曲靖市沾益区疾病预防控制中心 云南 曲靖 655500
摘要:目的 上级监管部门为做好日常公共卫生监督、监测工作,规范检验检测市场、掌握检验检测机构的实验室检测能力和水平,为了检验检测机构能够在有序开展工作的同时保证实验室检测结果的准确性、可靠性;对取得“检验检测机构资质认定”的实验室下发盲样进行考核【1】【2】。方法:在社会重点关注的“一次性餐具用品中大肠菌群、沙门氏菌”检测开展省级检验检测机构能力验证工作。结果:返馈信息结果合格。
关键词 参加 省级检验检测机构 能力验证
要求:根据云南省市场监督管理局要求,我中心接到的微生物检测能力验证项目是“YNSPT-2023-03一次性餐具用品中大肠菌群、沙门氏菌的测定”能力验证计划;接到考核任务后非常重视积极准备所需培养基等物品。2023年6月14日收到样品就及时开展了检测工作。按要求在2023年6月26日24:00前上传提交检测结果及相关原始记录。
一、材料与方法
1.1盲样:本次能力验证实验室共收到 4 袋铝箔袋真空包装的样品(其中大肠菌群项目 2 袋,沙门氏菌项目 2 袋),每袋样品含 5 根筷子,需分别提供样品中大肠菌群、沙门氏菌的定性结果。样品常温运输(短期常温运输对样品值无影响),当样品到达实验室后,置于-15℃以下冰箱中冷冻保存;由华测检测认证集团股份有限公司提供,收到样品时经仔细检查包装完好。
1.2培养基:此次“大肠菌群、沙门氏菌的测定”考核所选用的培养基等由经本实验室评价合格的合格供应商(北京陆桥技术有限责任公司)提供,均在有效期内使用。
1.3诊断血清及标准菌株:沙门氏菌属诊断血清由兰州生物制品研究所有限责任公司生产;伤寒沙门氏菌标准菌株由广东省食品微生物安全工程技术研究开发中心生产,均自合格供应商、厂家购买,在有效期内使用,所用到的检测仪器等均在有效检定期内。
二、分析步骤
从冰箱取出的样品应使其达到室温方可在生物安全柜内开启检测,从开启到测试结束均应按照无菌操作进行。严格按照GB14934-2016《食品安全国家标准 消毒餐(饮)具》要求进行采样、检测。
1.大肠菌群(发酵法)和沙门氏菌检测样品的采样
筷子样品的采集:依据GB14934-2016《食品安全国家标准 消毒餐(饮)具》要求进行采样【3】。以5根筷子为一件样品,用无菌生理盐水湿润棉拭子,分别在将5根筷子的下段(进口端)5cm处表面范围均匀涂抹3次后,涂抹面积约50cm2,剪掉棉拭子与手接触部分,将棉拭子置于相应的液体培养基内【4】【5】。
2. 大肠菌群检验(发酵法)
依据GB 4789.3-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群检验》的国家【4】标准中MPN法进行定性检验。筷子:将采样后的棉拭子剪掉与手接触部分,置于LST肉汤管中。将LST肉汤管于36℃培养24~48【3】【4】。产气者挑取一环培养物于BGLB肉汤管中,于36℃培养24~48h,产气者记为大肠菌群阳性【4】。按照GB14934-2016 B.4进行报告。
3. 沙门氏菌检验
依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》进行。筷子:将采样后的将棉拭子剪掉与手接触的部分,置于10mLBPW中,于36℃培养18~24h进行前增菌。然后取上述增菌液分别划线接种于BS平板和XLD(或显色培养基) 平板进行分离,观察生长情况,并进行生化和血清学鉴定【6】。按照GB14934-2016 C.4进行报告。
三、检验结果记录
1.大肠菌群检验
检品编号 | 样品名称 | 发酵法 | ||
LST* | BGLB* | 检验结果(/50cm2) | ||
483 | 筷子 | — | — | 阴性 |
230 | 筷子 | + | + | 阳性 |
注:*发酵产气时标记为“+”,不发酵产气时标记为“-”。
2.沙门氏菌检验
检品编号 | 样品名称 | 可疑菌落 | 革兰氏染色 | TSI | 靛基质 | pH7.2尿素 | KCN | 赖氨酸脱羧酶 | GN鉴 定卡 | 血清 鉴定 | 检验结果(/50cm2) | |||
斜面 | 底层 | 产气 | H2S | |||||||||||
483 | 筷子 | + | G- | K | A | + | + | _ | — | — | + | + | + | 阳性 |
230 | 筷子 | — | 阴性 | |||||||||||
阳性对照 | 伤寒沙门氏菌 | + | G- | K | A | _ | + | _ | _ | _ | + | + | + | 检出 |
注:增菌后转种XLD或科玛嘉平板平板、BS平板,观察是否有可疑沙门氏菌生长;可疑菌落在相应平板上生长记为“+”;不生长记为:“-”。*生化试验K:产碱;A:产酸;阳性记为“+”;阴性记为“-”。*GN鉴定卡检出沙门氏菌记为“+”,未检出记为“-”,并附鉴定报告。*血清凝集记为“+”,未凝集记为“-”。*未分离到可疑阳性菌,不用做阳性对照;
小结:
1.下发的考核样品中含有活的微生物(可能含有致病微生物)【2】,实验室检测人员应加强生物安全知识的培训和学习,对实验室设备和专业技术人员的操作必须符合《实验室生物安全通用要求》及相关管理条例
【7】;试验全过程应严格遵守病原微生物实验室操作规程,防止考核样品之间的相互污染,造成检测结果出现偏差;也应防止考核样品中的病原菌扩散,造成实验室环境的污染和操作人员的感染【8】。
2.在同时做沙门氏菌阳性对照或阳性质控样品时要避免与检测样品的交叉污染,这一点需要特别注意。实验室废弃物应严格按照《医疗废物管理条例》及《医疗废物集中处置技术规范》进行处理。
3.微生物样品检测有严格的时间限制,提前做好样品检测准备工作及原始记录的编制(日常工作中需简便、快捷多采用纸片法)也是顺利按时完成检测结果上报的必要条件,结果经反馈为合格。
4.通过上级监管部门的实验室间能力验证比对,能够极大地促进实验室检测人员检测能力和检测水平的提高,及时总结经验使检验检测人员在今后处理突发公共卫生事件工作中更好的发挥指导性作用。
参考文献
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