依替巴肽中1，2-乙二硫醇气相色谱法测定

依替巴肽中1，2-乙二硫醇气相色谱法测定

苏才毅王妹

海南中和药业股份有限公司，海南海口570216

摘要：目的建立依替巴肽中1，2-乙二硫醇的气相色谱测定方法。方法采用100%的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱（如DB-1 30m×0.53mm×5.0µm或极性相近的色谱柱）；起始温度为40℃，维持2分钟；以每分钟10℃的速率升温至100℃，维持2分钟；再以每分钟2℃的速率升温至120℃；再以每分钟50℃的速率升温至250℃，维持5分钟；检测器温度为260℃；进样口温度为220℃；氮气流速为每分钟2ml；顶空瓶平衡温度为90℃，平衡时间为30分钟。结果空白溶剂、供试品溶液不干扰1，2-乙二硫醇的测定；1，2-乙二硫醇在线性浓度3.07µg/ml～45.93µg/ml范围内，进样浓度与峰面积呈良好的线性关系（R2=0.999）；检测限为1.54µg/ml；定量限为3.07µg/ml；平均回收率在96.80%～114.43%之间，RSD为5.64%；精密度、重复性、稳定性均符合要求。结论方法具有较好的适用性、可靠性和准确性，可用于依替巴肽中1，2-乙二硫醇含量的检测。

关键词：依替巴肽；1，2-乙二硫醇；气相色谱；检测

引言

1，2-乙二硫醇为透明至淡绿色液体，有臭味，吸入会导致胸痛、头痛、恶心、肺水肿，溶于乙醇、丙酮等，主要应用于有机合成和螯合配体[1-2]。目前，对于1，2-乙二硫醇的质量控制研究甚少，这就增加了依替巴肽质量控制的安全性风险，因此必须建立一种可行的检测方法，用于依替巴肽对1，2-乙二硫醇的检测。本研究建立气相色谱法对1，2-乙二硫醇的检测及质量监控。

1. 仪器与材料

8890GC-7697A气相色谱仪（氢火焰离子检测器，美国 Agilent公司）；色谱柱：DB-1（30m×0.53mm×5.0µm）；1，2-乙二硫醇（含量100%，批号J2210456，阿拉丁）；依替巴肽；甲醇（色谱纯，TEDIA）；冰醋酸（分析纯，广州化学试剂厂）

2. 方法与结果
   1. 色谱条件

色谱柱：100%的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱（如DB-1 30m×0.53mm×5.0µm或极性相近的色谱柱）；升温程序：起始温度为40℃，维持2分钟；以每分钟10℃的速率升温至100℃，维持2分钟；再以每分钟2℃的速率升温至120℃；再以每分钟50℃的速率升温至250℃，维持5分钟；检测器温度为260℃；进样口温度为220℃；氮气流速为每分钟2ml；顶空瓶平衡温度为90℃，平衡时间为30分钟。

2.2.溶液配制

空白溶剂  量取冰醋酸300ml，加甲醇700ml，混匀。

对照品贮备液  精密量取1，2-乙二硫醇适量，用溶剂定量稀释制成每1ml中约含1，2-乙二硫醇1.5mg的对照品贮备液。

对照品溶液  取对照品贮备液适量，用溶剂定量稀释制成每1ml中约含1，2-乙二硫醇30μg的对照品溶液，精密量取2ml，置顶空瓶中，密封。

供试品溶液  取本品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含依替巴肽30mg的溶液，精密量取供试品溶液2ml，置顶空瓶中，密封。

加标供试品溶液  取本品适量，精密称定，加对照品贮备液适量，用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含1，2-乙二硫醇30μg、依替巴肽30mg的加标供试品溶液，精密量取供试品溶液2ml，置顶空瓶中，密封。

3. 计算公式

残留量（％）= Asam×Wstd×Nsam×Pstd/（Astd×Nstd×Wsam）×100％，Asam为供试品溶液中残留溶剂峰面积；Wstd为对照品称样量(mg)；Nsam为供试品溶液稀释倍数；Wsam为供试品称样量(mg)；Astd为对照品溶液中残留溶剂平均峰面积；Pstd为对照品的含量；Nstd为对照品溶液稀释倍数。限度不得过0.1%。

3.1.结果

3.1.1.专属性

空白溶剂色谱图中，溶剂在1，2-乙二硫醇峰位置无干扰峰出现，对1，2-乙二硫醇测定无干扰。供试品溶液对1，2-乙二硫醇的测定无干扰。对照品溶液与加标供试品溶液中，1，2-乙二硫醇峰保留时间分别为17.985min和17.965min，保留时间一致，说明本方法的专属性良好。

3.1.2.定量限和检测限

1，2-乙二硫醇定量限浓度为3.07µg/ml和检测限浓度为1.54µg/ml，说明本方法的灵敏度高。

3.1.3.线性和范围

1，2-乙二硫醇在线性浓度3.07µg/ml～45.93µg/ml范围内，进样浓度与峰面积呈良好的线性关系。线性方程为y = 0.6905 x + 0.6163，相关系数r为0.9997。说明本方法的线性关系良好。

3.1.4.精密度

平行配制的6份加标供试品溶液中，1，2-乙二硫醇含量的RSD为2.57%。说明本方法的精密度良好。

3.1.5.准确度

1，2-乙二硫醇50%、100%、150%各浓度下回收率在96.80%～114.43%之间，9份供试品溶液平均回收率为107.60%，回收率RSD为5.64%。说明本方法的准确度良好。

3.1.6.溶液稳定性

对照品溶液在室温条件下放置24小时，各测定时间点的1，2-乙二硫醇峰峰面积的RSD为7.29%，说明对照品溶液在室温下放置24小时内稳定。加标供试品溶液在室温条件下放置26小时，各测定时间点的1，2-乙二硫醇峰峰面积的RSD为6.99%，说明加标供试品溶液在室温下放置26小时内稳定。

3.1.7.耐用性

考察色谱柱变化时结果的变化。在极性相同，批号不同的色谱柱耐用性下，加标供试品溶液中，1，2-乙二硫醇含量与标准条件下含量的差值为0.02%。说明本方法的耐用性良好。

3.1.8.样品测定

取两批依替巴肽分别按照本方法测定，检测结果见图1，结果显示2批样品均未检测出1，2-乙二硫醇。

图1从左到右依次是对照品1，2-乙二硫醇、样品A、样品B

4. 讨论

气相色谱法具有分离效率高、选择性好、检测灵敏度高、操作自动化、应用范围广等特点，能够满足日常检测需求。

本文建立了依替巴肽中1，2-乙二硫醇气相色谱检测方法，此方法简单实用，具有较好的适用性、可靠性、可重现性。为依替巴肽中1，2-乙二硫醇的检测提供了新的参考。

参考文献

[1]邢军伟,章亚东,王振兴,等.三相转移催化合成 1，2-乙二硫醇[J].化工进展,2010.29( 1):140-145 .

[2]周则卫.1，2-乙二硫醇制备工艺的改进[J].化学试剂,2008,30(3) : 225-226 .