高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊中有关物质的研究

高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊中有关物质的研究

陈瑞超 范福月 宋天宇

山东鲁抗医药股份有限公司 山东 济宁 272000

摘要：阿莫西林作为一种β-内酰胺类抗生素，在治疗由革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌引起的各种感染，如呼吸道、泌尿系统疾病中有着广泛的应用。考虑到阿莫西林产品中存在多种杂质，有效控制这些杂质对减少医疗使用中的不良反应至关重要。本文主要分析了高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊中有关物质的过程。

关键词：阿莫西林胶囊；高效液相色谱法；有关物质测定

    高效液相色谱法是较为常见的一种检测方法，具有灵敏度高、准确性及重复性好的优点，在阿莫西林胶囊的有关物质测定中有着良好的应用效果。对此，应当加强对此项检测方法的分析，以更好地测定药物中杂质，保障药物投入医疗使用的安全性。

一、试剂及药品准备

阿莫西林的含量为86.9%。杂质D的纯度为73.0%，而杂质J的纯度为8.0%，两者均按照USP药典的标准品质。来自加拿大MC公司的杂质C、H和I，每种的纯度都超过90.0%。杂质G的纯度为74.3%，而杂质A、B、E、F的纯度均保持在90.0%以上。阿莫西林胶囊的规格为0.25克。制备胶囊所用的辅料包括硬脂酸镁、甲醇，其中甲醇为色谱纯。此外，使用磷酸二氢钾为分析纯级别，所用水为超纯水。

二、方法与结果

1、色谱条件

色谱分析具体条件如下：使用的色谱柱是美国Thermo公司的Hypersil C18柱，尺寸为4.6毫米×100毫米，颗粒大小为5微米。流动相A由含2.72克/升的磷酸二氢钾溶液组成，pH值设定为5.0，而流动相B为乙腈。在色谱分析中，采用的检测波长为210纳米，流速设置为1.5毫升/分钟，柱温维持在40摄氏度，每次进样量为10微升。关于梯度洗脱，初步0至10分钟保持97%的A相；10至30分钟，A相从97%逐渐减少至80%；30至34分钟，A相从80%回升至97%；最后在34至44分钟，A相稳定在97%。

2、制备溶液

2.2.1 空白辅料溶液的制备

将所需量的硬脂酸镁准确称量后，转移至量瓶中，并使用流动相A作为空白溶剂进行定容。之后通过过滤并收集滤液以备后用。

2.2.2 杂质标准溶液的配制

精确取量的阿莫西林和相关杂质标准品，置于同一量瓶中，并用相同的流动相A溶剂稀释至每毫升含有12.5微克的混合标准溶液，此溶液用于系统适用性测试。

2.2.3 试样溶液的制备

从产品中取出适量的样品，精确称重，并使用流动相A稀释至标线，使最终溶液中阿莫西林的浓度约为每毫升1.25毫克。制得的溶液需过滤，并取滤后溶液以用于后续分析。

2.2.4 阿莫西林标准溶液的制备

准确称取阿莫西林对照品，放入量瓶中并使用流动相A稀释至每毫升12.5微克的浓度，以便进行对照分析。

3、优化分析条件

从“2.2”部分得到的杂质对照品混合溶液中准确吸取10微升样品，注射到液相色谱仪中。针对“USP 41”所述的阿莫西林原料药相关物质的分析方法，包括梯度洗脱（0至10分钟，97% A；10至22分钟，97%至75% A；22至26分钟，75%至97% A），进行改进。调整后的程序显著提高杂质F与杂质C的分离度，从原来的0.79提升到1.57，优化了分离效果。

4、回收试验

进行阿莫西林样品的回收率试验，选取批号为171101的9份样品，每份重约12.5 mg。样品分别置于10 mL容量瓶中，向其中加入4 mL、5 mL、6 mL的25 μg·mL^-1杂质混合储备液，对应于80%、100%、120%的加标水平。每种加标水平的回收率溶液均配制三份。接着将供试品溶液、杂质对照品混合溶液和加标回收率溶液注入液相色谱仪进行分析。通过外标法计算的回收率结果显示，各浓度水平下的杂质回收率介于90%至108%之间，相对标准偏差（RSD）均低于10%，表明该方法在测定阿莫西林相关物质的准确性上表现优异。

5、样品检测

对三批次的阿莫西林胶囊进行检测，包括一家公司生产的0天产品和葛兰素史克公司的同类产品。分析根据“2.1”节所述的色谱条件进行，通过校正因子法和外标法的杂质对照品方法进行计算，发现两种计算方法中杂质含量的差异都在±0.03%之内。表明校正因子法结果是可靠的，适用于阿莫西林胶囊中相关物质的准确测定。结果见表1

表1 阿莫西林胶囊中有关物质的检测结果 (%)

7、加速试验

环境条件设定在温度（40±2）°C和相对湿度（75±5）%。经过六个月的加速条件下，批号231101至231103的样品中，杂质E1和E2的含量均上升至大约0.5%。同时，批号2383的样品中，杂质E1和E2的含量分别达到1.58%和1.65%。相较于初始的0天检测结果，其他杂质的含量未显示显著变化。

三、结论

本研究通过改进阿莫西林原料药中有关物质的检测方法，成功开发针对阿莫西林胶囊中特定杂质的分析技术。研究显示，该方法具有高专一性、灵敏度、耐用性及优秀的重复性、精密度。通过使用校正因子的阿莫西林对照品法，能够准确测定胶囊中的特定杂质含量。研究中发现，杂质A主要源自阿莫西林原料药合成过程中的起始物料残留。专属性和稳定性测试指出，在强制降解试验中杂质D的增加最为显著，而在加速试验中杂质E的增加最快；初期杂质J的含量在0.26%至0.38%之间，后续未见明显变化；杂质B、F、G、H在检测和稳定性试验中均未检出；杂质I为对羟基苯甘氨酸，在化学合成原料中含量较高，但在测试中未见其含量增加。因此，建议在原料合成过程中控制杂质A和杂质I的含量，同时对杂质D、E、J给予重点监控，并将其纳入胶囊的质量标准中。

参考文献

[1]王小明, 蒋婷奇, 谭跃浪, 方蕾. 阿莫西林胶囊有关物质测定方法研究[J]. 化工生产与技术, 2021, 27 (05): 42-46+10.

[2]沈川, 程义, 曾令高, 姜学美, 沈丹丹. 阿莫西林胶囊溶出度测定方法研究[J]. 中国药业, 2021, 30 (05): 59-62.

[3]王娜, 李园园, 周东东, 闫乐乐. 高效液相色谱法测定阿莫西林胶囊中的有关物质[J]. 中南药学, 2020, 18 (06): 1013-1016.

[4]王玮, 邓淑渊, 李翠芬, 邢盛, 王健松. 阿莫西林胶囊有关物质的HPLC法测定[J]. 中国医药工业杂志, 2019, 50 (12): 1492-1497.