乙酰胆碱酯酶染色和钙视网膜蛋白免疫组化染色在先天性巨结肠患儿术前病理诊断中的价值

乙酰胆碱酯酶染色和钙视网膜蛋白免疫组化染色在先天性巨结肠患儿术前病理诊断中的价值

1李晓辉   2张华军通讯作者

1陕西省勉县医院   病理科   陕西汉中  724200

2陕西省汉中市宁强县天津医院  病理科  陕西汉中 724400

【摘要】目的研究乙酰胆碱酯酶染色（AChE）和钙视网膜蛋白免疫组化染色（Calretinin）在先天性巨结肠（HD）患儿术前病理诊断中的价值。方法 2021年1月—2023年8月，回顾性分析我院就诊的120例疑似HD患者，选择AChE和Calretinin诊断，分析病理结果。结果 120例标本采取AChE染色和免疫组化标记物Calretinin染色，HD组中AChE染色阳性38例，阴性12例，非 HD组中AChE染色阳性2例，阴性58例。HD组中 Calretinin免疫组化染色均为阴性，而在非HD组中，免疫组化标记物Calretinin染色阳性为59例，阴性结果1例。结论 先天性巨结肠患者在选择AChE和Calretinin诊断时，敏感性和特异性相对较高，能够作为疾病鉴别。

【关键词】乙酰胆碱酯酶染色；钙视网膜蛋白免疫；先天性巨结肠；术前

先天性巨结肠（HD）作为当前临床中常见的一种先天畸形疾病，这是此病出现的原因，通常和神经节细胞缺失有密不可分的关联；同时也发现患者的胆碱能神经纤维存在异常增生。从目前来看，此病在术前诊断时通常需要经过黏膜活检，比较常见的检验方式以苏木精-伊红染色为主[1]。但是从以往的临床研究来看，存在一定的误差性。而乙酰胆碱酯酶染色（AChE）从原理分析来看，属于乙酰胆碱酯酶存在无神经节细胞肠端数量增多，同时直径增粗的胆碱能神经纤维染色加深。而钙视网膜蛋白免疫组化染色（Calretinin）则会使包含神经节细胞的肠段呈现出颜色变化，因此诊断中灵敏度相对较高。本文研究中，则着重对AChE以及Calretinin在HD中的诊断价值展开进一步探索，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

2021年1月—2023年8月，回顾性分析我院就诊的120例疑似HD患者，分为HD组合非HD组，其中HD组男、女性例数之比：31:29，年龄2~103个月，平均（39.47±8.22）个月；非HD组男、女性例数之比：30:30，年龄2~102个月，平均（39.32±8.17）个月

1.2方法

AChE诊断选择符合要求的新鲜切片，然后将组织标本进行冷冻保存，并通过显微镜观察，以此来确定切片的厚度。其中包括两个HE染色面，7个AChE染色面，然后将含有7个AChE染色面的组织放入哥伦比亚罐，与铁氰化钾水溶液混合液相融合，进行孵育，最后加入苏木精-伊红，然后脱水分片。鼻腔黏膜用福尔马林固定，进行Calretinin免疫组化染色，其中发现乙酰胆碱酯酶阳性呈现出棕色，并且大于等于10条/100倍视野，则可以将其认定为阳性，或者发现黏膜固有层腺体间无增生胆碱能，纤维小于三条或未着色，这可以排除HD，如果在3~10条则确定为可疑病例。

本次 Calretinin免疫组织化学染色应用全自动染色机进行染色处理，然后进行分片，如果发现固有层以及黏膜基层等组织可见神经纤维，则可以认为Calretinin免疫组化染色呈现出阳性。

1.3观察指标

观察AChE和Calretinin诊断结果。

2结果

120例标本采取AChE染色和免疫组化标记物Calretinin染色，HD组中AChE染色阳性38例，阴性12例，非 HD组中AChE染色阳性2例，阴性58例。HD组中 Calretinin免疫组化染色均为阴性，而在非HD组中，免疫组化标记物Calretinin染色阳性为59例，阴性结果1例。

3讨论

HD在目前中作为结肠远端黏膜以及肌间神经丛中的神经节细胞缺损特征，也是一种极其常见的先天基因病变疾病，在临床中对于疑似HD症状的患儿，往往通过影像学检查后可以诊断为HD，并在此类患儿中需要进一步展开活检，手术前则需要明确病变类型[2]。但是从以往大量的临床研究来看，结肠活检在 HD手术术前检测时准确度不足，因此很难为患儿手术提供最为准确的参考依据，因此对于部分可疑患者则需要进一步展开后续检验。目前术前活检He染色方式虽然极其简便，不过考虑到神经节细胞十分容易与巨噬以及施旺细胞混淆，而AChE染色以及免疫组化Calretinin染色联合检测时，则能够有效减少不利因素，进一步提升整体的诊断准确性。

AChE染色在目前临床中属于极其常见的一种染色方法，它的原理在于碘化乙酰胆碱以及和HD患者增生的胆碱能神经特异性相结合，因此临床医师可以通过了解胆碱能神经的多少以及分布方式来确定是否为HD患儿。从本文研究中可以进一步发现，120例标本采取AChE染色和免疫组化标记物Calretinin染色，HD组中AChE染色阳性38例，阴性12例，非 HD组中AChE染色阳性2例，阴性58例。HD组中 Calretinin免疫组化染色均为阴性，而在非HD组中，免疫组化标记物Calretinin染色阳性为59例，阴性结果1例。由此也可以进一步发现，选择AChE染色是在HD的诊断中，其特异性以及灵敏度保持的较高范围。在以往大量的学者研究中也进一步发现，AChE染色在HD诊断中其灵敏度以及特异度相对较高，这和本文研究基本原则

[3]。而Calretinin免疫组化染色同样对于HD患儿的术前诊断也有着极高的参考价值，它作为一种极其重要的辅助形式，唯一的缺点在于检测耗时相对较长，通常需要经过一天一夜[4]。此外，Calretinin免疫组化染色对于未成熟的神经细胞中检测呈现出阳性，因此显色也十分清晰，易于判读，并且取材的要求相对较低，能够有效避免重复活检的出现，所以通过它和AChE染色联合利用时，能够相互弥补对方的不足，并进一步提升整体的准确性，这个临床中极其重要。

参考文献

[1]虞梅,葛郁荣,石静,等. 超声助显剂灌肠与X线钡灌肠在先天性巨结肠诊断中的应用价值[J]. 临床小儿外科杂志,2021,20(3):236-240.

[2]黄圆媛,任红霞. 先天性巨结肠诊断方法和细胞治疗的研究进展[J]. 发育医学电子杂志,2022,10(5):392-396.

[3]王维,张舒祺,韩光宇,等. 成人先天性巨结肠的机制研究及诊断和治疗[J]. 中国医刊,2023,58(4):356-358.

[4]王巧鸽,张红丽,赵平. 新生儿先天性巨结肠症临床病理特征及CR联合AchE诊断价值分析[J]. 现代消化及介入诊疗,2022,27(5):613-616.