简介：基因枪和农杆菌介导的遗传转化是目前常用的两种单子叶植物遗传转化方法。载体的发展和改良是提高植物遗传转化效率的重要基础，RNA干扰载体和过表达载体是目前通过遗传转化研究植物基因功能的主要工具。Gateway克隆技术是一种基于lambda噬菌体特异位点重组特性的通用克隆技术，该技术可以将大批目的基因方便、快捷地连接到受体载体上。本文利用Gateway技术结合传统酶切、连接方法，构建了适用于单子叶植物基因枪和农杆菌转化的RNA干扰Gateway载体pAHC．PSK—RNAi、pClean—G185．RNAi和过表达Gateway载体pAHC．PSK—OE和pClean—G185一OE，为利用基因枪和农杆菌介导的遗传转化，在小麦和水稻等单子叶植物中进行规模化基因功能研究奠定了基础。

简介：目的：获得抑制效果好的泛素C端水解酶LI（UCH—L1）基因小干扰RNA（siRNA）干扰载体。方法：根据Gen—Bank中大鼠UCH—L1基因序列设计并合成4对siRNA寡核苷酸序列，将4对寡榱苷酸序列退、k成双链后分别插入siRNA表达载体pcDNA6．2-GW／EmGFP—miR中构建4个siRNA表达质粒，测序鉴定后将4个siRNA表达磺牝分别转染HEK293细胞，利用Western印迹和qPCR方法检测干扰效果；将干扰效果最好的质粒包装成腺病毒，感染大汛血管平滑肌细胞（VSMC），并采用TNF-a干预诱导UCH—Ll表达升高，Western印迹验证干扰效果。结果：测序分析证实4对siRNA寡核苷酸序列分别插入siRNA表达载体pcDNA6．2-GW／EmGFP—miR；qPCR检测与Western印迹均表明第3号siRNA表达载沐对UCH—Ll表达的抑制程度最高，将其包装成腺病毒并转染VSMC能显著抑制TNFd湾导的U（：H—I。l表达升高。结论：构建并筛选出干扰效果好的UCH—LlsiRNA干扰载体。

简介：目的：构建能介导结缔组织生长因子（CTGF）基因RNA干扰的复制缺陷型腺病毒表达载体。方法：以大鼠CTGF基因为靶序列，设计并合成含编码短发夹RNA序列的寡核苷酸，构建腺病毒穿梭质粒P-shuttle-CTGF，酶切及测序分析正确后，与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染AD-293细胞，进行病毒包装，得到腺病毒载体Ad．H1-CTGF，用该载体感染HSC-T6细胞，观察其对CTGF基因表达抑制的效果。结果：构建的腺病毒穿梭质粒p-shuttle-CTGF经酶切、测序分析证实正确；包装的病毒载体滴度为4×1010PFU／mL，感染HSC-T6细胞后，Western印迹证实CTGF表达显著减少。结论：构建的腺病毒载体Ad．H1-CTGF可有效抑制HSC-T6中CTGF的表达，为抗纤维化研究提供了有力的工具。