慢性乙型肝炎患者HBV pgRNA检测的临床价值

慢性乙型肝炎患者HBV pgRNA检测的临床价值

闵明

（成都市青白江区人民医院检验科，四川 成都610300）

[摘 要]  目的 分析比较乙型肝炎病毒前基因组RNA（HBV pgRNA）与传统的HBV血清学指标之间的相关性和差异性，探讨HBV pgRNA临床应用价值。方法 选取40例未进行抗病毒治疗慢性乙型肝炎（CHB）患者作为研究对象。分析患者HBV pgRNA与血清学相关指标的相关性。根据患者HBeAg和HBV DNA状态分组，比较各组患者HBV pgRNA、血清学相关指标的差异。分析患者HBV pgRNA、HBeAg和HBV DNA的检出率。结果 HBV pgRNA 与ALT、ALP 、GGT、TBA、AFP 、HBV DNA 呈正相关。HBeAg阳性组HBV pgRNA 水平显著高于HBeAg阴性组（P = 0.001）。HBV DNA阳性组的HBV pgRNA水平显著高于HBV DNA阴性组 （P = 0.006）。在40例CHB患者中，HBV pgRNA阳性率为100%，HBeAg的阳性率为45%，HBV DNA的阳性率为80%。结论 HBV pgRNA能灵敏地反映病毒复制情况和病毒引起的肝脏损伤，在决定患者是否需启动抗病毒方面具有临床应用价值。

[关键词]  HBV pgRNA；HBeAg；HBV DNA，慢性乙型肝炎，临床价值

中图法分类号：R446.11

文献标识码：A

Clinical application value of HBV pgRNA detection in patients with chronic hepatitis B

MIN Ming

（1. Department of Clinical Laboratory，People’s Hospital of Qingbaijiang District of Chengdu，Chengdu Sichuan 610300，China）

 基金项目：四川省成都市卫健委项目（2021170）。

 通讯作者，E-mail: cdmmmy@126.com。

[Abstract] Objective Difference analysis and correlation analysis were performed on HBV pgRNA and serological markers of HBV to explore the clinical application value of HBV pgRNA. Methods Treatment-naïve CHB patients (40) were enrolled in this study. Correlations between HBV pgRNA and serological markers of HBV infection were analyzed. The differences of HBV pgRNA and serological markers of HBV infection in different groups based on their HBeAg and HBV DNA status were also analyzed. Additionally，we analyzed the detection rates of HBV pgRNA，HBeAg and HBV DNA. ResultsHBV pgRNA was positively correlated with ALT、ALP、GGT、TBA、AFP and HBV DNA. The levels of HBV pgRNA in HBeAg-positive group were significantly higher than those in HBeAg-negative group (P=0 .001). The levels of HBV pgRNA in HBV DNA-positive group were significantly higher than those in the HBV DNA-negative group (P=0 .006). HBV pgRNA，HBeAg and HBV DNA were detected in 100%，45%，80% in CHB patients，respectively.ConclusionHBV pgRNA can more sensitively reflect the replication of virus and virus-induced liver injury, and has clinical application value in determining antiviral therapy.

[Keywords]  HBV pgRNA；HBeAg；HBV DNA；Chronic hepatitis B；clinical application value

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）是一种主要通过血液传播、母婴传播和性传播，引起慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）的嗜肝性病毒。HBV诱导产生的免疫耐受是慢性乙型肝炎的主要原因。这种慢性感染可持续多年引起肝纤维化，最终导致肝硬化、肝癌[1]。HBV病毒通过与肝细胞膜上钠离子－牛磺胆酸－协同转运蛋白结合侵入肝细胞中。进入肝细胞的HBV脱掉核衣壳，以部分双链环状DNA负链为模板形成共价闭合环状DNA（Covalently closed circular DNA，cccDNA）。以cccDNA为模板，可以转录生成3.5kb大小的前基因组RNA（Pregenome RNA， pgRNA）。HBV pgRNA是乙肝病毒复制的主要中间体，在核衣壳中经逆转录生成松弛环状的双链DNA（Relaxed circular DNA，rcDNA），再组装成为乙肝病毒粒子[2,3]。cccDNA难以从体内清除，是持续感染的原因。cccDNA的检测只能采取肝脏活检这种有创性检查，在临床难以开展[4]。目前HBV DNA检测被广泛应用于临床，用于监测乙肝病毒的复制，评价抗病毒药物疗效以及指导治疗后安全停药。但HBV DNA由pgRNA逆转录而来，并不能反映cccDNA的真实水平。除此之外，CHB患者在使用核苷类似物（Nucleostide analogues，NAs）治疗后，可以抑制HBV pgRNA向rcDNA的逆转录，但并不直接针对cccDNA储存库。因此，即使在HBV DNA数月或数年都无法检测到的情况下，一旦停止治疗，病毒就会反弹[5,6]。基于以上原因，临床急需新的HBV生物标志物来监测患者体内病毒复制情况。新近研究显示HBV pgRNA存在于HBV感染者的外周血中，能反映cccDNA的转录活性[7,8]。因此我们分析、比较HBV pgRNA与传统的HBV血清学指标之间的相关性和差异性，探讨HBV pgRNA的临床应用价值。

1 对象与方法

1.1 对象 根据《慢性乙肝病毒肝炎防治指南（2022年版）》中慢性乙肝的诊断标准，选取2022年1月~2023年9月期间就诊于成都市青白江区人民医院，未进行抗病毒治疗CHB患者为研究对象。本研究经本院伦理委员会审批通过。

1.2实验方法用迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪检测谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-glutamyl transpeptidase，GGT）、总胆汁酸（Total bile acid，TBA）。用迈瑞CL-6000i全自动荧光定量检测仪检测甲胎蛋白（Alpha fetoprotein，AFP）和乙肝两对半。 用广州海力特HBV pgRNA检测试剂和广州达安HBV DNA检测试剂在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行HBV pgRNA和HBV DNA检测。HBV pgRNA的检测下限为100 copies/mL，HBV DNA的检测下限为100 IU/mL。

1.3  统计学处理采用SPSS23.0统计学软件进行分析。将HBV pgRNA和HBV DNA数据进行常用对数（lg）转换后再进行统计分析。HBV DNA低于检出下限的数据，按最低检测限计算。两变量间的相关性分析采用Spearman相关分析。呈非正态分布的计量资料以中位数和四分位数（P25～P75）表示，2个组之间比较采用Mann-Whitney U检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1 一般资料和HBV pgRNA与血清学指标的相关性本研究共纳入40例慢性乙型肝炎患者，其中男性21例，女性19例，平均年龄为40.70 ± 12.56岁（表1）。将患者HBV pgRNA与血清学指标进行Spearman 相关性分析，发现HBV pgRNA 与ALT（r = 0.500，P =0.01）、ALP（r = 0.344，P = 0.035）、GGT（r = 0.406，P = 0.009）、TBA（r = 0.359，P = 0.023）、AFP（r = 0.498，P = 0.01）、HBV DNA（r = 0.641，P < 0.001）呈正相关（图1）。

表1  患者一般资料

图1HBV pgRNA与ALT、ALP、GGT、TBA、AFP、HBV DNA的相关性

2.2 HBeAg阳性组和HBeAg阴性组血清学指标比较根据CHB患者HBeAg状态分为HBeAg阴性组和HBeAg阳性组。HBeAg阳性组有18例患者，年龄中位数为32.5岁；HBeAg阴性组有21例患者，年龄中位数为48.5岁。HBeAg阳性组患者比HBeAg阴性组患者年轻，差异具有统计学意义（P < 0.001）。HBeAg阳性组HBV pgRNA 水平显著高于HBeAg阴性组（P = 0.001）。HBeAg阳性组HBV DNA 水平高于HBeAg阴性组，但无统计学差异（表2）。

表2  HBeAg阳性组和HBeAg阴性组患者临床资料

2.3 HBV DNA阳性组和HBV DNA阴性组血清学指标比较 将HBV DNA》2 log10 IU/mL的患者归为HBV DNA阳性组，HBV DNA< 2 log10 IU/mL的患者归为HBV DNA阴性组。结果如表3所示，HBV DNA阳性组的HBV pgRNA水平显著高于HBV DNA阴性组（P = 0.006）。

表3  HBV DNA阳性组和HBV DNA阴性组患者临床资料

2.4 慢性乙型肝炎患者HBV pgRNA、HBeAg和HBV DNA的阳性率 HBV pgRNA》100 copies/mL，HBV DNA》100 IU/mL即为阳性。结果如表4所示，HBV pgRNA阳性率为100%，HBeAg的阳性率为45%，HBV DNA的阳性率为80%。

表4  HBV pgRNA、 HBeAg和HBV DNA的阳性率

3讨论

自1992年实行新生儿乙肝疫苗接种起，我国在阻断乙肝母婴传播方面取得了巨大进展[9,10]。但由于中国患病人数庞大，要在2030年达到世界卫生组织要求将病毒性肝炎的发病率降低90%、治疗率达到80%、死亡率降低65%，仍然是一个巨大的挑战。

HBV是嗜肝性病毒，不会直接破坏肝细胞，而是通过刺激机体产生免疫反应。免疫细胞及其分泌的细胞因子引起炎症、肝细胞坏死和纤维增生[9,10]。ALT、ALP、GGT 、TBA可在一定程度上反应肝脏损伤。在此次研究中，我们发现HBV pgRNA与ALT、ALP、GGT 、TBA均呈正相关。说明HBV pgRNA能反应肝脏功能受损情况。如果CHB患者未得到及时有效的治疗，持续炎症反应会发展为肝硬化、肝癌

[11]。既往研究表明HBV DNA高水平和AFP增高均为HCC发生的危险因素[12,13]。AFP在抑制肝癌细胞的自噬和凋亡，促进增殖、迁移、侵袭以及降低化疗药物敏感性中起关键作用[14-16]。本研究发现HBV pgRNA与HBV DNA和AFP呈正相关。说明HBV pgRNA高水平与肝脏损伤和肝癌发生密切相关。

HBV DNA和HBeAg被视为HBV复制和传染性的指标物。在此次研究中，我们发现HBeAg阳性组HBV pgRNA 水平显著高于HBeAg阴性组 （P = 0.001）；HBV DNA阳性组的HBV pgRNA水平显著高于HBV DNA阴性组（P = 0.006）。说明HBV pgRNA能较好地反应患者体内HBV载量水平。40例CHB患者HBV pgRNA阳性率为100%，而HBeAg和HBV DNA的阳性率分别为45%和80%。在HBeAg 阴性或者HBV DNA低于检测限情况下HBV pgRNA依然能检测到，说明HBV pgRNA在评估病毒复制方面比HBeAg、HBV DNA 更灵敏。HBeAg 阴性或者HBV DNA低于检测限只能表示病毒复制减弱，肝内cccDNA 仍存在低水平的转录。检测HBV pgRNA能更早地发现病毒复制情况。

目前国内外指南均将ALT>正常值上限和HBV DNA阳性作为是否启动抗病毒治疗的评判指标。但近来有研究显示ALT正常的慢性HBV感染患者肝脏仍存在不同比例肝脏炎症[17,18]。因此，ALT阈值设定问题仍存在争议[19,20]。由于HBV pgRNA不仅能反映病毒引起的肝脏损伤情况，在反映cccDNA的转录活性上又优于HBV DNA，将HBV pgRNA纳入评估CHB患者是否启动抗病毒治疗的评判指标，将有利于指导患者得到及时的治疗，延缓肝脏疾病进程，延长患者生存时间。本研究存在样本量较少的不足，仍需进行大样本研究，为HBV pgRNA的临床应用提供科学准确的依据。

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