含量(ng/mL) | 苯磺酸甲酯 | ||
实际检出含量(ng/mL) | 回收率 (%) | |||
1 | 33.36 | 1.25 | 29.41 | 84.4 |
31.57 | 90.9 | |||
2 | 29.96 | 86.1 | ||
29.56 | 84.9 | |||
3 | 28.16 | 80.7 | ||
29.93 | 86.0 | |||
均值 | 29.76 | 85.5 | ||
RSD(%) | 3.7 | 3.9 |
表4准确度溶液2(加标100%苯磺酸甲酯)结果
苯磺酸甲酯投入量(ng/mL) | 空白供试品溶液含量(ng/mL) | 苯磺酸甲酯 | ||
实际检出含量(ng/mL) | 回收率 (%) | |||
1 | 41.7 | 1.25 | 44.86 | 104.6 |
44.50 | 103.7 | |||
2 | 44.41 | 103.5 | ||
43.03 | 100.2 | |||
3 | 42.47 | 98.8 | ||
41.14 | 95.7 | |||
均值 | 43.40 | 101.1 | ||
RSD(%) | 3.3 | 3.4 |
表5准确度溶液3(加标120%苯磺酸甲酯)结果
苯磺酸甲酯投入量(ng/mL) | 空白供试品溶中含量(ng/mL) | 苯磺酸甲酯 | ||
实际检出含量(ng/mL) | 回收率 (%) | |||
1 | 50.04 | 1.25 | 46.15 | 89.7 |
46.62 | 90.7 | |||
2 | 46.87 | 91.2 | ||
44.56 | 86.6 | |||
3 | 43.13 | 83.7 | ||
43.97 | 85.4 | |||
均值 | 45.22 | 87.9 | ||
RSD(%) | 3.4 | 3.5 |
2.5精密度
结果(表6)可得重复性和中间精密度的RSD分别为3.9%和3.8%。
表6 精密度结果
重复性 | 中间精密度 | ||
供试品 | 浓度(ng/ml) | 供试品 | 浓度(ng/ml) |
1 | 36.60 | 7 | 39.97 |
2 | 38.41 | 8 | 38.59 |
3 | 40.74 | 9 | 41.65 |
4 | 37.61 | 10 | 38.82 |
5 | 39.83 | 11 | 37.95 |
6 | 38.74 | 12 | 37.73 |
6份RSD% | 3.9 | - | 3.8 |
12份RSD% | 3.7 |
2.6溶液稳定性
苯磺酸甲酯对照品溶液在常温放置6h内测定浓度与 0 h 相比的百分比为10%以内,稳定性良好(表7);供试品溶液在常温放置4h内测定浓度与 0 h 相比的百分比为10%以内稳定性良好(表8)。
表7对照品稳定性结果
小时(h) | 保留时间(min) | 浓度(ng/ml) | 浓度均值(ng/ml) | 与0天相比百分比(%) | |
对照品 | 0 | 7.791 | 39.91 | 40.13 | - |
7.788 | 40.36 | ||||
2 | 7.794 | 42.07 | 40.37 | 0.6 | |
7.792 | 38.67 | ||||
4 | 7.795 | 38.05 | 36.71 | -8.5 | |
7.791 | 35.37 | ||||
6 | 7.794 | 38.15 | 37.11 | -7.5 | |
7.788 | 36.06 | ||||
8 | 7.795 | 35.26 | 34.81 | -13.3 | |
7.791 | 34.36 |
表8 供试品稳定性结果
小时(h) | 保留时间(min) | 浓度(ng/ml) | 浓度均值(ng/ml) | 与0天相比百分比(%) | |
供试品 | 0 | 7.795 | 45.00 | 45.11 | - |
7.798 | 45.23 | ||||
2 | 7.792 | 41.96 | 41.97 | -7.0 | |
7.798 | 41.98 | ||||
4 | 7.794 | 41.89 | 41.05 | -9.0 | |
7.799 | 40.21 | ||||
6 | 7.795 | 40.73 | 40.50 | -10.2 | |
7.798 | 40.27 | ||||
8 | 7.794 | 40.51 | 39.79 | -11.8 | |
7.795 | 39.07 |
2.7耐用性
进样口温度改变±10°C,载气流速改变±0.1mL/min,传输线温度改变±10°C,离子源温度改变±10°C,保留时间RSD均<10%;响应值RSD均<10%。
2.8样品检测
按“1.3溶液配制”中配制空白溶液、对照品溶液、定量限、供试品溶液,按“1.2色谱条件”进行样品测定,3批(WT194-06-02、WT151-18-901、WT170-05-901)奥利司他中苯磺酸甲酯检测结果分别为2.60μg/g、3.72μg/g、2.22μg/g,均小于4.17μg/g。
3结论
方法验证证明该方法准确,线性关系良好,回收率符合规定,同时3批样品均能有效检出苯磺酸甲酯,结果符合规定。说明该检测方法可以为奥利司他质量标准的制定提供实验依据。
参考文献:
[1]温燕等,顶空气相色谱法测定奥利司他中残留溶剂,药学实践杂志,2010年5月25日第28卷第3期
[2] 齐绍康、袁捷,新型抗肥胖药奥利司他[J],中国新药杂志,2001,10(6):423-425
Shaokang Qi、Jie Yuan,A New Antiobesity Drug-Orlistat [J], Chinese Journal of New Drugs, 2001, 10 (6):423-425
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