Expression, Purification and Characterization of C-FADD

(整期优先)网络出版时间:2009-04-14
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FADD是在死亡的一个重要proapoptotic适配器导致受体的apoptosis。最近,FADD被发现了参予许多non-apoptotic过程,例如开发,房间周期前进和幸存。它的non-apoptotic活动被在C终端区域定位的丝氨酸残余的phosphorylated地位调整,从proapoptotic函数不同的域联系了DED和DD域。由于在自然FADD的表示和结晶化的困难,然而,迄今为止,所有FADD变体的分子的结构没包含C终端区域。阐明C终端区域的结构功能关系,我们需要获得FADD变体那个包含的C终端区域。在这研究,包含DD领域的鼠标FADD(80-205)和C终端区域,指定了为C-FADD,在E被表示。有在N终点的他的标签的coli并且由Ni2+亲密关系层析净化了。净化的蛋白质在glutaraldehydecross-linking分析作为同质的单体存在并且在CD(圆形的二色性)展出了一个典型螺旋系列试金。在vitro他的标签,下拉试金证明净化的C-FADD拥有了CK为它的non-apoptotic功能重要的我有约束力的活动。