盐酸左氧氟沙星注射液细菌内毒素检查法适用性试验研究

盐酸左氧氟沙星注射液细菌内毒素检查法适用性试验研究

宋倩，陈欢，吴萍

扬子江药业集团江苏紫龙药业有限公司质检中心，常州213000

摘要  目的：建立盐酸左氧氟沙星注射液(10ml:0.3g)细菌内毒素检查方法。方法：按照《中国药典》2020年版四部“通则1143细菌内毒素检查法”的要求进行验证[1]。结果：验证试验中：(1)当供试品溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，且0.5λ≤Es≤2λ时，试验有效；(2)当0.5Es≤Et≤2Es时，供试品在该浓度下无干扰，即试验成功，本方法可用于指导日常检测。

关键词：盐酸左氧氟沙星注射液(10ml:0.3g)；细菌内毒素检查法；鲎试剂

盐酸左氧氟沙星注射液(10ml:0.3g)主要用于敏感细菌引起的中、重度感染，包括呼吸系统感染[2]、泌尿系统感染、生殖系统感染、皮肤软组织感染、肠道感染等。

1.方法开发背景

根据2020版《中国药典》1143细菌内毒素检查法，盐酸左氧氟沙星注射液（10ml：0.3g)的限值L为每1mg左氧氟沙星中含内毒素量应小于0.6EU。

2.材料

2.1.设备

GCS型干热灭菌柜（山东新华医疗器械有限公司）；ET-96型内毒素凝胶法测定仪（天津市天大天发科技有限公司）；ZH-2型自动漩涡混合器（天津药典标准仪器厂）。

2.2.试剂

3.干扰初筛试验

3.1干扰预实验确定最大有效稀释倍数

供试品为盐酸左氧氟沙星注射液（10ml：0.3g)，已知每1mg左氧氟沙星中含内毒素量应小于0.6EU。因常用鲎试剂最小灵敏度为0.03125EU/ml，根据MVD=cL/λ可得常用最大有效稀释倍数：

C L    300mg/10ml*0.6EU/mg

最大有效稀释倍数MVD = ——— = ————————— =576倍

λ        0.03125EU/ml

3.2用BET水将供试品分别稀释18倍、36倍、72倍、144倍、288倍、576倍系列浓度溶液，取试验用鲎试剂分别与上述系列供试品稀释溶液和含2λ浓度内毒素标准品的该浓度供试品稀释溶液反应，每一浓度平行做2管，同时做2支阴性对照和2支阳性对照。由供试品干扰预试验可得出最小不干扰稀释倍数为N倍，为保证试验精密性，我们采取2N倍稀释（小于MVD）进行干扰试验[3]。

批号：鲎试剂（1）批号：23121612

批号：鲎试剂（2）批号：2211233

4.正式干扰试验

4.1各反应溶液的制备

①溶液A的制备

取盐酸左氧氟沙星注射液样品1支，初始浓度为30mg/ml，作为供试品原液（S原），再用BET水逐步稀释至所需倍数。

0.5ml         0.5ml        2.0ml

    S原S6······S36S72…SN…S2N

  2.5ml W        2.5ml W     2.0ml W

②溶液C的制备：

使用时加入细菌内毒素检查用水1ml，复溶后置漩涡混合器上混匀15min，制成：

E4λ、E2λ、Eλ、E0.5λ、E0.25λ。

90EU/ml     9EU/ml       1EU/ml      0.5EU/ml     0.25EU/ml     0.125EU/ml

           0.0625 EU/ml          0.03EU/ml

③溶液B的制备：

5.记录实验结果

鲎试剂（1）：湛江安度斯生物有限公司

鲎试剂（2）：福州新北生化工业有限公司

6.讨论

6.1细菌内毒素试验的方法有：凝胶法、浊度法、显色底物法、免疫法等，其中最经典的方法即是凝胶法，目前各国药典收载的细菌内毒素试验法均包含凝胶法。

6.2通过对盐酸左氧氟沙星注射液细菌内毒素方法的验证，结果表明在处方配制、生产工艺及检测环境不变的情况下，可采用常规法进行该产品的细菌内毒素检查。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:四部细菌内毒素检查法，2020。

[2]胡晓玲,牛亚珍,杨柳,崔亚登,李笑迪,张琳.盐酸左氧氟沙星注射液不良反应及影响因素分析[J].中国药物与临床,2021,21(20):3468-3470.

[3]王琪,周建华.瓜蒌皮注射液中细菌内毒素检查法的建立[J].上海医药,2022,43(21):77-80.