简介：

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简介：摘要目的建立快速荧光灶试验(fluorescence focus assay，FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的方法，验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。方法利用原核表达方式构建JEV非结构蛋白1(non-structural protein 1，NS1)重组体系，以纯化所得的JEV-NS1蛋白免疫家兔制备抗NS1蛋白多克隆抗体，建立快速FFA测定JEV滴度的方法。通过与病毒蚀斑法作比对分析，对其专属性、准确度、精密度、线性、范围和耐用性进行验证。用经验证后的FFA检测28批乙脑减毒活疫苗，分析其应用于生产的可行性。结果所制备的多克隆抗体与JEV可产生特异性荧光灶反应，与其他病毒(森林脑炎病毒、黄热病毒、人柯萨奇病毒A2型和A4型)无交叉反应；FFA方法学验证结果均符合乙脑减毒活疫苗的质控要求；与蚀斑法比较，FFA检测结果更趋一致。结论本研究建立的FFA通过方法学验证，可应用于乙脑减毒活疫苗成品的滴度测定。

简介：摘要目的研究口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗毒种的传代遗传稳定性，确保毒种能在传代过程中稳定遗传。方法将建立的主种子批传代扩增制备新的工作种子批，用于规模化生产各血清型原液。原液传代至疫苗代次后第6代(P6)。对各血清型工作种子批、2批原液及P6，按照企业自建标准及中国药典2020年版三部通则规定的鉴别试验、病毒滴度测定、无菌检查、支原体检查、外源因子检查及遗传稳定性研究等方法进行检定。提取样品总RNA进行高通量测序，测定单核苷酸多态性及注释。分析传代过程中病毒滴度的变化及各血清型VP7、NSP4蛋白编码基因的核苷酸和氨基酸序列同源性。结果口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗工作种子批、原液及P6的支原体、无菌和外源因子检查结果均为阴性。各血清型工作种子批和P6病毒滴度在6.4~8.1 lg荧光转化灶/ml，原液病毒滴度在7.8~9.0 lg荧光转化灶/ml。G1—G4、G8血清型各样品VP7核苷酸和氨基酸序列的同源性均为100%，G9血清型同源性分别为99.9%和99.7%。各血清型样品NSP4核苷酸和氨基酸序列同源性均高于99.8%，且氨基酸突变位点均不在NSP4肠毒素活性区。结论口服六价重配轮状病毒减毒活疫苗生产用毒种具有良好的传代稳定性，可用于大规模生产。

简介：摘要目的比较不同公司生产的无血清培养基对病毒性疫苗生产用Vero细胞培养效果，及基因工程胰蛋白酶的细胞消化效果，以判断是否适用。方法实验组用VirusPro Vero-A培养基进行Vero细胞的培养，用Trpzyme消化细胞。对照组用VP-SFM培养基进行细胞培养，用TrypLE Select消化细胞。两组Vero细胞以相同密度接种在T175培养瓶中，以相同的培养条件和传代方法在T175瓶和细胞工厂中各培养3代。培养期间观察细胞的上清液、形态以及汇合度，消化后检测细胞活率并计算细胞收获量。采用配对t检验比较两组消化液的pH值、总消化时长、37 ℃消化孵育时长、细胞活率以及细胞收获量。结果两组细胞生长状态均良好。配对t检验显示，实验组消化液的pH值(6.99)、总消化时长(17.28 min)和37 ℃消化孵育时长(6.93 min)均值均大于对照组消化液(分别为6.75、12.34 min、3.30 min)，细胞活率(94.79%)及细胞收获量(T175瓶：3.91×107个；细胞工厂：1.90×109个)均值均高于对照组的(分别为90.20%、3.33×107个、1.26×109个)，且差异有统计学意义(t值分别为9.17、3.46、2.98、2.31和4.38，P值均<0.05)。结论实验组无血清培养基培养效果较好，实验组基因工程胰蛋白酶细胞消化液温和、细胞损伤小，均适用于Vero细胞。

简介：摘要对于企业来说，有经营就会有风险。资本运营作为国企的重要经营途径，越来越为企业所重视，它可以拓展市场、扩大企业规模、提高企业的市场竞争力，在带给企业各种收益的同时，也伴随着各种风险。因此，国有企业在进行资本运营时，必须要有极高的风险意识，重视风险识别、加强风险防范，以保证企业资本的成功运营。本文从国有企业资本运营风险的概念入手，通过对国企资本运营风险的类型，及风险评价体系的分析，重点探讨了资本运营的风险控制措施。

简介：摘要教学是师生互动的过程，本文深入探究小学语文课堂教学策略有效性，并提出一系列切实可行的举措。

简介：摘要一种充满生机活力的课堂对于优化课堂教学效果凸显，作为一名小学语文教师，作者感慨颇多，特作以下探析，以期为生机活力课堂构建做出自身贡献。

简介：摘要阅读是语文教学一大重点和难点，作为一名小学语文教师，作者感触颇多，特结合自身多年教学经验，同时博采众长，特作以下探讨，以期为学生阅读水平提高进献微薄之力。

简介：<正>许多人问我是怎样从一名门卫考上研究生的?其实我当时并没想考研,是为保饭碗而开始学英语……我是从一个企业考到所在学校的,开始是干保卫,2000年被聘到了综合办公室,这期间我校的用

简介：写作学作为一门独立学科，在新时期得到了发展和完善。它为文化的繁荣、教育的昌盛、政治的稳定、经济的发展、社会主义物质文明和精神文明建设，做出了巨大的贡献。