简介:目的:应用多克隆抗体技术研制一种检测动物食品中恩诺沙星残留直接竞争酶联免疫检测试剂盒。方法:利用直接竞争ELISA法检测人为添加到动物食品中恩诺沙星的含量,与高效液相色谱的检测结果比较,并测定试剂盒的各项指标。结果:恩诺沙星质量浓度0.1~8.1ng/mL,标准曲线的线性回归方程y=-0.3769x+0.7899(R2=0.9924),方法的检测灵敏度IC50=0.55ng/mL,IC50=0.11ng/mL;板内平均变异系数为3.73%,板间平均变异系数为7.42%;猪肝、猪肉、鸡肉、鱼、虾、猪血清、牛奶、蜂蜜组织样品中ENR最低检测限分别为3.24.3.33,6.08,0.89,1-34,0.64,0.73,0.58g/kg;添加25.0-200g/kg恩诺沙星时,回收率80.9%~100%。采用ELISA和HPLC两种检测方法的相关性大于95%。结论:本文研制的试剂盒可用于检测动物食品中恩诺沙星的残留。
简介:以海参为原料,研究海参蛋白肽的抗氧化性以及对H2O2诱导RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护效果和作用机制。以清除羟自由基(·OH)能力、Fe2+螯合能力和Fe3+还原能力为指标,评价海参蛋白肽的体外抗氧化活性。以H2O2刺激RAW264.7巨噬细胞建立氧化损伤细胞模型,采用2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针法测定细胞活性氧(ROS)水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力,实时荧光定量PCR测定细胞血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA表达水平。结果表明,海参蛋白肽能够清除·OH,具有Fe2+螯合能力和Fe3+还原能力,海参蛋白肽的这种体外抗氧化能力呈现浓度依赖效应。海参蛋白肽显著降低氧化损伤RAW264.7巨噬细胞ROS水平和提高氧化损伤细胞活力(P〈0.05)。而且,海参蛋白肽显著提高巨噬细胞内HO-1mRNA表达(P〈0.05),HO-1抑制剂锌原卟啉IX(ZnPPIX)部分逆转海参蛋白肽对氧化损伤巨噬细胞活力的促进作用。这些结果说明,海参蛋白肽通过上调RAW264.7巨噬细胞HO-1mRNA表达水平,发挥对巨噬细胞氧化损伤的保护作用。