简介:摘要目的探讨自然杀伤T(natural killer T,NKT)样细胞在不明原因反复自然流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)中的价值。方法选取2015年1月至2018年5月陕西省人民医院收治120例女性作为本次研究对象,将其分为三组:URSA组,对照A组(正常妊娠女性)和对照B组(正常未孕女性),每组40例。利用流式细胞技术检测CD3+T淋巴细胞和NKT样细胞亚群(CD3+CD16+CD56+、CD3+CD16+CD56-)的表达,采用酶联免疫分析法(enzyme linked immunosorbant assay,ELISA)检测血清γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ) 、白细胞介素(interleukin,IL) -4、三种孕激素,β-人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin,β-HCG)、孕酮(progesterone,P)、雌二醇(estradiol,E2)的水平。结果URSA组、对照A组和对照B组的CD3+T淋巴细胞和CD3+CD16+CD56-NKT样细胞亚型差异无有统计学意义(P>0.05)。对三组的CD3+CD16+CD56+NKT样细胞亚型表达进行比较,结果显示对照A组和对照B组的CD3+CD16+CD56+NKT样细胞亚型表达明显高于URSA组[A组:(4.02±1.54)%,B组:(1.92±1.02)%,URSA组:(6.45±2.09)%],差异具有统计学意义(F=18.596,P<0.05)。URSA组的IFN-γ表达水平明显高于对照A组[(110.27±50.12)ng/L比(69.38±31.25)ng/L,t= 4.380,P< 0.05];URSA组的IL-4表达水平明显低于对照A组[(21.34±10.02)ng/L比(40.97±19.85)ng/L,t= 5.583,P< 0.05];URSA组的Th1/Th2比值明显高于对照A组[(6.84±2.49)比(2.34±1.74),t= 9.370,P< 0.05]。同时,URSA组的血清β-HCG、P、E2的表达水平均低于对照A组,差异均具有统计学意义(t值分别为45.778、11.992和21.922,P值均<0.05)。结论NKT样细胞的表达在URSA中起着重要的作用,为临床上URSA患者的诊断和治疗提供了依据。
简介:摘要目的CXC趋化因子受体6(CXCR6)介导的自然杀伤T(NKT)细胞激活在急性肾损伤小鼠肾纤维化中的作用。方法雄性野生型C57BL/6小鼠和CXCR6基因敲除型C57BL/6小鼠各18只,8~10周龄,体重20~30 g,采用随机数字表法分为6组(n=6):野生型小鼠对照组(WT-CON组)、CXCR6基因敲除型小鼠对照组(CXCR6-/--CON组)、野生型小鼠急性肾损伤组(WT-AKI组)、CXCR6基因敲除型小鼠急性肾损伤组(CXCR6-/--AKI组)、野生型小鼠急性肾损伤+NKT细胞过继转移组(WT-AKI-NKT组)和CXCR6基因敲除型小鼠急性肾损伤+NKT细胞过继转移组(CXCR6-/--AKI-NKT组)。腹腔注射叶酸250 mg/kg制备急性肾损伤小鼠肾纤维化模型。WT-AKI-NKT组和CXCR6-/--AKI-NKT组分别于注射叶酸后第4和9天时尾静脉注射NKT细胞悬液250 μl(1×106个)。注射叶酸后第14天时,采取眼眶血标本,检测血清BUN和Cr浓度。处死小鼠取肾组织,采用天狼星红染色观察肾纤维化面积,采用HE染色观察肾损伤情况,并行肾损伤评分,采用流式细胞术测定CD1d Tetramer阳性(CD1d Tetramer+)细胞比例,采用免疫荧光双染法行CD206和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)双阳性(CD206+-α-SMA+)细胞计数,采用RT-PCR法检测IL-4和IL-13的mRNA表达水平。结果与WT-CON组比较,WT-AKI组和WT-AKI-NKT组血清BUN、Cr浓度和肾损伤评分升高,肾纤维化面积增加,肾组织CD1d Tetramer+百分比和CD206+-α-SMA+细胞计数升高,IL-4和IL-13的mRNA表达上调(P<0.05);与WT-AKI组比较,WT-AKI-NKT组血清BUN、Cr浓度和肾损伤评分升高,肾纤维化面积增加,肾组织CD1d Tetramer+细胞百分比和CD206+-α-SMA+细胞计数升高,IL-4和IL-13的mRNA表达上调,CXCR6-/--AKI组血清BUN、Cr浓度和肾损伤评分降低,肾纤维化面积减少,肾组织CD1d Tetramer+细胞百分比和CD206+-α-SMA+细胞计数降低,IL-4和IL-13的mRNA表达下调(P<0.05);与CXCR6-/--CON组比较,CXCR6-/--AKI组和CXCR6-/--AKI-NKT组血清BUN、Cr浓度和肾损伤评分升高,肾纤维化面积增加(P<0.05);与CXCR6-/--AKI组比较,CXCR6-/--AKI-NKT组血清BUN、Cr浓度和肾损伤评分升高,肾纤维化面积增加,肾组织CD1d Tetramer+细胞百分比和CD206+-α-SMA+细胞计数升高,IL-4和IL-13的mRNA表达上调(P<0.05)。结论CXCR6介导的NKT细胞激活参与了急性肾损伤小鼠肾纤维化的过程,其机制可能与促进Th2细胞因子介导的M2巨噬细胞-肌成纤维细胞转化有关。
简介:摘要母细胞性浆细胞样树突细胞瘤(BPDCN)是一种非常罕见的血液系统恶性肿瘤,全世界报道儿童病例不足百例。BPDCN临床进展呈高度侵袭性,极易累及骨髓,复发率高,中位生存期不足2年。BPDCN尚无标准治疗方案,多采用化疗联合造血干细胞移植的综合治疗方案。为了提高对BPDCN的认识,本文对BPDCN的临床表现、诊断和治疗进展、预后以及儿童病例特点进行综述。
简介:组织学特殊染色技术及免疫组织化学技术已广泛应用于基础医学和临床医学的科研工作中.本快速染色法即用组织学醛品红染色法和免疫组织化学SP法在同一张切片上对胰岛B细胞和A细胞进行了双重染色,取得较好的效果,现作简单介绍.取大鼠胰腺,Bouin液固定,石蜡包埋,切5μm厚切片.双染步骤如下:第一步,胰岛B细胞的醛品红染色:切片脱蜡到水;入0.25%浓硫酸和0.25%高锰酸钾等量混和液中3min;蒸馏水洗后入5%草酸2min;蒸馏水洗;再经70%酒精后入醛品红染液15min;70%酒精分色后,蒸馏水洗.第二步,胰岛A细胞的免疫组化染色:将经醛品红染色后的切片,入3%甲醇双氧水室温孵育15min;蒸馏水洗后枸橼酸缓冲液(0.01M,pH6.0)(电炉加热煮沸92℃~98℃)进行抗原修复10min;PBS浸泡5min后,用正常羊血清室温封闭30min;弃去多余羊血清,滴加一抗(抗胰高血糖素抗体,1∶1500),37℃,孵育2hr;PBS室温洗10min后,滴加生物素标记的二抗,37℃,孵育40min;PBS室温洗10min后,滴加辣根酶标记的链霉卵白素工作液,37℃,孵育40min;PBS室温洗10min,DAB显色.结果及讨论:此染色方法在同一张切片上所观察到的胰岛B细胞呈蓝紫色,而胰岛A细胞呈棕黄色,两者颜色对比清晰.细胞核不着色.本方法可在一个工作日内完成,即提高了工作效率,又减少了免疫组织化学多重染色中步骤多、时间长,易受外界因素影响的限制,进而降低了非特异性染色.因此,该方法在科研工作中具有一定的应用价值.
简介:摘要目的提高对母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)的诊断及鉴别诊断水平。方法分析广西医科大学第一附属医院2020年6月收治的1例BPDCN患者的临床资料,总结其临床表现及实验室检查的特点,并复习相关文献。结果本例患者有皮肤受累,肿瘤细胞有大伪足,高表达CD123,且CD4、CD56阳性,cCD3、MPO、cCD79a、CD19阴性,符合BPDCN表现。结论BPDCN的临床表现及细胞形态缺少特异性,主要借助免疫表型进行诊断及鉴别诊断。
简介:摘要目的探讨H22全细胞性抗原致敏DC前后DC所分泌的IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α的变化情况,进而揭示H22全细胞性抗原激活肿瘤浸润淋巴细胞的机制。方法从小鼠骨髓细胞中分离出DC及其前体,再联用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)进行体外培养,在DC培养过程中加入小鼠肝癌细胞(H22细胞)全细胞性抗原以致敏DC,测定致敏前后DC细胞因子IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α的分泌。结果DC致敏前上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α的浓度分别为19.39±0.98pg/ml、11.19±1.18pg/ml、1.03±0.19pg/ml、2.02±0.33pg/ml;DC致敏后上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度分别为80.39±1.33pg/ml、95.27±6.52pg/ml、29.59±3.15pg/ml、75.12±7.07pg/ml;DC致敏前后,上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α的浓度变化有统计学意义(P<0.01)。结论H22细胞致敏DC后,DC分泌IL-12、IL-2、IFN-γ、TNF-α增加,增加的分泌因子可能与H22细胞致敏后的DC激活肿瘤浸润淋巴细胞相关。