简介：目的探讨RhoA/ROCK通路特异性阻断剂Y-27632对小鼠骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs）增殖及成骨分化的影响。方法自小鼠股骨、胫骨骨髓腔分离培养小鼠骨髓单个核细胞,流式细胞仪细胞表面标记检测及细胞成骨、成脂、成软骨三系分化鉴定小鼠骨髓单个核细胞。将第3代小鼠骨髓间充质干细胞随机分为2组,单纯成骨诱导液对照组、Y-27632干预组。分别于细胞培养后1d、2d、3d、4d收集细胞,噻唑蓝（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide,MTT）比色法观察BMSCs增殖能力;成骨诱导后7d、14d收集细胞,可见光比色法检测碱性磷酸酶（ALP）变化;成骨诱导后24h收集细胞,westernblot法检测Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1（Rhoassociatedcoiled-coil-containingproteinkinases1,ROCK1）的表达。结果流式细胞术细胞表面标志检测及成骨、成脂、成软骨三系分化鉴定均证实我们所获细胞为BMSCs。与对照组相比,Y-27632能促进BMSCs增殖,差异具有统计学意义（P〈0.05）;Y-27632能降低ALP表达,差异具有统计学意义（P〈0.05）;Y-27632能明显阻断ROCK1的表达,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论Y-27632阻断RhoA/ROCK信号通路可以促进BMSCs增殖,抑制BMSCs成骨分化。

简介：目的：观察强直性脊柱炎（AS）患者外周血白介素（IL）-17A、IL-23水平及Th17/Treg比例，探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）与Th17/Treg体外相互作用，为研究AS发生机制提供理论依据。方法研究对象为48例活动期AS患者[实验组，男43例、女5例，年龄（26.2±5.2）岁，均为HLA-B27^＋]和49例健康志愿者[对照组，男44例、女5例，年龄（25.9±4.8）岁，HLA-B27^＋43例、HLA-B27-6例]。ELISA检测外周血清中IL-17A及IL-23水平，流式细胞术检测外周血单个核细胞（PBMCs）中的CCR4^＋CCR6^＋Th细胞（Th17）及Treg细胞数量。分离健康志愿者的PBMCs，将PBMCs分别与AS患者及健康志愿者的BMSCs体外共培养72h，收集PBMCs行流式细胞术检测，评价BMSCs与Th17/Treg体外的相互作用。结果实验组与对照组血清IL-17A及IL-23的表达水平相近（P〉0.05）；实验组Th17细胞明显高于对照组（P〈0.05），而Treg细胞明显低于对照组（P〈0.05）。与健康志愿者BMSCs共培养72h后的PBMCs中Th17较培养前轻度下降，Treg轻度上升，差异无统计学意义（P〉0.05）；而与AS患者BMSCs共培养72h的PBMCs中Th17较培养前及对照组均明显上升，Treg均明显下降，差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论AS患者PBMCs中Th17/Treg细胞亚群失衡。免疫抑制能力明显下降的BMSCs极可能通过诱导Th17/Treg失衡而在AS免疫发生机制中发挥重要作用。

简介：目的探索唑来膦酸联合人羊膜间充质干细胞移植对去卵巢骨质疏松协同效应研究。方法选择雌性未孕的Wistar大鼠45只,完全随机分组分为假手术组、模型组及实验组,每组各15只。术后第7天,行唑来膦酸灌胃＋尾静脉注射AMMSCs液（假手术组除外）,连续干预13周,于末次干预后24h,处死大鼠并采集标本。每周测定1次各组大鼠的体质量;双能X线吸收骨密度仪分别测定左侧股骨中点、远端和近端骨密度;用原子吸收法测定其骨钙含量;干预13周后ELISA法检测血清25-羟基维生素D（25-HVD）、I型胶原C端肽（CTX-I）、骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）的表达变化;检测各组大鼠生物力学性能的变化;RT-PCR技术检测椎骨中转化生长因子β1（TGF-β1）的基因表达。结果假手术组大鼠体重逐渐增加,符合动物自然生长规律,模型组于造模后两个月开始,体重却明显高于假手术组,实验组体重渐增,与假手术组相近。与假手术组比较模型组的骨密度和骨钙含量均降低,与模型组比较,实验组的骨密度和骨钙含量含量均升高。与假手术组比较,模型组血清25-HVD、CTX-I、BAP、TRAP5b的表达显著降低,与模型组比较,实验组显著升高。生物法力学检测显示,假手术组的极限载荷、极限应力和弹性模量比模型组有显著增高（P〈0.05）,实验组的极限载荷和弹性模量比假手术组有显著增高（P〈0.05）。与假手术组、模型组比较,实验组TGF-β1mRNA的表达明显上调（P〈0.05）。结论唑来膦酸协同人羊膜间充质干细胞移植具有较好改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用。

简介：目的观察富血小板血浆（PRP)凝胶及腺病毒介导的骨形态发生蛋白2(BMP-2)基因转染对兔骨髓间充质干细胞（BMSCs)体外成软骨分化的影响。方法取新西兰大白兔骨髓培养BMSCs，抽取静脉血制备PRP,以Ad-GFP-hBMP-2(BMP-2-BMSCs组）及Ad-GFP(对照组）转染的BMSCs分别与PRP凝胶复合，继续培养。用扫描电镜、MTT检测PRP凝胶的生物相容性，RT-PCR检测各组的I型胶原、n型胶原、X型胶原、蛋白聚糖、SQX-9表达。结果扫描电镜及MTT检测证实PRP凝胶具有良好的生物相容性。RT-PCR分析表明，单层培养的BMP-2-BMSCs组的n型胶原、蛋白聚糖和S0X-9的表达水平均高于对照组〇P<0.05)，但I型胶原表达水平较对照组明显下降(尸<0.05)，同时X型胶原表达水平与对照组相比差异无统计学意义〇P>0.05);与PRP复合后，BMP-2-BMSCs组的n型胶原、蛋白聚糖和SQX-9表达水平较对照组升高（P<0.05)，而I型胶原和X型胶原表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染BMP-2的BMSCs在PRP凝胶中生长良好，BMP-2基因转染能促进BMSCs的体外成软骨分化。