简介:大量的实验和临床资料表明,脐带血干细胞移植可成功的用于造血干细胞重建,本文从3000份脐带血的采集、分离、浓缩、低温保存、融化和各种测定等方面的经验,阐述如何在我国建立符合cGMP要求的高质量脐带血造血干细胞库,采用密闭式收集的脐带血和羟乙基淀粉(HES)混合,浓缩有核白细胞,经过微生物及组织配型(HLA)检测后,以液氮深低温保存供临床应用,贮存脐带血平均有核细胞(NC)总数为(1.2±0.6)×10^9,CD34^+细胞为(3.0±3.7)×10^6,CFU-GM为(1.1±0.7)×10^6,CFU-GEMM为(1.1±1.2)×10^6,回收率分别为91%,88%,85%和82%,红细胞和血红蛋白的回收率平均为(39±9)%和(40±8)%,平均同存体积为(35.1±7.1)ml,从脐带血收集到分离的平均时间为145小时,贮存前的脐带血活细胞比率大于95%,冻融后的活细胞比率大于92%,单个核细胞,CD34阳性细胞和CFU-GM的回收率分别为96%,90%,和91%。所收集脐带血中,未发现有人免疫缺陷病毒抗体(HIVAb)阳性,梅毒阳性率为0.1%,乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性率为0.8%,乙型肝炎核心抗体(HBcAb)阳性率为3.2%,丙型肝炎抗体(HCVAb)阳性率为0.2%,母血巨细胞病毒(CMV)免疫学检测阳性率为87.1%,细菌污染率为1.2%,异常血红蛋白为0.1%,所贮存脐带血具有3个以上HLA位点和待查病人的相合机率为100%,6个HLA位点完全相筌地的机率为5%,若病人所需最低NC为2.7×10^7/kg,则所存脐带血中有近50%可供体重为50公斤左右病人应用。以上资料表明:(1)在中国建立一座能保存2万份以上规模的脐带血库是必要的,也是可行的,(2)我们目前所采用的方法和程序能保证高质量而且资料齐全的脐带血供临床应用。(3)脐带血体积和单个核细胞数和造血干/祖细胞含量呈正相关,仅收集体积大于60ml以及细胞数大于8×10^8的脐带血。
简介:摘要目的比较DX保存液与甘油保存液对人角膜基质透镜的保存效果。方法收集2019年2—5月于山东第一医科大学附属青岛眼科医院在飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术中取出的中高度近视患者30例60眼的完整角膜基质透镜标本,采用随机数表法将标本分为正常对照组、DX保存液保存1 d组、DX保存液保存1周组、甘油保存1 d组、甘油保存1周组和甘油保存2周组,每组10个标本。采用锥虫蓝染色法检测不同保存方法角膜基质透镜细胞死亡数;光学显微镜下观察角膜基质透镜形态结构的完整性;透射电子显微镜下观察保存的角膜基质透镜超微结构。结果DX保存液保存1 d组、DX保存液保存1周组、甘油保存1 d组、甘油保存1周组和甘油保存2周组细胞死亡数分别为(53.1±14.2)、(50.8±9.8)、(70.4±13.6)、(172.8±31.7)和(182.8±14.2)个/视野,总体比较差异有统计学意义(F=16.37,P<0.05);DX保存液保存1 d组与DX保存液保存1周组角膜基质透镜死亡细胞数量差异无统计学意义(P>0.05);甘油保存1 d组细胞死亡数明显少于甘油保存1周组和甘油保存2周组,甘油保存1周组死亡细胞数明显多于DX保存液保存1周组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组角膜基质透镜胶原纤维排列规则;DX保存液保存1 d组和DX保存液保存1周组角膜基质组织胶原纤维排列较整齐,细胞较完整,甘油保存1 d组角膜基质组织水肿,细胞核裸露,随着甘油保存时间的延长,组织内胶原纤维逐渐变疏松。透射电子显微镜下可见DX保存液保存1 d组和DX保存液保存1周组角膜基质组织紧密,胶原纤维致密,细胞核完整;甘油保存1周组细胞分布稀疏,细胞结构不完整,甘油保存2周组细胞分布明显稀疏,细胞结构破坏。结论人角膜基质透镜用DX保存液保存1周可有效保存角膜基质组织和维持细胞结构。DX保存液对角膜基质透镜的保存效果优于甘油保存液。
简介:摘要目的探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对猕猴卵巢组织的冷冻保存效果。方法取新鲜的猕猴卵巢组织随机分成对照组(新鲜卵巢组织)、玻璃化冷冻组和程序化冷冻组,分别进行HE染色、窦前卵泡的分类计数及免疫染色,比较3组卵巢组织内卵泡形态学、各级卵泡正常率及磷酸化组蛋白H3(PHH3)的表达量的差异。结果①HE染色:3组中,始基卵泡、初级卵泡正常率差异均无统计学意义(P均>0.05);程序化冷冻组单层次级卵泡正常率[40.6%(28/69)]均低于玻璃化冷冻组[53.5%(38/71)]、对照组[60.7%(34/56)],3组间差异有统计学意义(P=0.044),但玻璃化冷冻组、对照组间差异无统计学意义(P>0.05);玻璃化冷冻组、程序化冷冻组多层次级卵泡正常率[23.4%(11/47),16.7%(7/42)]均明显低于对照组[57.3%(39/68)](P均<0.001),玻璃化冷冻组多层次级卵泡正常率高于程序化冷冻组,但差异无统计学意义(P>0.05)。②分离卵泡比较:玻璃化冷冻组、程序化冷冻组初级卵泡正常形态率均接近对照组,差异无统计学意义(P>0.05);玻璃化冷冻组和程序化冷冻组次级卵泡正常率[38.2%(34/89),23.7%(23/97)]明显较低,与对照组[56.4%(61/108)]比较差异均有统计学意义(P均<0.001);玻璃化冷冻组的次级卵泡正常形态率明显高于程序化冷冻组,差异有统计学意义(P<0.001);③ PHH3染色:玻璃化冷冻组颗粒细胞PPH3的阳性表达率接近对照组(P>0.05),程序化冷冻组卵泡颗粒细胞PHH3阳性表达率(58.72%±12.31%)明显低于对照组(67.58%±8.45%,P=0.04)和玻璃化冷冻组(62.87%±9.94%,P=0.03)。结论玻璃化冷冻和程序化冷冻均能有效地保存卵巢组织,但玻璃化冷冻对卵巢组织冷冻和复融过程中各级卵泡及颗粒细胞形态学的损伤明显低于程序化冷冻,更适合下一步人类卵巢组织的冷冻保存的研究。
简介:意大利记者吉阿提尼访问著名钢琴家鲁宾斯坦,告别时,钢琴家送给记者一盒他最喜欢抽的雪茄。“我要好好地把它珍藏起来。”记者说。“千万不可。”钢琴家说,“你一定要把它抽掉,这些雪茄美妙如人生,人生是不能保存的,你一定要尽情享受它。没有爱和不能享受人生,就没有乐趣。”
简介:摘要目的观察红细胞保存液(MAP)保存的洗涤红细胞35天内质量是否符合GB18469-2012《全血及成分血质量要求》。方法将2U去白悬浮红细胞40袋随机分为A、B两组各20袋,A组洗涤后加生理盐水保存,B组洗涤后添加MAP保存。比较生理盐水和MAP混悬洗涤红细胞指标差异;将B组储存于4℃冰箱,观察35天内的指标变化。结果MAP和生理盐水混悬洗涤红细胞制备当天检测结果比较差异无统计学意义;MAP混悬洗涤红细胞保存35天内检测指标随时间推移逐渐变化,但检测值均在国家标准范围内。结论MAP混悬洗涤红细胞35d内的各项指标均符合GB18469-2012《全血及成分血质量要求》。