XRCC1基因多态性与非小细胞肺癌NP方案化疗敏感性的相关性研究

XRCC1基因多态性与非小细胞肺癌NP方案化疗敏感性的相关性研究

赵立江  王克霞 于晓梅 董正

临沂市中心医院 山东 临沂276400

[摘要]目的探讨XRCC1基因多态性与非小细胞肺癌NP方案化疗敏感性的相关性。方法选取2022年1月至2024年6月来我院呼吸内科或胸外科、肿瘤科就诊的山东籍汉族经病理诊断明确为非小细胞肺癌患者200例为研究对象，临床分期按2009年UICC肺癌TNM分期，患者实行标准一线含铂两药联合化疗方案，化疗4周期后评价疗效，并分析化疗敏感性与基因多态性的关系。结果200例XRCC1基因Arg194TrpC/C、C/T、T/T基因型频率分别为97例、82例和21例。Arg399GlnG/G、A/G、A/A基因型频率分别为95例、85例和20例。

经方案化疗后CR9例，PR73例，SD95例，PD23例，化疗总有效率41%。进一步分析XRCC1基因Arg194Trp和Arg399Gln位点与化疗敏感性的关系，发现携带XRCC1基因Arg194TrpC/T患者与C/C患者的化疗有效率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。携带XRCC1基因Arg399GlnG/G与A/G基因的患者有效率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论XRCC1基因Arg194Trp和Arg399Gln与非小细胞肺癌NP方案化疗敏感性具有较好的临床意义。

[关键词]XRCC1基因多态性；非小细胞肺癌；NP方案化疗；敏感性；相关性

肺癌的发病率和死亡率均居所有癌症首位，这与其初期症状不明显及当前各种诊断方法存在的不同程度的缺陷有关，另外不同患者对于不同化疗药物可能呈现不同反应性，即存在化疗敏感性的差异，因此早期预测患者肺癌易感性及化疗敏感性对于降低肺癌病死率具有重要的意义[1-3]。鉴于XRCC1基因多态性在预测肿瘤易感性及化疗敏感性方面存在一定作用[4-5]，我们拟通过对肺泡灌洗液XRCC1基因多态性进行测定，与不同化疗方案结局相联系，探讨肺泡灌洗液基因多态性与化疗敏感性之间的关系，为肺癌早期诊断和根据肺泡灌洗液基因型制定个体化化疗方案奠定应用基础，提高肺癌的检出率并对根据基因型对患者进行个体化的药物治疗方案，提高肺癌治疗效果，降低患者医疗支出。

1资料与方法

1.1一般资料选取2022年1月至2024年6月来我院呼吸内科或胸外科、肿瘤科就诊的山东籍汉族经病理诊断明确为非小细胞肺癌患者200例为研究对象，临床分期按2009年UICC肺癌TNM分期，患者实行标准一线含铂两药联合化疗方案，所有患者在化疗前签署知情同意书，化疗前KPS评分≥70分。血常规、肝肾功能、心功能基本正常。每2个化疗周期对入选患者的疗效进行评估，评估标准参考实体瘤疗效评价标准(ResponseEvaluationCriteriainSolidTumors,RECIST)。所有患者应完成至少4个周期的化疗，在化疗前1天、化疗后6或7天和化疗后7天复查血常规、肝肾功能，并及时症状性处理异常情况。如果骨髓功能恢复或肌酐和转氨酶降低到正常值的2倍以下，可以继续化疗，化疗持续时间不应超过7天。

1.2纳入标准：均为首次确诊病例，并经纤维支气管镜活检确诊。排除标准：严重的肝肾功能性疾病；其他神经系统疾病；有其他恶性肿瘤病史；最近服用免疫抑制药物的患者；在治疗期间居住或居住在当地以外的患者；合并精神疾病或意识不清，不能积极配合。所有研究对象均已获得知情同意书，并已获得医院伦理委员会的批准。

1.3方法

1.3.1基因多态性检测：采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法对XRCC1Arg194Trp和Arg399Gln位点多态性进行检测。Arg194Trp位点引物为：5’-GCCCCGTCCCAGGTA-3’；R：5’-AGCCCCAAGACCCmCACT-3’。PCR反应条件为95℃5min→95℃1min→58℃50s→72℃50s，35个循环→72℃延伸10min。取PCR产物10μl，加入10URasI及1μl酶切缓冲液于37℃水浴中16h，用3.0％的琼脂糖凝胶电泳1h，凝胶成像仪观察。Arg399Gln位点检测引物为F：5’-TTGTGCTTTCTCTGTGTCCA-3’；R：5’-TCCTCCAGCCTTTTGATA-3’。PCR反应条件为95℃5min→95℃1min→56℃1min→72℃1min，35个循环→72℃延伸10min。取PCR产物10μl，加入10UMspI及1μl酶切缓冲液于37℃水浴中16h，用2.0％的琼脂糖凝胶电泳40min．凝胶成像仪观察。

1.3.2化疗方法：选用一线含铂两药方案化疗，铂类药物主要选用顺铂或卡铂，联合紫杉醇多西紫杉醇、吉西他滨、培美曲赛。化疗方案及化疗药物剂量：紫杉醇（135mg/m2,d1天）、多西紫杉醇（75mg/m2，d1天）、吉西他滨（1000mg/m2,d1、d8天）、培美曲赛（500mg/m2，d1天）、顺铂（75mg/m2，d1天或d1-d3天）、卡铂（AUC4-6，d1天或d1-d5天），21天为1化疗周期。

1.4评价指标RECIST的疗效评价标准：完全缓解（CompleteRemission,CR）：所有靶病灶消失，无新病灶出现，且肿瘤标志物正常，至少维持4周。部分缓解（PartialRemission,PR）：靶病灶最大径之和减少≥30%，至少维持4周。疾病稳定（StableDisease,SD）：靶病灶最大径之和缩小未达到PR或增大未达到PD。疾病进展（ProgressiveDisease,PD）：靶病灶最大径之和增加至少≥20%，及其绝对值至少增加5mm，或出现新发病灶。

1.5统计学方法采用IBMSPSS25.0统计学软件进行数据分析，应用卡方检验计算病例组基因分布频率、等位基因分布频率、不同病理类型基因分布、不同疗效基因分布；应用Logistic回归法进行分层分析，计算相对风险度的比值比(oddsratio,OR)及其95%可信区间(95%confidenceinterval,95%CI)，P<0.05认为有统计学意义。

2结果

2.1XRCC1基因分布

XRCC1Arg194Trp和Arg399Gln位点的PCR扩增后产物经酶切电泳，分别产生C/C、C/T、T/T基因型和G/G、A/G、A/A基因型。XRCC1Arg194Trp位点C/T和Arg399Gln位点G/A多态进一步经PCR产物测序证实。200例XRCC1基因Arg194TrpC/C、C/T、T/T基因型频率分别为97例、82例和21例。Arg399GlnG/G、A/G、A/A基因型频率分别为95例、85例和20例。

2.2化疗总有效率

经方案化疗后CR9例，PR73例，SD95例，PD23例，化疗总有效率41%。

2.3XRCC1基因多态性与化疗敏感性的关系

进一步分析XRCC1基因Arg194Trp和Arg399Gln位点与化疗敏感性的关系，发现携带XRCC1基因Arg194TrpC/T患者与C/C患者的化疗有效率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。携带XRCC1基因Arg399GlnG/G与A/G基因的患者有效率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

3讨论

随着药物基因组学的发展，人们发现一些基因的单核苷酸多态性（Singlenucleotidepolymorphisms，SNPs）及其表达水平与肺癌易感性、化疗敏感性之间存在一定的相关性[6-7]。SNPs是人类最常见的可遗传变异类型，占90%以上。作为第三代遗传分子标记，它们可以获得疾病标记和表达标记。因此，SNPs逐渐成为癌症研究的热点领域，以寻找筛查、诊断和预后的标记物，并开发新的靶点[8-9]。

铂类药物是非小细胞肺癌临床治疗中最常用的化疗药物之一。当铂类药物进入肿瘤细胞时，会与其DNA双链结合形成加合物，导致肿瘤细胞DNA链之间或链内交联，造成DNA复制障碍，从而导致肿瘤细胞凋亡。当DNA结合物形成时，一些加合物将被DNA修复系统快速识别和清除。如果在肿瘤细胞凋亡之前清除加合物，肿瘤细胞就会存活。这就是肿瘤细胞对铂产生耐药性的机制。XRCC1基因多态性是一种可能影响新辅助化疗敏感性的因素。XRCC1基因是DNA损伤修复系统中的一员，其多态性与DNA损伤修复方面的能力相关，因此该基因多态性对于恶性肿瘤的发生和治疗都具有重要意义[10-13]。。因此检测XRCC1基因型多态性对预测化疗敏感性具有一定的指导意义。

综合文献报道和我们自身的研究经验，我们拟此项目对疑似肺癌患者BALF中XRCC1Arg194Trp和Arg339GlnSNP基因型进行测定，本研究结果显示，XRCC1Arg194Trp和Arg399Gln位点的PCR扩增后产物经酶切电泳，分别产生C/C、C/T、T/T基因型和G/G、A/G、A/A基因型。进一步分析XRCC1基因Arg194Trp和Arg399Gln位点与化疗敏感性的关系，发现携带XRCC1基因Arg194TrpC/T患者与C/C患者的化疗有效率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。携带XRCC1基因Arg399GlnG/G与A/G基因的患者有效率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。但目前临床的结果[14-15]不完全一致。且目前对基因多态与化疗疗效关系的研究"在选择入组时"基本没有考虑方案的特异性，而化疗方案不同"很有可能干扰我们对于多态性与疗效关系的评价，因此，XRCC1基因多态性与化疗敏感性之间的关系仍需进一步研究。在未来的研究中，还需要对其他基因进行更深入的独立和联合分析。此外，本研究样本量较小，需要进一步扩大样本进行深入研究，为未来铂类化疗治疗非小细胞肺癌癌症提供证据，更好地指导临床实践。

参考文献

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项目名称：支气管镜BALF-XRCC1基因多态性对肺癌易感性和化疗反应性的正相关性研究（编号：2022YX0003）