简介：摘要目的观察血清外泌体微小RNA-377(miR-377)在食管癌(EC)中的表达水平，并探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OE33、Eca9706细胞株、5例EC癌组织中miR-377表达水平。选取2016年4月至2019年3月经山东第一医科大学附属济南人民医院确诊并住院治疗的EC患者40例作为观察组，另选取同期本院体检健康者40例作为对照组，RT-qPCR检测血清外泌体中miR-377表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平；采用χ2检验分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF水平与临床病理特征的关系；Pearson法分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF表达相关性；受试者工作特征(ROC)曲线预测miR-377、VEGF表达水平对EC的诊断价值。结果与正常食管上皮细胞株HEEC细胞中miR-377表达水平(1.07±0.20)比较，OE33、Eca9706癌细胞中miR-377表达水平(0.74±0.21和0.68±0.19)显著降低(F＝6.604，P<0.05)；与癌旁组织中miR-377表达水平(1.10±0.23)比较，癌组织中miR-377表达水平(0.69±0.18)显著降低(t＝3.319，P<0.05)；观察组血清外泌体中miR-377表达水平(0.76±0.22)明显低于对照组血清外泌体中miR-377表达水平(1.04±0.25，t＝5.318，P<0.05)，血清VEGF表达水平[(22.79±4.79) pg/ml]明显高于对照组血清VEGF表达水平[(16.71±3.44) pg/ml，t＝6.521，P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377及血清VEGF表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结转移均有关(miR-377：χ2＝6.172、8.780、13.864，P<0.05；VEGF：χ2＝6.839、5.402、6.114，P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377与血清VEGF表达呈负相关(r＝-0.641，P<0.05)；血清外泌体中miR-377诊断EC的ROC曲线下面积为0.835(95%CI：0.684~0.933)，灵敏度为69.50%，特异性为88.20%；血清VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.909(95%CI：0.775~0.977)，灵敏度为89.65%，特异性为76.50%；miR-377联合VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.949(95%CI：0.829~0.994)，灵敏度为95.70%，特异性为88.21%。结论miR-377在EC患者血清外泌体中呈低表达，miR-377与VEG联合检测可有效提高EC诊断率。

简介：摘要目的探讨木犀草素对食管癌细胞生物学行为的影响及其机制。方法分别用0 μmol/L(对照组)、25 μmol/L(低剂量木犀草素组)、50 μmol/L(中剂量木犀草素组)及100 μmol/L(高剂量木犀草素)浓度木犀草素处理EC9706细胞3 d。分别转染anti-微小核糖核酸(miR)-NC、anti-miR-718、miR-NC及miR-718 mimics至EC9706细胞，转染anti-miR-NC及anti-miR-718细胞分别标记为anti-miR-NC组及anti-miR-718组。用100 μmol/L浓度木犀草素孵育转染miR-NC(高剂量木犀草素+miR-NC组)及转染miR-718 mimics(高剂量木犀草素+miR-718组)至EC9706细胞。溴化-3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)检测细胞增殖；Transwell检测细胞侵袭及迁移；流式细胞仪检测细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-718表达水平；蛋白质印迹法检测蛋白表达。两组间比较行t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK检验。结果低、中、高剂量木犀草素组细胞增殖活力显著低于对照组(分别1.34±0.06、0.97±0.05、0.54±0.04比1.53±0.08)，差异有统计学意义(F＝53.311，P<0.05)。低、中、高剂量木犀草素组迁移细胞数、侵袭细胞数、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP)-2、MMP-9及B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)表达显著低于对照组[迁移细胞数分别为(116.73±5.09)、(87.74±3.14)、(51.46±3.46)个比(136.67±6.13)个，侵袭细胞数分别为(103.29±4.45)、(65.17±2.92)、(29.34±1.16)个比(121.48±5.89)个，Cyclin D1分别为0.71±0.04、0.49±0.03、0.24±0.02比0.79±0.05，MMP-2分别为0.66±0.04、0.49±0.03、0.31±0.02比0.75±0.05，MMP-9分别为0.57±0.04、0.41±0.02、0.23±0.02比0.69±0.04，bcl-2分别为0.61±0.03、0.46±0.03、0.25±0.02比0.69±0.05]，凋亡率、p21及B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(bax)表达显著高于对照组[凋亡率分别为(7.89±0.92)%、(15.82±1.19)%、(24.61±1.56)%比(5.83±0.51)%，p21分别为0.42±0.03、0.59±0.04、0.83±0.05比0.31±0.02，bax分别为0.29±0.03、0.48±0.03、0.71±0.06比0.19±0.02)，差异有统计学意义(F＝64.295、104.645、58.793、44.683、35.804、30.089、35.530、32.702、38.778，P<0.05)。低、中、高剂量木犀草素组细胞miR-718表达显著低于对照组(分别为0.89±0.05、0.67±0.04、0.41±0.03比1.01±0.07)，差异有统计学意义(F＝26.443，P<0.05)。高剂量木犀草素+miR-718组细胞迁移细胞数、侵袭细胞数、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、bcl-2表达显著高于高剂量木犀草素+miR-NC组，凋亡率、p21及bax表达显著低于anti-miR-NC组，差异有统计学意义(t＝8.172、14.002、7.023、10.201、6.330、7.093、9.799、6.988、9.381，P<0.05)。结论木犀草素可通过下调miR-718表达而抑制食管癌EC9706细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨血管生成素1(ANGPT1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对肺癌细胞生物学行为的影响。方法收集40例NSCLC患者肿瘤组织及癌旁组织、NSCLC细胞系(A549、HCC827、H460和H1299)和人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)行研究检测。转染ANGPT1真核表达质粒至A549细胞(pc-ANGPT1组)，设定空载表达质粒转染空载组(pcDNA组)和空白对照组(Control组)。反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测ANGPT1基因信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。细胞计数(CCK-8)检测细胞吸光度，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell检测细胞迁移及侵袭。两组间比较行t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间比较采用SNK检验)。结果NSCLC患者肿瘤组织ANGPT1基因mRNA和蛋白表达显著低于癌旁组织(mRNA表达为0.17±0.04比1.03±0.05，蛋白表达为0.27±0.06比0.83±0.07)，差异有统计学意义(t＝24.145、19.381，P<0.05)。A549、HCC827、H460和H1299细胞ANGPT1基因mRNA和蛋白表达显著低于BEAS-2B细胞(mRNA表达为0.11±0.03、0.32±0.06、0.28±0.03、0.37±0.06比1.05±0.08，蛋白表达为0.23±0.02、0.29±0.05、0.27±0.04、0.35±0.05比0.79±0.06)，差异有统计学意义(F＝15.447、13.516，P<0.05)。pc-ANGPT1组A549细胞ANGPT1基因mRNA和蛋白表达、细胞凋亡率显著高于pcDNA和Control组[ANGPT1基因mRNA为4.24±0.13比1.01±0.05、1.02±0.04，ANGPT1基因蛋白为1.14±0.08比0.25±0.04、0.24±0.04，细胞凋亡率为(19.27±3.65)%比(3.89±0.78)%、(3.82±0.81)%]，48、72、96 h细胞吸光度、细胞迁移数及侵袭数显著低于pcDNA和Control组[48 h吸光度值为0.36±0.05比0.49±0.07、0.52±0.06，72 h吸光度值为0.47±0.07比0.73±0.08、0.79±0.07，96 h吸光度值为0.61±0.08比0.97±0.11、1.03±0.09，细胞迁移数为(60.34±9.42)个比(122.73±12.59)、(121.25±14.16)个，细胞侵袭数为(29.84±5.37)个比(75.31±8.65)、(78.29±8.90)个]，差异有统计学意义(F＝34.166、21.542、29.942、8.929、11.375、13.983、31.135、24.567，P<0.05)。结论ANGPT1基因在NSCLC中呈低表达，可促进NSCLC细胞凋亡并抑制增殖、迁移及侵袭。