简介：无

简介：无

简介：摘要目的利用腺病毒包装质粒pBHGE3与携带LASP-1 siRNA的穿梭质粒pZD55-LASP-1、pCA13-LASP-1在HEK293细胞内，包装成病毒ZD55-LASP-1和Ad-LASP-1。方法利用Effectene DNA转染试剂将质粒pBHGE3与质粒pZD55-LASP-1、pCA13-LASP-1分别感染HEK293细胞，纯化并扩增病毒。通过PCR鉴定Ad-LASP-1、ZD55-LASP-1是否包含目的基因，E1区是否缺失及有无野生型腺病毒污染。鉴定正确的病毒进行扩增，CsCl梯度离心纯化，TCID50法测病毒滴度。结果PCR鉴定证明ZD55-LASP-1未混杂野生型腺病毒,且包含目的序列LASP-1 siRNA；Ad-LASP-1 E1区缺失,且包含目的序列LASP-1 siRNA。ZD55-LASP-1滴度为4×1010 PFU/ml，Ad-LASP-1滴度为2×1010PFU/ml。Western-blot证实ZD55-LASP-1在肿瘤细胞中表达E1A，Ad-LASP-1不表达E1A。结论靶向表达LASP-1 siRNA序列的病毒ZD55-LASP-1重组成功，为肾癌的下一步基因治疗提供了基础。

简介：摘要生产获得的四氢呋喃纯度较低，需要通过精馏工艺进行提纯。本文从四氢呋喃的变压恒沸精馏工艺流程入手，指出了变压恒沸精馏工艺存在的不足及相应的优化措施，技术人员需要从产品和操作两方面入手，提升变压恒沸精馏工艺的效果，提升四氢呋喃的产量与质量，实现清洁生产的目标。

简介：摘要上颌第一恒磨牙异位萌出是由多种因素引起的上颌第一恒磨牙萌出过程中的位置异常，若未得到及时治疗，将会造成相邻的第二乳磨牙牙根吸收、牙齿早失、第一恒磨牙近中移动及严重的错畸形等不良后果。针对这些问题，中华口腔医学会儿童口腔医学专业委员会召集来自四川大学华西口腔医院、北京大学口腔医学院·口腔医院、上海交通大学医学院附属第九人民医院等16所院校及口腔医院的儿童口腔医学专家对此进行专题讨论，同时借鉴和参考国内外近年来对上颌第一恒磨牙异位萌出的研究成果及诊疗经验，制订此临床诊疗专家共识。

简介：摘要黎月恒教授认为"阳虚寒凝"为肿瘤发生的原因之一，治疗上采用温阳散寒法，同时兼顾患者不同时期不同症状，综合其他治疗方法，临床获效甚佳。通过对黎月恒教授阳虚寒凝引起肿瘤病机的理解、治则治法及运用温阳散寒法治疗肿瘤的经验进行整理，以便更好地传承和发扬黎老的临证经验与学术思想，为中医药治疗肿瘤提供新的思路。

简介：摘要目的建立一种简便可控、质量可靠的肢体挤压缺血-再灌注损伤大鼠模型，并评估其有效性及稳定性。方法通过定压、恒容标准技术建立动物模型，即采用自锁式尼龙扎带行大鼠右侧后肢近端加压捆扎阻断后肢血流，尼龙扎带宽度为5 mm，通过压力监测装置维持阻断压力在（300±20）mmHg。大鼠趾掌表现为苍白青紫、发凉，并经激光多普勒血流成像仪验证肢体血流被成功阻断，即造模成功。给予大鼠单侧后肢血流阻断4 h，然后于不同再灌注时间（0.5、2、4、8 h）后收集缺血肢体腓肠肌、肾脏、肝脏、肺组织及血清标本（n=6/组）。Masson染色观察腓肠肌组织学变化，HE染色观察肾脏、肝脏及肺组织学改变，同时检测各组大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）水平并进行组间比较。结果与对照组比较，肢体缺血4 h后大鼠腓肠肌出现明显肿胀及淤血表现，Masson染色镜下可见腓肠肌纤维肿胀、排列不规则、肌纤维间隙增宽；于再灌注后不同时间点（0.5、2、4、8 h）观察，腓肠肌损伤逐渐加重，局部肌细胞出现坏死，再灌注各组腓肠肌湿重与对照组的差异均有统计学意义（P<0.05）。对照组血清CK水平为（38.78±2.59）U/L，肢体缺血（4 h）组（621.97±98.77）U/L，肢体缺血-再灌注（0.5、2、4、8 h）组血清CK水平分别为（9 400.25±1 051.30）U/L，（6 312.27±3 056.83）U/L，（3 511.03±871.83）U/L和（5 509.55±675.13）U/L，差异有统计学意义（F=39.35，P<0.05），肢体缺血-再灌注（0.5 h）组血清CK水平最高。在肢体缺血-再灌注后大鼠肾脏、肝脏和肺组织均出现不同程度的病理和功能改变。肾脏出现肾小球大小不一，肾小管上皮细胞水肿，管腔狭窄，肾小球萎缩等变化。对照组血清BUN水平为（57.1±2.2）mg/L，肢体缺血（4 h）组（183.9±28.3）mg/L，肢体缺血-再灌注（0.5、2、4、8 h）组血清BUN水平分别为（400.6±22.8）mg/L，（396.9±20.5）mg/L，（371.8±64.4）mg/L和（644.5±108.7）mg/L，差异有统计学意义（F=83.42，P<0.05），肢体缺血-再灌注（8 h）组血清BUN水平最高。肝脏出现肝细胞水肿，汇管区小叶间动脉充血，肝血窦扩张、红细胞渗出，气球样变及小叶中央出血等改变。对照组血清ALT水平为（54.71±6.01）U/L，肢体缺血（4 h）组为（113.62±21.86）U/L，肢体缺血-再灌注（0.5、2、4、8 h）组血清ALT水平分别为（168.92±14.56）U/L，（458.36±89.27）U/L，（436.39±55.85）U/L和（703.01±43.57）U/L，差异有统计学意义（F=165.5，P<0.05），肢体缺血-再灌注（8h）组血清ALT水平最高。肺组织出现肺泡壁断裂，肺泡腔及间质内充血，气道闭塞，淋巴细胞浸润等表现。结论通过稳定压力和恒定受压肌肉容积建立的大鼠模型模拟了肢体急性挤压缺血-再灌注损伤的疾病状态，稳定性强，可重复性高，可用于肢体挤压缺血-再灌注损伤相关的后续基础研究。

简介：

简介：摘要目的探讨窝沟封闭术联合氟保护漆在预防儿童第一恒磨牙龋齿的临床效果。方法选取2018年1月至12月在广州市花都区妇幼保健院进行口腔检查的80例共189颗第一恒磨牙儿童（6～8岁）为研究对象，采用随机数字表法分为观察组40例96颗和对照组40例93颗。观察组男25例，女15例。对照组男26例，女14例。观察组采用窝沟封闭术联合0.5%多乐氟（Duraphat）进行预防治疗，对照组采用窝沟封闭术进行预防治疗。比较两组干预效果；两组均随诊2年，观察并记录两组龋齿发生率及预防治疗3个月、6个月、1年、2年后封闭剂保存情况。结果观察组龋齿发生率3.13%（3/96），低于对照组的11.82%（11/93），差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组治疗3个月后封闭剂保留占比100.00%（96/96），对照组97.85%（91/93），差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗6个月、1年和2年后观察组封闭剂保留占比分别为100.00%（96/96）、96.87%（93/96）和93.75%（90/96），高于对照组的91.40%（85/93）、86.02%（80/93）和78.49%（73/93），差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论对适龄儿童采用窝沟封闭术联合氟保护漆预防第一恒磨牙龋齿具有较好的临床效果，氟保护漆可以有效减少窝沟封闭剂的脱落，远期效果有待进一步临床观察。

简介：摘要本文报道2例年轻恒前牙复杂冠根折后原位断端再接过程，首先对龈上折裂线进行粘接固定后再行牙髓切断术，然后仅对龈上折裂线和髓腔折裂线进行粘接，最终实现儿童复杂冠根折的牙体、牙髓和牙周的保存治疗，经过1~2年随访，效果良好。

简介：摘要目的观察低蛋白饮食干预个性化细节荷载法在慢性肾功能不全高磷血症者中的应用效果。方法选择2018年1～10月收治于梧州市人工医院的慢性肾功能不全高磷血症患者110例为研究样本，将入住于单号病室的55例设为对照组，将入住于双号病室的55例设为试验组。对照组接受常规低蛋白饮食干预，试验组在对照组基础上加用低蛋白饮食干预个性化细节荷载法。对两组干预后的观察指标进行比较。结果试验组慢性肾衰高磷血症患者干预后的肾功能评价指标、钙磷代谢指标显著优于对照组，健康信念评分和饮食护理满意度评分显著高于对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论对慢性肾功能不全高磷血症者采用低蛋白饮食干预个性化细节荷载法，可获得可靠的肾功能维护与钙磷代谢改善效应，可提高患者健康信念水平。

简介：摘要目的探讨恒古骨伤愈合剂（Osteoking）对兔激素性股骨头坏死细胞凋亡的影响及机制。方法选取清洁级健康日本大耳白兔24只，18月龄，体重2 000~2 500 g，采用随机数字表法将其随机分为空白对照组、模型组及恒古骨伤愈合剂组，8只/组。模型组及恒古骨伤愈合剂组采用马血清加激素的方法建立兔激素性股骨头坏死模型，造模成功后24 h，恒古骨伤愈合剂组行恒古骨伤愈合剂420 mg/kg灌胃治疗，1次/2 d，对照组和模型组予以等量的生理盐水灌胃。给药治疗4周后，评价各组兔股骨头组织细胞凋亡指数，caspase-3活性，及Bax、Bcl-2的蛋白表达量。结果与模型组比较，空白对照组和恒古骨伤愈合剂组细胞凋亡指数均较低（P均<0.05），差异均有统计学意义[（7.6±1.0）%比（58.8±3.7）%，（36.7±4.3）%比（58.8±3.7）%]。模型组caspase-3活性较空白对照组升高，差异有统计学意义（P<0.05）；恒古骨伤愈合剂组caspase-3活性较模型组降低，差异有统计学意义（P<0.05）。空白对照组Bax蛋白表达量较模型组低，差异有统计学意义[（0.26±0.05）比（0.91±0.08），P<0.05]；恒古骨伤愈合剂组Bax蛋白表达量较模型组低，差异有统计学意义[（0.55±0.06）比（0.91±0.08），P<0.05]。空白对照组Bcl-2蛋白表达量较模型组高，差异有统计学意义[（0.73±0.08）比（0.32±0.06），P<0.05]；恒古骨伤愈合剂组Bcl-2蛋白较模型组高，差异有统计学意义[（1.33±0.08）比（0.32±0.06），P<0.05]。结论恒古骨伤愈合剂可能通过抑制细胞凋亡，治疗兔激素性股骨头坏死。

简介：摘要目的探讨密闭式吸痰结合恒速小量持续气道湿化对急性呼吸窘迫综合征的影响。方法选择2016年8月至2018年8月本院收治的急性呼吸窘迫综合征患者108例，按照随机数字表法分为两组，各54例。对照组行开放式吸痰和间断气道湿化干预，观察组行密闭式吸痰结合恒速小量持续气道湿化干预。对比两组插管后24 h、72 h、120 h痰液黏稠度、痰痂形成情况及吸痰后不同时间血氧饱和度变化，并统计两组不良反应发生率。结果观察组患者插管后72 h、120 h痰液黏稠Ⅲ度及痰痂形成率分别为3.70%（2/54）、1.85%（1/54）、1.85%（1/54）、5.56%（3/54），均低于对照组的16.67%（9/54）、53.70%（29/54）、14.81%（8/54）、20.37%（11/54），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；观察组患者吸痰后1 min、3 min、5 min的血氧饱和度（85%～95%）分别为25.93%（14/54）、87.04%（47/54）、100.00%（54/54），均高于对照组的0.00%（0/54）、0.00%（0/54）、1.85%（1/54），两组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）；观察组吸痰过程、气道湿化过程的不良反应发生率均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论密闭式吸痰结合恒速小量持续气道湿化应用于急性呼吸窘迫综合征患者，可减轻痰液黏稠度，有效预防痰痂形成，提高血氧饱和度，减少不良反应，值得推广。

简介：摘要目的观察荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)溶瘤腺病毒联合多西他赛(DTX)对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞株裸鼠移植瘤的治疗作用。方法构建裸鼠前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤模型(裸鼠购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司)，随机分成4组：空白对照组(PBS组)、化疗组(DTX组，20 mg/kg)、病毒治疗组(ZD55-SATB1组，1×108 pfu)、病毒联合化疗组(ZD55-SATB1＋DTX组，5×107 pfu＋10 mg/kg)。绘制肿瘤时间-体积生长曲线。苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的生长。免疫组织化学检测肿瘤组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和CD31蛋白的表达。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡。采用方差分析(One way-ANOVA)，组间比较采用t检验。结果成功构建裸鼠LNCaP细胞移植瘤模型。病毒联合化疗组、病毒治疗组、化疗组和空白对照组移植瘤终体积分别为(616.23±101.56)、(938.59±102.98) mm3(t＝3.860，P<0.05)、(1 206.92±202.17) mm3(t＝4.522，P<0.05)和(2 254.05±188.99) mm3(t＝13.220，P<0.01)，差异均有统计学意义。HE染色结果显示，病毒联合化疗组、病毒治疗组和化疗组的肿瘤组织中均可见较多的死细胞，细胞裂解成碎片，细胞核固缩碎裂，其正常的组织结构消失，但联合组的肿瘤细胞坏死更明显。免疫组织化学法结果显示化疗组、病毒治疗组、病毒联合化疗组内Caspase-8、Caspase-3、bcl-2和CD31的相对蛋白表达量分别为2.11±0.41、1.67±0.21、0.65±0.06、0.78±0.05(t＝4.136、10.930、5.523、8.162，P<0.05)；2.39±0.33、2.61±0.51、0.56±0.06、0.68±0.04(t＝5.594、4.119、3.242、6.010，P<0.05)；3.42±0.37、3.61±0.23、0.44±0.02、0.50±0.04，联合组与单用药物或病毒组比较，Caspase-8、Caspase-3蛋白表达量增多，bcl-2蛋白表达量降低，差异有统计学意义。联合组移植瘤组织中CD31蛋白的表达量与单用药物或病毒组比较显著降低，说明联合组能有效促进促凋亡蛋白的表达，降低抑凋亡蛋白的表达，且在一定程度上抑制肿瘤组织血管的生成。TUNEL结果显示：化疗组、病毒治疗组、病毒联合化疗组的肿瘤组织切片荧光下均可见较多红色信号，提示细胞凋亡，各组凋亡率分别为(26.17±2.97)%(t＝9.557，P<0.01)、(35.68±3.46)%(t＝3.931，P<0.05)、(44.07±1.30)%，联合组内凋亡细胞更为明显，差异有统计学意义。结论溶瘤腺病毒和多西他赛均可抑制前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤的生长，且联合效果优于单一用药，其可能的机制包括抑制肿瘤细胞生长、诱导凋亡、抑制血管生成。

简介：摘要目的探讨恒古骨伤愈合剂对股骨颈骨折内固定术后患者骨折愈合及其骨转换标志物和骨密度的影响。方法回顾性分析2017年1月－2020年4月潍坊市人民医院120例股骨颈骨折内固定术后患者，按治疗方法分为2组，每组60例。对照组给予患肢牵引、旋转闭合复位治疗，若闭合复位失败，则行开放解剖复位治疗。治疗组在对照组基础上服用恒古骨伤愈合剂。2组均连续观察3个月，随访9个月。随访结束后，行X线或CT检测评价骨痂生长及骨折愈合情况，采用双能X射线骨密度仪检测腰椎骨密度；术后3、6个月，采用双抗体夹心ELISA法检测血清I型前胶原氨基末端肽（PINP）、竞争ELISA法检测血清Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列（β-CTX）水平。结果治疗组骨折愈合时间为（13.06±2.35）周、对照组为（17.75±3.56）周，2组比较差异有统计学意义（t=8.52，P<0.01）。随访9个月，治疗组骨折愈合率为93.3%（56/60）、骨折不愈合率为1.7%（1/60）、骨折畸形愈合率为5.0%（3/60），对照组分别为75.0%（45/60）、5.0%（3/60）、20.0%（12/60），2组骨折愈合率及畸形愈合率比较，差异有统计学意义（χ2值分别为7.57、6.17，P值分别0.006、0.013）。治疗组随访9个月骨密度［（0.76±0.12）g/cm²比（0.71±0.06）g/cm²，t=2.89］较同组术前升高（P<0.01）。治疗组术后3、6个月血清β-CTX水平［第3个月（186.76±26.23）ng/L比（286.05±23.18）ng/L，t=21.97；第6个月（252.34±21.58）ng/L比（302.52±16.87）ng/L，t=14.19］低于对照组（P<0.01）、PINP水平［第3个月（37.52±7.59）μg/L比（27.59±5.36）μg/L，t=3.56；第6个月（30.54±5.63）μg/L比（25.63±4.98）μg/L，t=2.36］高于对照组（P<0.01或P<0.05）。结论恒古骨伤愈合剂可有效调控股骨颈骨折内固定术后患者的骨代谢平衡，缩短骨折愈合时间，促进骨折愈合。

简介：摘要目的观察荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-SATB1)联合多西他赛(DTX)在体外对激素敏感前列腺癌LNcap细胞的影响，并探讨作用机制。方法将LNcap细胞(购自上海中国科学院细胞库)分为5组进行干预，分别为磷酸盐缓冲液组(PBS)、多西他赛化疗药物组(DTX为2 μg/L)、病毒对照组[ZD55-EGFP为10感染复数(MOI)]、病毒治疗组(ZD55-SATB1为10 MOI)、病毒联合化疗药物组(ZD55-SATB1＋DTX为5 MOI＋1 μg/L)。Transwell检测细胞迁移和侵袭能力变化；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测SATB1、腺病毒早期区1A基因(E1A)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8与bcl-2的表达。采用t检验。结果Transwell迁移结果显示，ZD55-SATB1联合DTX组干预LNcap细胞24 h后的细胞穿膜数为(28.20±3.19)个，与ZD55-SATB1组[(39.60±4.98)个](t＝4.309，P<0.01)、ZD55-EGFP组[(52.60±6.02)个](t＝8.001，P<0.01)、DTX组[(65.50±5.12)个](t＝13.710，P<0.01)、PBS组为(106.60±5.18)个(t＝28.820，P<0.01)比较，病毒与化疗药物治疗组穿膜细胞数显著降低，细胞迁移能力显著降低，差异有统计学意义；Transwell侵袭实验结果：联合组穿透Matrigel胶进入小室下层的细胞数为(23.60±3.58)个，与ZD55-SATB1组[(32.40±5.08)个](t＝3.088，P<0.05)、ZD55-EGFP组[(39.60±2.70)个](t＝7.610，P<0.01)、DTX组[(44.60±4.62)个](t＝7.815，P<0.01)、PBS组为(98.20±4.32)个(t＝28.820，P<0.01)比较，细胞侵袭能力明显降低，差异有统计学意义。TUNEL结果显示，各治疗组细胞凋亡率均高于PBS对照组[(5.92±0.90)%]，但联合组[(34.48±4.25)%]与ZD55-SATB1组[(28.12±2.50)%](t＝2.582，P<0.05)、ZD55-EGFP组[(23.30±3.03)%](t＝4.752，P<0.01)、DTX组[(22.35±2.44)%](t＝4.956，P<0.01)比较，细胞凋亡更加明显，差异有统计学意义。Western blot结果显示，联合组内SATB1蛋白表达下调，E-cadherin表达上调，Vimentin和MMP-2表达下调，Caspase-8和Caspase-3表达上调，bcl-2表达下调更为显著。E1A基因在联合组内正常表达，说明联合使用DTX不影响腺病毒复制增殖。结论ZD55-SATB1联合DTX在体外可以有效抑制LNcap细胞的迁移和侵袭能力，并诱导肿瘤细胞凋亡，效果优于单独使用ZD55-SATB1或DTX，其机制可能是通过上调E-cadherin同时下调Vimentin和MMP-2的表达抑制迁移侵袭能力，抑制了上皮-间充质转化(EMT)进程，并通过上调Caspase-8和Caspase-3，下调bcl-2诱导肿瘤凋亡。

简介：摘要目的利用锥形束CT（CBCT）分析云南地区人群下颌第一前磨牙、第二前磨牙和第一恒磨牙根管解剖形态，为临床根管治疗提供理论依据和参考。方法根据年龄（20 ~ 29岁、30 ~ 39岁、40 ~ 49岁、50 ~ 59岁）分层抽取2017年1月至2018年1月在昆明医科大学附属口腔医院放射科进行CBCT检查的患者的数据资料各100例。400例患者中有324例CBCT数据资料符合标准，其中男166例、女158例，年龄20 ~ 29岁82例、30 ~ 39岁82例、40 ~ 49岁82例、50 ~ 59岁78例。统计分析下颌第一前磨牙、第二前磨牙和第一恒磨牙的根管数目、根管长度和根管弯曲度，并对不同年龄段根管长度、下颌第一磨牙牙尖到根分叉距离及根尖孔到下颌神经管距离数据进行单因素方差分析，对不同性别下颌第一磨牙牙尖到根分叉距离及根尖孔到下颌神经管距离数据进行独立样本t检验。结果通过对324例患者CBCT影像资料的分析得出，下颌前磨牙基本为单根管（647/648颗），仅见1例右下第一前磨牙双根管。下颌前磨牙弯曲度以一级弯曲（5° ~ 10°）和二级弯曲（10° ~ 25°）为主，前磨牙根管长度大多处于正常范围（15 ~ 25 mm），下颌第一恒磨牙弯曲度近远中根均以二级弯曲（10° ~ 25°）为主，下颌第一恒磨牙牙尖到根分叉的距离随年龄增长变短（F左侧=11.16，P左侧<0.001；F右侧=11.51，P右侧<0.001），男女性别差异无统计学意义（t左侧=1.31，P左侧=0.19；t右侧=0.51，P右侧=0.61）；下颌第一恒磨牙根尖孔到下颌神经管的距离随年龄增长变长（F左侧=7.03，P左侧<0.001；F右侧=12.25，P右侧<0.001），男女性别差异无统计学意义（t左侧=-0.64，P左侧=0.52；t右侧=-0.11，P右侧=0.91）。结论本研究中云南地区人群下颌前磨牙根管解剖形态相对简单；下颌第一恒磨牙根管解剖形态复杂，云南地区人群下颌前磨牙、第一恒磨牙根管解剖系统与其他地区相比有所差异，但增龄性变化无区别，CBCT可为临床根管治疗提供依据。

简介：摘要目的观察DD3启动子、E1B55KD缺失双调控并荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)的条件增殖腺病毒DD3-ZD55-SATB1对激素依赖性前列腺癌LNcap细胞裸鼠移植瘤的治疗作用。方法构建BALB/c-nu雄性裸鼠(北京维通利华公司)前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤模型，当肿瘤体积为100 mm3系统随机分成3组：空白对照组(PBS组)、病毒对照组(DD3-ZD55组)、病毒治疗组(DD3-ZD55-SATB1组)。测量肿瘤体积，绘制肿瘤时间-体积生长曲线。苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的生长。免疫组织化学检测肿瘤组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白的表达。原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测肿瘤组织内细胞凋亡。采用单因素方差分析进行多组件比较。结果成功构建裸鼠LNcap细胞移植瘤模型。病毒治疗组、病毒对照组和空白对照组移植瘤终体积分别为(844.48±91.04)、(1 098.93±60.45)、(1 679.83±125.56) mm3，治疗组肿瘤体积显著小于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示，治疗组和病毒对照组的肿瘤组织中均可见较多的死细胞，细胞裂解成碎片，细胞核固缩碎裂，其正常的组织结构消失，但治疗组更加明显。免疫组织化学法显示，治疗组与对照组比较，Caspase-3、Caspase-8蛋白表达量增多，bcl-2蛋白表达量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。TUNEL结果显示，病毒治疗组的肿瘤组织切片荧光下均可见较多红色信号，提示细胞凋亡，与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论DD3-ZD55-SATB1可以有效抑制激素依赖性前列腺癌LNcap细胞裸鼠移植瘤的生长，并通过Caspase-8介导的内源性凋亡途径诱导肿瘤细胞凋亡。

简介：摘要目的观察DD3启动子、E1B55KD缺失双调控并荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)的条件增殖腺病毒DD3-ZD55-SATB1联合多西他赛(Docetaxel，DTX)对激素敏感性前列腺癌LNcap细胞的杀伤效果并探讨作用机制。方法LNcap细胞来源于上海中科院细胞库。将LNcap细胞分为4组进行干预，分别为联合组(DD3-ZD55-SATB1+DTX，5 MOI+1 ng/ml)、病毒治疗组(DD3-ZD55-SATB1，10 MOI)、多西他赛组(DTX，2 ng/ml)、磷酸盐缓液组(PBS)。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖；Transwell检测细胞迁移和侵袭；Hoechst-33258检测细胞凋亡；蛋白质印迹法(Western blot)检测SATB1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Caspase-3与Caspase-8的表达。采用单因素方差分析进行多组件比较。结果CCK-8结果，联合组吸光度值为1.95±0.12、DD3-ZD55-SATB1组为2.33±0.03(t＝5.43，P<0.01)、DTX组为2.68±0.09(t＝8.42，P<0.01)，PBS组为3.49±0.04(t＝21.71，P<0.01)，联合组的吸光度值显著低于单一治疗组。Transwell结果：联合组穿透小室膜的细胞数为49.25±6.24、DD3-ZD55-SATB1组为79.25±7.41(t＝6.19，P<0.05)、DTX组为80.75±4.57(t＝8.15，P<0.05)，PBS组为118.75±5.38(t＝16.88，P<0.01)，联合组小室底膜细胞数较单一治疗组明显减小。Hoechst-33258显示：联合组凋亡率分别为(55.54±5.43)%，DD3-ZD55-SATB1组为(41.23±3.28)%(t＝5.29，P<0.01)，DTX组为(35.15±2.47)%(t＝8.19，P<0.01)，PBS组为(9.62±2.69)%(t＝17.49，P<0.01)，联合组与病毒或化疗药物单一治疗组比较，细胞凋亡更加明显。Western blot结果，以PBS组内的蛋白表达为标准计算为1.00，联合组、DD3-ZD55-SATB1组和DTX组内，SATB1相对表达量分别为0.48±0.04、0.63±0.05和0.79±0.04，联合组内SATB1表达较单一治疗组下调更为显著，差异有统计学意义(t＝4.06、10.38，P<0.01)。E-cadherin、Vimentin和MMP-2蛋白在联合组、DD3-ZD55-SATB1组和DTX组内相对表达量分别为2.25±0.14、0.48±0.07、0.45±0.04，1.83±0.12、0.69±0.07、0.65±0.05和1.60±0.06、0.79±0.04、0.76±0.05。与PBS组比较，治疗组内E-cadherin表达上调，Vimentin和MMP-2的表达下调，联合组内E-cadherin的上调与Vimentin和MMP-2的下调更为显著，与单一治疗组比较，差异有统计学意义(t＝3.94、3.79、5.48，P<0.05；t＝7.43、6.99、8.88，P<0.01)。凋亡相关蛋白Caspase-8和Caspase-3的相对表达量分别为2.38±0.14、2.44±0.16，1.84±0.07、1.90±0.05和1.70±0.13、1.67±0.07。各治疗组内Caspase-8和Caspase-3的表达较PBS组明显上调。联合组内Caspase-3和Caspase-8的上调更为显著，与单一治疗组比较，差异有统计学意义(t＝5.89、5.75，P<0.01；t＝6.26、7.91，P<0.01)。结论DD3-ZD55-SATB1联合DTX在体外可有效抑制LNcap细胞的增殖、迁移和侵袭，并诱导肿瘤细胞凋亡，且优于单独使用DD3-ZD55-SATB1或DTX，其作用机制为抑制上皮-间充质转化进程和上调Caspase-8和Caspase-3诱导肿瘤凋亡有关。