苏木素的使用方法

苏木素的使用方法

赵国华

北京市仁和医院  北京市  大兴区   102600

[摘要]研究苏木素在组织HE染色中起到了至关重要的作用,在常规HE染色中,

苏木素的染色是染细胞核的关键步骤,苏木素染色的好坏直接关系到一张切片的质量,进而直接影响诊断结果。一张优质的切片,细胞核染成蓝色,细胞浆、红细胞、结缔组织等被染成红色,与染色的细胞核形成鲜明的对比,红蓝搭配适合,这才是一张优质切

片。

关键词:苏木素,染色,方法

要制作一张优质切片,就要把苏木素染色放在首位,一般临床苏木素的配法有多

种,临床常用的是Harris苏木素液,Harris苏木素染液在以前很常见,但Harris苏木素染有它的优缺点,这种苏木素是比较好使用的,配制方法也不复杂,一次可以配制的量很大,很利于临床的使用。一般配制完成后可以立即使用,染色的时间也用时很短,

一般只需要3-5分钟,染色又很好看,细胞核的颜色清晰,但在配制时需要加热现在各个病理科都有危化品的使用,包括无水乙醇,二甲笨等,不能有明火的存在,这一步还要 在加热的同时加入氧化汞,在加入氧化汞时很容易喷溅,存在一定的危险性,同时氧化

汞属于危化品,审批和保存极其严格。现在临床上使用这种苏木素越来越少了,这种苏木素放置一段时间后会形成很厚的氧化膜,在进行苏木素染色时会污染切片,由于这些缺点,传统的苏木素配制遭到了弃用。因为苏木素在各个实验室的用量都很大,不用氧

化汞配制出来的苏木素都不太着色,染色时间会很长,使用时间很短,一般不太好使

用。鉴于这种情况,我们一般购买现成配制好的苏木素。

1.材料

1.1市场购买的苏木素500ml,在刚购买来的苏木素一般都是没有经过氧化的很好 的苏木素,这时基本没有着色能力,这时的苏木素还不能使用,这种苏木素一般都在在公司现配的,进货时要多进几瓶氧化着,以备随时使用。

1.2 1%盐酸酒精分化液配制:75%的酒精500ml,加入5ml盐酸配成分化液这种分化液的浓度随着染色的时间和切片的多少而改变。

1.3染色步骤;新鲜标本中性福尔马林固定取材脱水包埋,这是前期的准备工作,切片时我们把切片切3-4微米,经过两次展片,使切片平整无褶皱,切片在80℃的烤箱中烤20分钟,放入二甲苯1(5分钟),二甲苯2(5分钟),依次从梯度酒精清洗

干净取出放入自来水中,然后放入苏木素中染色5-10分钟,流水冲洗2分钟分化,氨

水反蓝,经梯度酒精二甲苯中性树胶封片。 2.操作方法:

苏木素是一种天然染料,是苏木素的分子氧化后成为生物染料,在常规HE染色中

苏木素经过氧化变成酸性染料苏木红,苏木红与二价或三价的金属盐或氢氧化物结合形成带正电荷的蓝色色精只有这样才能与细胞中带负电荷的脱氧核酸结合完成染色。一般我们在使用这种苏木素以前,把苏木素倒出放八染色缸中进行水溶加热3小时,一般水浴的温度在40G50℃我们使用的是捞片机中水箱中的水进行水浴,个人不建议用

烤箱进行加热,这样用烤箱加热的苏木素出现加热不均匀状态,一张切片上出现蓝色有深有浅影响诊断。加热的时间不能太长,时间过久容易出现过氧化,使用的时间很短,就要重新更换苏木素所以每次水浴加热苏木素直接加热两缸,标注上大、小两缸(其中小是染色小组织标本,大是染色大块的组织标本)一般依次从小到大,这样分开染色的

好处很多,染色的切片优质率更高我做了一个实验,第一组把所有的组织60例(其中

30例小标本,30例大标本)分成两组,其中小标本30张,大标本30张单独染色,第二组不分混合进行染色,其中第一组切片的优质率达到96%,而第二组只达到了92%明

显的感觉到分开染色好处很多。许多人会觉得很麻烦,这要一开始就做好工作,把所有的小标本放在一起进行包埋,切片收片时就很有规律了。分开的好处是分化时容易掌握,因为大小标本染色和分化的时间不太相同,自动染色机上更应该分开进行。一般没有自动染色机时,可以分开染色,从小到大到细胞染色,依次循环利用这样做可以大大节省苏木素的用量,小标本染色不好的大标本可以接着使用依旧染色很好,再染细胞标

本时同样效果也很好。所以一缸苏木素可以循环利用。同时染完大小标本分化的时间也

是不同的,一般小组织染色时间长,分化时间短,而大标本染色时间短分化时间长。总之,要根据分化液的浓度减少或增加分化时间,苏木素染色不合格也有很多其他的原因。比如切片的厚度,切面过薄不容易上色,切面过厚染色又很深,分化时分化不好。有时在取材时本身标本没有及时固定,标本本身发生自溶变性,导致细胞核模糊一片,

也会有一些特殊标本比如淋巴结,肠癌肿瘤的部分,染色容易发灰或呈现灰蓝色,一般

这样的组织本身结构较为致密,结构比较复杂,这样的组织染色时单独进行分化,这样

的组织一般分化的时间比较长一点,直到分化干净,氨水反蓝后呈现亮蓝色,这样才能

染色成功。

3.讨论:

在进行病理标本染色中分出大小标本是相当必要的。固定大小标本染色的时间,掌握切片的分化程度,这是制作优质切片的前提条件。有时小标本尤其是肠镜标本,极其容易挂粘液团,在显微镜下很难和肿瘤相鉴别,这时特别容易误诊。这时我们要排除是

否为苏木素染色情况的干扰,要把片子重新进行染色分化,要把有争议的片子分化干

净,直到呈现亮蓝色,分组染色能够提高染色的优质率。在HE染色中苏木素染色是关键的一步,所以要总结日常染色经验,提到优质切片率。

参考文献:

1. 王德田,董建强实用现代病理学技术
2. 黄柳明一种规范化的苏木素染色方法,中国当代医药2009年8月16卷第16

期