黔西南州市售水产品中副溶血性弧菌带染状况及分离株毒力因素和耐药研究

黔西南州市售水产品中副溶血性弧菌带染状况及分离株毒力因素和耐药研究

周小江 潘梅 何坤香 唐丽娅 白贵欢

黔西南州疾病预防控制中心贵州兴义562400

摘要：目的 了解黔西南州市售水产品中副溶血性弧菌的污染状况 、毒力基因分布及耐药情况。 方法 2023年采集市售水产品，分离培养副溶血性弧菌，用荧光定量PCR方法对副溶血性弧菌毒力基因(tdh、trh、tlh) 进行检测，用微量肉汤稀释法对菌株进行19种抗生素药敏试验。 结果 从200份市售水产品样品中检出副溶血性弧菌阳性82份，检出率为41.00% ; 82株菌均携带tlh基因，5株携带trh基因，均不携带tdh基因；副溶血性弧菌分离株对19种抗生素有不同程度的耐药，耐药率高达67.07% ; 多重耐药率4.88% , 最高耐受3种抗生素。结论 黔西南州地区市售水产品中副溶血性弧菌污染状况严重，副溶血性弧菌检出率较高，应重视耐药谱的变化和多重耐药菌，加强对副溶血弧菌的监测和防控 。

关键词：水产品；副溶血性弧菌；毒力基因；耐药性

副溶血性弧菌(Vp) 是一种重要的食源性致病菌，其每年引起的食物中毒占微生物病原的首位［1］。生食及食品加工过程中的交叉污染易导致感染。旨在通过本研究，了解全州市售水产品的副溶血性弧菌污染情况，为我州水产品引起的食源性疾病的流行病学调查、预警、风险评估、危险性评价提供参考依据。

基金项目：黔西南州科技局项目（2022-2-03）

作者简介：周小江 男 主管技师 研究方向为微生物检验

1材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样本来源 从黔西南州辖区内按消费习惯及随机采样原则采集水产品200份，包括鱼类样品61份、贝类51份、虾类50份、海带类15份及蟹类样品13份。样品采集后于4 h内送达实验室检测。

1.1.2培养基和试剂3%氯化钠碱性蛋白胨水、硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂(TCBS)、3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)。

1.2方法

1.2.2分离和鉴定分离和鉴定参GB/T4789.7-2008部分进行[2]。

1.2.3毒力基因检测 副溶血性弧菌分离株培养18h，采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA；采用TaqMan探针法检测耐热性溶血毒素编码基因tdh和相关溶血毒素编码基因trh，以及种属特异性的tlh基因。

1.2.4药敏试验 采用WHO推荐的K-B法，药敏试验的质控和结果判定依据美国床实验室标准化委员会(NCCLS)微生物敏感试验执行标准，以大肠杆菌ATCC 25922为质控菌株。

2 结果与分析

2.1 副溶血性弧菌污染状况

从结果可以看出，副溶血性弧菌在贝类产品中普遍存在，检出率均较高。

2.2 毒力基因检测

经菌株复苏鉴定，共获得副溶血性弧菌82株，经荧光定量 PCR扩增检测，所有菌株均携带不耐热溶血素(tlh), 致病毒力基因tdh均为检出，致病毒力基因trh检出阳性5株，占比6.1%。

2.3 药敏试验

82株副溶血性弧菌中，有55株副溶血性弧菌氨苄西林表现为耐药 , 耐药率为67.07%；对多粘菌素E表现为耐药的8株；对氨苄西林/舒巴坦表现为耐药6株；对头孢他啶/阿维巴坦表现为耐药的5株；多重耐药株4株，主要是同时对氨苄西林、多粘菌素E和头孢他啶/阿维巴坦表现为耐药;所有菌株对氯霉素、复方新诺明、厄他培南、美罗培南、头孢噻肟、头孢他啶、四环素、替加环素、环丙沙星、萘啶酸、阿奇霉素、阿米卡星和链霉素100%敏感。

3 讨论

副溶血性弧菌是一种常见的革兰阴性嗜盐菌[3], 在我国副溶血弧菌引起的食物中毒高居微生物性食物中毒的首位[4]。本研究表明，黔西南州地区市售水副溶血性弧菌检出率为41.00% ，采集的样本中阳性检出率较高，提示今后应加强对流通环节水产品的保存环境 、临时养殖条件 、交叉污染等方面的监管。

对分离的副溶血性弧菌菌株的毒力基因 tdh和trh进行了测定，探讨分离菌株的毒力情况，有trh毒力基因检出，说明黔西南州辖区市售水产品具有较高的潜在毒性，存在一定的风险，需开展持续监测。

药敏试验结果显示，分离的副溶血性弧菌大部分对氮节西林表现出较高的耐药，而对其他的抗生素敏感，对氨苄西林耐药，可能是因为这两种药物在人畜方面使用的时间较长以及用药范围较广导致周围环境菌株出现耐药性。本实验得到的菌株的耐药谱与其他报道基本一致，与周珠海等[5]调查了苏州大型超市小水产品中副溶血性弧菌对氨苄西林的耐药率为55.4%，安秀华等[6]分离的上海市售水产品中副溶血性弧菌对氨苄西林耐药率为69.52%。

综上所述，黔西南州辖区内市售水产品中副溶血性弧菌污染状况较为严重，分离菌株中还出现由携带trh毒力基因情况, 大部分副溶血性弧菌耐受氨苄西林药物，对群众健康具有潜在的危害。

参考文献：

[1]张德福，安慧，张 健，等 ．副溶血弧菌耐药及其机制的研究进展[J] . 食品工业科技，2018 , 39(9) : 311-317+324.

[2]GB/T4789.7-2008. 食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验[S].

[3]杨少丽,王印庚董树刚.海水养殖鱼类弧菌病研究进展[J]. 海洋水产研究2005,26(4):75-83.

[4]刘秀梅，陈艳，郭云昌，等.2005年中国食源性疾病暴发事件监测资料分析[J]. 中国食品卫生杂志，2008,20(6):506-509.

[5]周珠海，李义，宗长燕，等.苏州大犁超市小水产品中副溶血性 弧菌的污染调查及耐药性分析[J]. 中国动物检疫，2010,27 (12):59-60.

[6]安秀华，宁喜斌.上海市市售水产品中副溶血性弧菌的分离、鉴定及耐药性研究[J]. 中国人兽共患病学报，2009,25(7):657-659,