简介：摘要目的评价小鼠神经细胞氧糖剥夺-复糖复氧时微小RNA-93-5p(miR-93-5p)与线粒体融合蛋白2(Mfn2)的关系。方法体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞至对数生长期。实验Ⅰ　采用随机数字表法将细胞分为5组(n＝20)：对照组(C组)、氧糖剥夺-复糖复氧组(OGD/R组)、miR-93-5p抑制剂组(I组)、siRNA-Mfn2+miR-93-5p抑制剂组(siMfn2+I组)和miR-93-5p阴性对照组(NC组)。氧糖剥夺：在低糖平衡盐溶液、37 ℃ 5%CO2-95%N2的环境中培养3 h，复糖复氧：在正常培养基、37 ℃ 5%CO2-95%空气中复氧24 h。I组、siMfn2+I组与NC组在模型制备前48 h分别转染miR-93-5p抑制剂、miR-93-5p抑制剂+siRNA-Mfn2及阴性对照miRNA。采用CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，qRT-PCR法检测miR-93-5p、Mfn2 mRNA表达水平，Western blot法检测Mfn2表达水平。实验Ⅱ　构建野生型(WT)-Mfn2和突变型(MUT)-Mfn2质粒，并分别与miR-93-5p模拟物和miR-93-5p空白对照(miR-93-5p NC)载体转染至神经母细胞瘤细胞，转染48 h后，采用随机数字表法将细胞分为4组(n＝5)：miR-93-5p NC-WT-Mfn2共转染组、miR-93-5p模拟物-WT-Mfn2共转染组、miR-93-5p NC-MUT-Mfn2共转染组和miR-93-5p模拟物-MUT-Mfn2共转染组。采用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性。结果实验Ⅰ　与C组比较，其余各组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，miR-93-5p表达上调，Mfn2及其mRNA表达下调(P<0.05)；与OGD/R组或NC组比较，I组细胞活力升高，细胞凋亡率降低，miR-93-5p表达下调，Mfn2及其mRNA表达上调(P<0.05)；与I组比较，siMfn2+I组细胞活力降低，细胞凋亡率升高，Mfn2及其mRNA表达下调(P<0.05)。实验Ⅱ　与miR-93-5p NC-WT-Mfn2共转染组比较，miR-93-5p模拟物-WT-Mfn2共转染组荧光素酶活性降低(P<0.05)；与miR-93-5p NC-MUT-Mfn2共转染组比较，miR-93-5p模拟物-MUT-Mfn2共转染组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-93-5p表达上调，进而靶向下调Mfn2表达，可能是小鼠神经细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤的机制。

简介：摘要

简介：摘要目的评价hsa_circ_0025853在人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞)氧糖剥夺/复糖复氧损伤(OGD/R)中的作用。方法传代培养SK-N-SH细胞至对数生长期，采用随机数字表法分为4组(n＝40)：对照组(C组)、OGD/R组、hsa_circ_0025853过表达组(E组)和hsa_circ_0025853过表达阴性对照组(EV组)。C组细胞在37 ℃、5%CO2正常条件下培养，OGD/R组细胞铺于6孔板或96孔板待完全贴壁后氧糖剥夺16 h后复糖复氧。E组和EV组分别转染hsa_circ_0025853过表达载体或hsa_circ_0025853过表达阴性对照载体后制备OGD/R模型。于复糖复氧4和12 h时，采用qPCR法检测hsa_circ_0025853、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)mRNA表达水平；Western blot法检测Drp1表达水平，CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与C组比较，OGD/R组复糖复氧后细胞活力降低，细胞凋亡率升高，Drp1及其mRNA表达上调，hsa_circ_0025853表达下调(P<0.05)；与OGD/R组或EV组比较，E组复糖复氧后细胞活力升高，细胞凋亡率降低，Drp1表达下调，hsa_circ_0025853表达上调(P<0.05)，Drp1 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论hsa_circ_0025853表达下调可促进Drp1表达上调，诱发细胞凋亡，参与SK-N-SH细胞OGD/R的发生机制。