简介：目的：构建猪α-1，3-半乳糖转移酶（GGTA1）基因的正负筛选打靶载体。方法：以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板，采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段；以长约2kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂，在XbaI和ClaI位点插入pLoxP质粒正筛选标记neo基因的3’端；以长约5．4kb包括部分第8外显子、全部第8内含子及部分第9外显子的片段为同源长臂，于NotI位点插入该质粒中聊D基因的5’端；2．7kb的负筛选标记船基因位于载体中同源短臂的3’端外侧。结果与结论：酶切、PCR及测序结果表明，同源臂被正确连接至质粒pLoxP，成功构建了猪GGTA1基因正负筛选打靶载体pSL／GT。

简介：DNA甲基化属于一种表观遗传修饰,主要发生在CpG双核苷酸序列中的胞嘧啶上,是在DNA甲基转移酶催化下,以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基转移到胞嘧啶上,生成5-甲基胞嘧啶的一种反应。DNA甲基化在植物生长过程中具有极其重要的作用。综述了植物DNA甲基化的特征、调控机制,及其对植物基因表达影响的研究进展。

简介：CpG岛是人类基因组中富含CpG二核苷酸的DNA序列，主要位于基因启动子区，大小约为100-1000bp，与约60％编码基因相关。DNA中CpG岛甲基化可导致抑癌基因的表观遗传学转录失活，直接参与肿瘤的发生机制。近年来，甲基化已成为表观遗传学研究的焦点。我们简要综述了DNA甲基化在结直肠癌中的研究进展。

简介：DNA甲基化是真核生物表观遗传学重要的机制之一，对基因转录水平的表达具有重要的调控作用。近年来，DNA甲基化在动植物遗传育种领域的研究引起了人们广泛的关注。我们从DNA甲基化与基因的表达调控、动植物基因组的甲基化状态、甲基敏感扩增片段多态性方法、DNA甲基化与杂种优势，以及DNA甲基化与分子标记等方面，简要综述了国内外有关DNA甲基化在动植物遗传育种研究中的进展，着重于全基因组DNA甲基化模式在动植物遗传育种中的相关研究和应用。

简介：高等植物具有复杂的机制使其对环境的变化做出响应，这种机制是通过长期进化建立起来的。它们能够对出现的生物和非生物胁迫产生响应。在分子水平上，植物对各种胁迫的响应是受多基因表达变化调控的，包括植物激素水杨酸、脱落酸等信号途径在整合、协调植物胁迫过程中起关键作用。近年来的研究表明，在植物响应胁迫这一过程中还进行着表观遗传调控这一进程。我们简要综述了生物胁迫和非生物胁迫对表观遗传的影响以及胁迫印记的产生，并讨论了植物响应胁迫的表观遗传调控机制。

简介：目的：以转坛￡抗虫基因白桦的不同月份叶片为实验材料，揭示基因组DNA甲基化水平与植物叶片发育及外源基因表达水平之间的相关性。方法：应用DNA-MSAP方法检测叶片基因组DNACCGG位点甲基化状态，利用Northern杂交技术分析其外源基因表达水平。结果：转基因白桦叶片基因组DNA同年5～9月总甲基化水平分别为21．95％、29．62％、25．41％、41.39％和47．24％，除7月份稍有波动外，整体呈现随着叶片的成熟和衰老渐升高趋势；全部扩增位点中，半、全甲基化位点比例分别为17．99％和15．19％，在各月份叶片中变化较大，其中半甲基化位点比例分别为10．37％、19．14％、14．92％、17．2％和28．83％，全甲基化位点比例依次为11．58％、10．49％、10．50％、24．11％和18．40％。同一无性系外源基因在当年5～7月表达量最高，8～9月呈下降趋势，与基因组甲基化状态呈负相关趋势。结论：转基因白桦叶片的成熟和衰老及外源基因表达量降低均可能与基因组DNA甲基化水平的升高相关。

简介：目的：克隆并表达caspase-8／10相关RING结构域蛋白1（CARP1）基因，检测其泛素连接酶活性。方法：提取结肠癌HCT116细胞总RNA，RT-PCR扩增CARP1基因，将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中，序列正确的阳性克隆进行扩增，提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达，通过体内泛素化检测其泛素化酶活性，通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-kB转录活性的影响，利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响。结果：免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达；免疫共沉淀实验表明，当CARP1存在时，受体相互作用蛋白1（RIP1）被泛素化；萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子a（TNFa）引起的NF-kB报道基因的激活；通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长，并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用。结论：构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达，表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性，可抑制TNFa引起的NF-kB报告基因的激活，并且促进结肠癌细胞的生长，为进一步的基因功能研究奠定了基础。

简介：质粒载体在基因治疗中占据重要地位。传统质粒DNA在真核生物中可能会引起严重的炎症反应,未甲基化的CpG序列可能抑制基因的表达,最好的解决办法是在生产质粒载体过程中将细菌调控序列整体消除。微环DNA是一种新颖的小环超螺旋表达框,它是传统质粒在大肠杆菌体内通过位点特异性重组得到的。微环DNA缺乏抗性标记基因、复制原点等细菌序列,增强了在临床上的安全性。体内、外研究表明,微环DNA提高了转基因表达效率。我们就重组酶系统及微环DNA的生产、纯化和转染效率等方面的研究进行了综述

简介：目的：探讨脑胶质瘤患者O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因MGMT和错配修复基因hMLH1、hMSH2启动子CpG岛甲基化状态,及其在烷化剂化疗中的意义。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测39例脑胶质瘤和6例正常脑组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态,免疫组化方法测定蛋白表达。结果：脑胶质瘤患者组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化发生率分别为46.2%、10.3%和20.5%,3种基因启动子未甲基化模式与其对应蛋白表达模式相似,并与患者性别、年龄、病理类型和病理分级无明显相关性。回顾性分析患者资料,显示39例脑胶质瘤患者中,MGMT基因甲基化的患者生存期显著高于MGMT基因未甲基化患者（P〈0.05,Log-rank检验）。结论：MGMT及错配修复基因甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件,可能与肿瘤的发生有关;检测MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态,在判断脑胶质瘤患者预后和预测烷化剂化疗耐药性中可能具有重要意义。

简介：目的：获得抑制效果好的泛素C端水解酶LI（UCH—L1）基因小干扰RNA（siRNA）干扰载体。方法：根据Gen—Bank中大鼠UCH—L1基因序列设计并合成4对siRNA寡核苷酸序列，将4对寡榱苷酸序列退、k成双链后分别插入siRNA表达载体pcDNA6．2-GW／EmGFP—miR中构建4个siRNA表达质粒，测序鉴定后将4个siRNA表达磺牝分别转染HEK293细胞，利用Western印迹和qPCR方法检测干扰效果；将干扰效果最好的质粒包装成腺病毒，感染大汛血管平滑肌细胞（VSMC），并采用TNF-a干预诱导UCH—Ll表达升高，Western印迹验证干扰效果。结果：测序分析证实4对siRNA寡核苷酸序列分别插入siRNA表达载体pcDNA6．2-GW／EmGFP—miR；qPCR检测与Western印迹均表明第3号siRNA表达载沐对UCH—Ll表达的抑制程度最高，将其包装成腺病毒并转染VSMC能显著抑制TNFd湾导的U（：H—I。l表达升高。结论：构建并筛选出干扰效果好的UCH—LlsiRNA干扰载体。

简介：目的：探讨错配修复基因1（hMLH1）、错配修复基因2（hMSH2）启动子区甲基化与子宫内膜异位症的关系。方法：采用甲基化特异性PCR方法检测23例子宫内膜异位症组织和20例正常子宫内膜中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态。结果：hMLH1基因在子宫内膜异位症中的甲基化率为39％（9/23），在正常子宫内膜组织中的甲基化率为5％（1／20），两者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；hMSH2基因在子宫内膜异位症中的甲基化率为8％（2／23），在正常子宫内膜组织中的甲基化率为5％（1／20），两者比较，无明显差异（P〉0．05）。结论：hMLH1基因启动子区甲基化可能与子宫内膜异位症发病有关；hMSH2基因启动子区甲基化与子宫内膜异位症之间不存在显著联系。

简介：将个体DNA提取出来后,按一定方式进行混合,构成混合DNA样品池。这种混合DNA样品可用于病因未明的遗传性及遗传易感性疾病的研究。在研究常染色体隐性遗传性耳聋致病基因时,发现与染色体9q的D9S922和D9S301位点有相关性。此方法比通常的连锁分析法省时省力。在肿瘤相关基因或责任基因的研究、法医学的个体认定、基因突变的检测等方面均显示出实用性,值得推广

简介：生物安全研究的范畴涉及任何由生物威胁所造成的风险。随着害虫优先考虑级别的不断变化，以及国家和部门间相互协作的不断加强，对DNA分子鉴定技术的标准化提出了更迫切的要求，而DNA条形码的出现为此类问题的解决提供了很好的机遇。我们以前人对毒蛾和果蝇的研究为例，比较了DNA条形码技术与PCR-RFLP等传统方法的鉴定效果，在此基础上提出了建立一个可对不同入侵种进行快速和准确鉴定的条形码技术平台的构想。

简介：目的：拼接DNA片段并克隆。方法：用T4DNA连接酶将DNA片段以平末端随机连接,随后用限制性内切酶切割,琼脂糖电泳分离酶切产物,挑选特定片段纯化回收,与线性化的载体质粒连接,转化大肠杆菌感受态细胞。结果：通过以上步骤,成功拼接了不同DNA片段,构建了含有目的拼接片段的重组质粒。结论：该方法简便、易行、可靠,可作为拼接、克隆DNA的备选方案,在分子生物学研究和基因工程中应用。

简介：本文介绍了阳离子脂质体、聚合胺、减毒侵袭性细菌、Cochleates等可介导疫苗DNA转染的载体，并对肌肉注射、基因枪导入、皮内皮下注射及粘膜接种等可用以DNA疫苗接种的几种免疫途径作一简述。

简介：当前,一项称为“生命的条形码”计划正在欧美等国展开,其目的是实现对地球上现存的约1000万物种进行快速和准确的鉴定。DNA条形码是一种利用短的DNA序列对物种进行鉴定的技术。对DNA条形码的概念和原理进行了介绍,举例说明了其在物种分类、遗传多样性及物种鉴定研究中广泛的利用价值,阐述了当前该领域的研究现状,对未来的发展方向进行了展望。

简介：预防与控制乙型肝炎发病的乙型肝炎病毒(HBV)疫苗，是有重大的社会和经济意义。HBV的持续感染可引起慢性肝脏疾患，并逐步发展为肝硬化和肝细胞癌(HCC)。目前的乙肝重组亚单位疫苗可以使90％的接种者产生保护性抗体；但是对慢性HBV携带者，由于其机体对HBsAg蛋白产生耐受，不能产生体液和细胞免疫，因此它只能作为一种预防性的疫苗。DNA疫苗(基因疫苗)是一种新的疫苗技术，通过向体内递送编码抗原的细菌质粒，刺激产生特异的体液和细胞免疫反应。在小鼠和其他的肝炎病毒感染动物模型中，HBVDNA疫苗可以特异性地引起体液和细胞免疫，清除HBV转基因动物血循环中的HBsAg颗粒和HBVDNA。如果加入各种免疫调节细胞因子的基因，可以进一步提高HBVDNA疫苗的免疫效果，因此它不仅可作为预防性疫苗，也可作为治疗型疫苗。

简介：在真核生物细胞中,许多具有生物活性的多肽和蛋白是在其分泌过程中由前体蛋白经内切蛋白酶切割后激活形成的.弗林蛋白酶(Furin)就是这个内切蛋白酶家族重要成员之一,它可以识别剪切多种蛋白质,如生长医子、血清蛋白、基质金属蛋白酶、受体、病毒囊膜蛋白和细菌外毒素等.近年来Furin得到了迅速而广泛的研究,本文简介了它的表达与加工运输、生物学功能、与病毒侵染的关系,以及它的抑制剂.

简介：目的：构建一个牛dSl酪蛋白调控序列指导人溶菌酶（hLYZ）基因组序列的杂合基因座。方法：采用本实验室发明的连续3步缺口修复技术。将6个无痕连接的同源臂插入以pBR322为载体的骨架中，构成能进行3次连续基因抓捕的载体，利用Red同源重组系统介导的缺口修复技术，分别抓捕牛aSl酪蛋白3’端调控序列（9kb）、hLYZ基因座序列（5kb）、牛axSl酪蛋白5’端调控序列（20kb），使这3个基因片段自动无痕地连接在基因抓捕载体上，形成牛oLSl酪蛋白一hLYZ杂合基因座。结果：实验经过PCR扩增、限制性内切酶酶切验证和序列测定，验证了hLYZ的基因组序列对牛仪S1酪蛋白编码基因组序列的精确置换。结论：这种修复技术为乳腺生物反应器高效表达大载体的制备提供了可行的思路及方法。

简介：目的：为了从分子水平上了解厌氧颗粒污泥中微生物的种类和数量,研究一种高效提取环境微生物DNA的方法。方法：厌氧颗粒污泥样品经液氮速冻、沸水浴融化、溶菌酶处理和SDS裂解后,琼脂糖凝胶电泳检测所提取的DNA,以提取的总DNA为模板,进行细菌核糖体小亚基16SrDNA基因V8、V9区的PCR扩增。结果：经检测,其DNA片段约为20kb,样品D260nm/D280nm值为1.88,扩增结果理想,与OMEGA公司提供的试剂盒提取效果基本一致。结论：为薯类酒糟厌氧发酵污泥中微生物群落的分子生态学研究提供了一种简便、可靠的DNA提取方法。