无醛固定液在法医病理学中的应用分析

无醛固定液在法医病理学中的应用分析

赵晓辉

陕西欣安司法鉴定中心  法医病理  陕西西安  710048

【摘要】目的 观察无醛固定液在法医病理学中的使用价值。方法随机对本院病人器官组织进行取材，采用无醛固定液实行固定，遵循步骤实施脱水、包埋、切片等操作，最后由专业人员展开镜下观察，观察细胞形态、组织切片完整性等情况。结果常规HE染色效果很好，细胞形态完整，核浆对比清晰。乳腺癌病例(ER、PR、HER2)、结肠癌病例(CK18、CDX2、LCA)和淋巴瘤病例(CD20、CD79a、bcl-2)展开免疫组化染色。染色结果发现无醛固定液固定的标本组织细胞抗原性保存好，阳性结果定位精准。乳腺癌病例均行FISH检测HER2基因扩增状态，检测结果显示细胞核结构完整，红色和绿色荧光信号较好。结论 利用无醛固定液对组织形态学的保存效果良好，能取得良好的组织形态学结构，且阳性结果定位精准。                                                                                            

【关键词】无醛固定液；法医；病理学

组织病理学检验是明确疾病的金标准，比如存在囊肿，宫颈病变，需取组织做组织病理学检查明确是良性或恶性等，妇科疾病常见于宫颈癌，子宫内膜息肉，子宫肌瘤等，如果手术治疗后一般均需取组织展开进一步检查。该检验技术在法医病理学中应用有助于分析损伤和原发性疾病之间的关系，还能对死亡原因提供形态学依据[1]。法医组织病理学检验中的器官的保存，需使用大量甲醛溶液，虽其组织渗透力强，但其同时还存在着腐蚀性，在操作时防护有一定的难度。无醛固定液不仅细胞组织穿透能力强，还可发挥保护细胞核内DNA不受破坏的作用[2-3]。该文主要探索无醛固定液在法医病理学中的使用价值，现报道如下：

1 资料与方法

1.1一般资料

随机取材器官组织，采用无醛固定液实施固定，依次实行脱水、包埋、切片等步骤，最后由专业人员进行镜下观察，观察细胞形态、组织切片完整性等情况，做好相关记录。

1.2方法

新鲜标本 5 例，包括乳腺癌 3 例，结肠癌 1 例，淋巴瘤 1例。分别取肿瘤和瘤旁正常组织，切成2 cm×1 cm×0.2 cm大小的组织块，装到包埋盒里，注入无醛固定液固定12小时，常规脱水、包埋、切片。全自动染色机实施HE染色，全自动免疫组化染色仪实施相应标本的免疫组化染色。其中 3 例乳腺癌病例通过 Vysis HER2 检测试剂盒做原位杂交。

1.3统计学处理

采用SPSS 23.0软件分析及处理数据，计数资料以百分比表示，采用х2检验；计量资料以（±s）表示，采用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

通过无醛固定液固定的5例标本，在切片中感觉组织块软硬适中，切片厚薄均匀，连续性好。常规HE染色效果理想，细胞形态完整，核浆对比清晰。乳腺癌病例(ER、PR、HER2)、结肠癌病例(CK18、CDX2、LCA)和淋巴瘤病例(CD20、CD79a、bcl-2)实施免疫组化染色。染色结果显示无醛固定液固定的标本组织细胞抗原性保存好，阳性结果定位准确。乳腺癌病例均行FISH检测HER2基因扩增状态，检测结果显示细胞核结构完整，红色及绿色荧光信号较好。

3讨论

随着分子生物学技术的不断发展，分子病理学检测已成为病理诊断的辅助手段，广泛运用于临床实践。尤其是近几年随着靶向治疗的发展需对肿瘤基因分型，分子生物学技术中要求使用甲醛固定、石蜡包埋的组织块作为检测的主要对象。但甲醛固定组织会导致基因组DNA断裂。

无醛混合固定液可规避以上缺点，其成分未完全对外公布，但按照常用化学试剂在形态保存效果方面的分析，其中涉及的配比成分和作用有[4]：（1）乙酸：具有较好的渗透性。乙醇可沉淀糖原，但会使组织收缩，而配以冰醋酸后，因醋酸可促使组织膨胀，从而抵消乙醇对组织的收缩，因而可当作固定剂的补充成分。（2）乙醇：可以通过破坏疏水键，打乱水分子与蛋白质之间的三级结构，从而让蛋白质分子变性，因而具有沉淀蛋白质的作用。该研究结果发现，无醛固定液与常规 4% 中性甲醛固定液在 HE 染色、免疫组化染色、等病理科日常工作中，效果相同，所以可替代甲醛成为病理科常规固定液。无醛混合固定液在实验操作中的价值不言而喻，但针对其应用，主要解决3个问题[5-6]：（1）保存效果要好，最少不亚于甲醛固定液甚至效果更理想；（2）废弃试剂便于处理，不对人体或环境产生二次伤害。可见无醛混合固定液的应用发展任重而道远，但相信随着研究深入，无醛混合固定液终将替代甲醛成为组织病理学检验过程的首选试剂。

综上所述，应用无醛固定液对组织形态学的保存效果优质，能够维持良好的组织形态学结构，阳性结果定位准确。

参考文献

[1]吴平,张声.无醛固定液与甲醛固定液对DNA保存效果比较[J].临床与实验病理学杂志,2016,32(2):224-227.

[2]田玉旺,朱红艳,李红霞,等.GS无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色结果的影响[J].诊断病理学杂志,2013,20(6):363-365.

[3]吴平,张声.无醛固定液与甲醛固定液对组织形态学保存效果比较[J].临床与实验病理学杂志,2015(3):343-344,345.

[4]李冬梅,孙丽萍,王德田,等.环保型无醛固定液与甲醛固定液的比较[J].诊断病理学杂志,2012,19(4):321.

[5]陈国艳,汤红平,孔艳青,等.新型环保无醛固定液的动物实验研究[J].诊断病理学杂志,2016,23(11):877,880.

[6]黄荣祥,余岚岚,朱晨雁,等.无醛固定液与醛类固定液对细胞核DNA及细胞质着色的影响[J].重庆医学,2017,46(23):3241-3244.