简介：关于保险,很多人都知道给汽车买保险,给人身买保险,给财产买保险,也有的给孩子买教育险,更有的通过买保险分红来赚钱.可是,关于“生殖保险”,很多人对此都很陌生.那么,什么是“生殖保险”呢？哪些人适合买“生殖保险”呢？买“生殖保险”有哪些方面需要注意的呢？

简介：摘要近年来，辅助生殖技术(ART)临床应用越来越广泛。体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期数增长、获卵方案完善及实验室技术提高，均使助孕过程中产生了大量剩余胚胎。其中多数剩余胚胎长期不用，冻存在生殖中心造成资源浪费，且其管理与处置面临着一系列法律及伦理挑战。本文就剩余冻存胚胎现状问题做一总结，并结合我中心临床经验对其处置提出几点建议，旨在为国家有关部门制定相关政策法规提供参考。

简介：摘要目的探讨不同冻存温度对树突状细胞存活率的影响，为临床树突状细胞疫苗的贮存提供依据。方法本研究选取健康人的外周血分离单核淋巴细胞，体外诱导培养，成熟的树突状细胞置于-80℃和液氮中的温度下贮存。不同的时间复苏，苔盼蓝染色计算树突状细胞的存活率。结果在一周之内树突状细胞在-80℃和液氮中冻存复苏后，活细胞数85%以上，四周后在液氮中存活的树突状细胞的数量明显高于-80℃冻存的细胞。结论液氮中适合长期保存树突状细胞。

简介：摘要目的研究冻存对犬脂肪干细胞(ADSC)生物学特征及体外诱导分化能力的影响。方法2017年2月至5月，取自上海市第六人民医院动物实验室雄性6月龄比格犬腹股沟处脂肪组织，采用胶原酶消化法分离培养ADSC，设置冻存组和非冻存组，其中冻存组，将犬ADSC传至第2代，予以-196 ℃液氮冻存。3个月后细胞复苏，倒置显微镜观察细胞形态，细胞计数试剂盒(CCK-8)绘制生长曲线，流式细胞仪检测干细胞标志CD45、CD90、CD105表达，体外经成骨成脂及成肌等多向诱导分化。比较两组犬ADSC上述生物学特性指标差异，组间均数比较采用t检验，细胞生长曲线分析采用重复测量方差分析。结果犬ADSC原代培养4～5 d便可达95%细胞融合，细胞贴壁生长，呈长梭形。与非冻存组比较，冻存组犬ADSC形态相似，CCK-8检测两组细胞增殖能力差异无统计意义(F＝1.233，P>0.05)；冻存组犬ADSC表面标志CD45、CD90、CD105表达分别为(1.53±0.11)%、(97.52±1.61)%和(96.86±1.88)%，非冻存组犬ADSC表面标志CD45、CD90、CD105表达分别为(1.44±0.12)%、(96.31±1.76)%和(97.90±1.25)%，组间比较差异无统计意义(tCD45＝0.958，tCD90＝0.877，tCD105＝0.798，均P>0.05)。与非冻存组比较，冻存组犬ADSC同样具有强大的多向分化能力，包括成肌、成脂和成骨分化。结论冻存后犬ADSC一般生物学特性及多向分化潜能无明显改变，能作为犬ADSC长期储存和运输的保存条件。

简介：摘要目的通过深低温冻存自行构建的人工植骨材料多孔羟基磷灰石(hydroxyapatiteceramic,HA)/骨髓间充质干细胞(bonemarrow-derivedmesenchymalstemcells,BMSCs)修复兔颅骨缺损，探讨深低温冻存(Cryopreservation)方法对保存HA复合植骨材料的可行性，以方便临床使用。方法应用无菌培养法获得BMSCs与羟基磷灰石HA复合培养，获得复合植骨材料培养构成人工植骨材料。应用-80℃保存3个月的HA/BMSCs修复兔颅骨12mm缺损模型，同时以未行低温冻存的HA/BMSCs及单纯的HA分别为对照组1和2。在术后第12周进行大体观察、X线观察和HE染色等组织学观察。结果BMSCs与多孔HA构建出人工植骨材料，BMSCs在HA表面生存良好。三组模型在术后12周实验组和对照1组的骨缺损处愈合大部，有成熟骨小梁通过，有的可见髓腔通畅，塑形较好；对照2组骨痂生成少，骨缺损部分愈合，塑形欠佳，新骨生成有统计学差异（P值<0.05）。结论低温冻存的复合植骨材料的骨缺损修复能力与新制作的复合材料几乎一致，没有因为冻存而受到影响。

简介：摘要目的通过卵巢组织冻存及自体移植手术保护子宫内膜癌患者生育力与卵巢内分泌功能。方法对1例33岁子宫内膜癌I期患者在癌症手术过程中进行卵巢组织取材、冻存，待其癌症完全缓解后进行冻存卵巢组织自体移植手术，随访监测患者的激素水平、卵泡发育情况以及绝经相关症状。结果卵巢组织移植1个月后，改良Kupperman 评分由12分降低至2分，绝经相关症状基本消失，移植第2个月卵泡刺激素降低至21.78 IU/L，雌二醇由<13.76 ng/L升高至65.55 ng/L，B超监测到有卵泡发育。移植第4个月，卵泡刺激素降至6.26 IU/L，雌二醇水平升至112.22 ng/L，移植后第9个月，雌二醇水平为118.14 ng/L，孕酮水平升高至8.96 μg/L，且B超下监测到2个排卵后黄体。结论卵巢组织冻存移植2个月后卵巢功能恢复，证明卵巢组织在临床上移植成功。

简介：摘要目的探讨自体纯化冻存脂肪颗粒注射移植对面部年轻化的作用。方法2018年1月至2019年2月，衡阳美莱医疗美容医院美容外科收治64例(男9例，女55例，年龄35～64岁，平均43岁)面部老化萎缩凹陷的美容就医者，在其腹部或大腿用肿胀吸脂术抽吸脂肪，经过低速低压离心纯化脂肪颗粒。在-20 ℃下低温冻存24周，37 ℃下复温培养1 h后，组织学观察细胞完整性；检测脂肪细胞活力，注射移植填充面部老化凹陷区域。结果脂肪细胞冻存24周后细胞膜、细胞核仍清楚完整，细胞活力(88.89±1.23)%。64例(186个部位)中21例接受1次脂肪颗粒注射移植，35例接受2次脂肪颗粒注射移植，8例接受3次脂肪颗粒注射移植。术后随访6～24个月，面部老化症状明显改善，效果满意、持久，吸收率低，无感染、脂肪液化等并发症发生。临床疗效美容就医者及医者满意度均>82.81%，不满意的1.56%。结论自体纯化冻存脂肪颗粒注射移植对面部年轻化效果明显、吸收率低、可重复注射、易于美容就医者接受，值得临床应用。

简介：摘要目的本研究探索了梅毒抗体阳性标本经－20 ℃冻存后梅毒酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测方法的稳定性，并探索比较ELISA、化学发光微粒子免疫检测法(chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA)、甲苯胺红不加热血清试验(syphilis toluidine red untreated serum test，TRUST)与梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(treponema pallidum gelatin particle agglutination test，TPPA)的诊断价值。方法选取2014年3月至2015年3月我院通过ELISA法和(或)CMIA法初筛阳性标本483例血清标本，再用TPPA法检测。根据ELISA法检测的S/CO值将患者标本分别分为四组：A组(S/CO≥10)，B组(10>S/CO≥5)，C组(5>S/CO≥1)，D组(S/CO<1，但TPPA为阳性)。结果A组标本冷冻前和冷冻后ELSIA方法检测结果与TPPA结果符合率差异无统计学意义(99%比99%，P>0.05)；B组标本冷冻前和冷冻后ELSIA方法检测结果与TPPA结果符合率差异无统计学意义(97.84%比97.84%，P>0.05)；C组标本冷冻前和冷冻后ELSIA方法检测结果与TPPA结果符合率差异无统计学意义(91.11%比92.22%，P>0.05)；D组标本冷冻前和冷冻后ELSIA方法检测结果与TPPA结果符合率差异有统计学意义(0%比88.89%，P<0.05)，并且D组ELISA、CMIA、TRUST检测结果与TPPA结果的符合率分别为0%、88.89%、61.11%，差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA方法检测冻存前和冻存后血清阳性预测值差异无统计学意义(95.48%比96.03%，P>0.05)；ELISA方法检测冻存前和冻存后敏感性差异无统计学意义(96.10%比99.57%，P>0.05)；而检测的冻存前标本ELISA法结果和CMIA法结果的敏感性分别为96.10%、99.57%，均高于TRUST敏感性(40.69%)，差异有统计学意义(P<0.05)。结论－20 ℃冷冻对ELISA检测梅毒为阳性的标本无影响，而对ELISA检测梅毒为假阴性的标本有一定影响。检测梅毒螺旋体抗体时应关注ELISA、CMIA和TRUST检测方法的假阳性和假阴性标本，使用多方法联合检测可有效保证检测结果的稳定性和准确性。

简介：

简介：摘要目的研究人类胚胎冷冻保存时间超过6年复苏移植后胚胎的存活率、妊娠结局及对母体和子代安全性的影响。方法回顾性分析2008年1月至2012年12月在郑州大学第二附属医院生殖中心接受辅助生殖技术助孕并有冻存胚胎患者的资料，根据冻存时间是否超过6年分为长期冻存组(84例)和对照组(278例)。比较两组的临床资料，复苏胚胎的存活率，移植后的种植率、临床妊娠率、流产率、异位妊娠率、活产率以及妊娠期间母体并发症发生率和子代安全性。结果长期冻存组复苏移植时女方年龄高于对照组(P<0.05)，两组间胚胎存活率比较差异未见统计学意义(P>0.05)，但胚胎完全存活率低于对照组(52.49%比67.72%)，P<0.05。两组种植率、临床妊娠率、流产率和活产率比较差异未见统计学意义(P>0.05)。妊娠期并发症和子代安全性比较差异未见统计学意义(P>0.05)。结论冻存6年以上的胚胎尚可获得良好的妊娠结局，但需考虑母体年龄增长可能引起的妊娠及围生期风险。

简介：摘要目的对自制冷冻片微型载体（Strawtop）法与麦管法冷冻保存人微量精液的冻存效果进行系统评价。方法采用前瞻性研究分析2018年5月1日至2018年6月30日期间于同济大学附属东方医院生殖医学中心行卵胞质内单精子显微注射（ICSI）助孕治疗的患者捐献的部分精液样本，比较自制Strawtop法与麦管法冷冻人精子复苏后的冷冻复苏率、DNA碎片指数（DNA fragmentation index，DFI）、超显微结构和受精能力与胚胎发育情况。结果Strawtop法冻存人精子的冷冻复苏率（46.8%±17.1%）显著高于麦管法（23.1%±13.7%，P=0.001）；与冷冻前（18.9%±11.6%）相比，麦管法（33.5%±15.0%）冷冻精子复苏后的DFI显著增加（P=0.019），而Strawtop法冻融人精子的DFI（23.4%±11.7%）与冷冻前相比差异无统计学意义（P=0.375）；Strawtop法对冷冻精子超显微结构的损伤低于麦管法；Strawtop法冻融精子、麦管法冻融精子和新鲜精子的正常受精率、卵裂率和受精后48 h（第2日）的优质胚胎率差异均无统计学意义（P>0.05）。结论Strawtop法冷冻人微量精液冷冻复苏率高于麦管法，复苏精子的损伤较小，且复苏后无需离心洗涤即可直接用于ICSI，具有较高的临床应用价值。

简介：目的观察脐血来源的未成熟树突状细胞（imDC）低温冻存前后的生物学特性，探讨imDC的保存方法。方法取新鲜脐血分离单个核细胞（MNC），在体外经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）和重组人白细胞介素（rhIL）4诱导产生imDC后，加入二甲亚砜（DMSO）作为保护剂，-80℃降温，-196℃保存，40℃水浴复温，获得冻存imDC。光学显微镜下观察冻存的imDC与新鲜imDC形态，计算其锥虫蓝拒染回收率（TBR）；流式细胞仪检测细胞表面成熟标志；混合淋巴细胞反应（MLR）检测细胞刺激未致敏T淋巴细胞的增殖能力。结果脐血MNC在rhGM-CSF和rhIL-4诱导下可向树突状细胞（DC）分化，相差显微镜显示细胞形态不规则，细胞表面呈树枝样突起；扫描电镜显示，细胞表面不规则，有树枝样突起和不规则皱褶。冻存imDC复苏后TBR为（86．8±1．3）％，冻存imDC在形态上与新鲜imDC无明显差异。MNC体外经rhGM—CSF和rhIL-4诱导生成的imDC表面CD1a阳性率为（62±8）％、CD14为（18±7）％、人类白细胞DR抗原（HLA—DR）为（67±5）％、CD80为（13±7）％、CD86为（12±5）％；反映DC成熟的表面标志物CD83为（4．6±2．0）％，符合imDC的表型特征。冻存imDC的CD80、CD86、CD83分别为（15±5）％、（17±5）％、（7、4±3．3）％，较新鲜imDC有所增高（P〈0.05），但仍符合imDC的表型特征。对照组MLR的每分钟放射性荧光闪烁计数（cpm）值为（488±197）min^-1；新鲜imDC组为（463±104）min^-1，与冻存imDC组的cpm值（512±78）min^-1。比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。各组细胞刺激指数（SI）均〈2。新鲜imDC和冻存imDC均不能有效刺激同种未致敏T淋巴细胞增殖。结论本实验中获得的冻存imDC具有足够的细胞活力，其细胞免疫表型和细胞功能具有不成熟特征，说明利用DMSO低温保存imDC的方法可行。

简介：目的观察人脐带间充质干细胞（HUC—MSCs）经低温冻存复苏后的生物学特性，验证其是否仍具有间充质干细胞的基本特征。方法用胶原酶和胰蛋白酶消化脐带，分离诱导获得HUC-MSCs，传代培养，取第3代细胞加入冷冻保护剂（10％DMSO＋40％FBS＋50％DMEM／F12）后将其冻存于一80oc冰箱过夜，再转入液氮气相中保存1个月后复苏。采用倒置显微镜观察复苏后贴壁生长细胞的形态；台盼蓝拒染法比较冻存前后细胞活力；MTT法测定HUC—MSCs的增殖活性，比较冻存前后HUC—MSCs增殖活性的差异；流式细胞仪检测HUC—MSCs经冻存复苏后表面抗原的表达情况；复苏后HUC—MSCs进行成骨诱导分化培养，检验其是否仍具有多向分化潜能。结果HUC—MSCs经低温保存复苏后，细胞仍保持贴壁生长等外形特征，复苏后HUC—MSCs存活率为91．17oA；增殖活性与未冻存细胞比较，差异无统计学意义；细胞表面高表达CDl05、CD73、CD71、CD90、CD29、CD44、CDl3抗原，低表达或不表达CD34、CDl33、CD45、CDl4，HLA—DR、CD86、CD83、CD80、CDla~复苏后HUC—MSCs具有向成骨细胞诱导分化能力，细胞经茜素红、ALP和Von—Kossa’s染色呈阳性反应。结论经冻存复苏后的HUC—MSCs保持了间充质干细胞的基本形态，其表型满足间充质干细胞的基本要求，仍具有向成骨细胞分化的潜能。

简介：摘要：目的：分析冻存NK细胞制作即用型抗肿瘤产品的可行性。方法：采用台盼蓝染色法对新鲜及冻存NK细胞进行计数并计算细胞活率；采用 ELISA方法对新鲜及冻存NK细胞的IFN-γ表达量进行测定；使用流式细胞术对新鲜及冻存NK细胞的表面活化性受体的表达进行比较分析；使用化学发光法对新鲜及冻存NK细胞对肿瘤细胞的杀伤效果进行对比研究。结果：在该实验中，新鲜NK细胞的存活率为（99.03±0.59）%的条件下，经冻存的 NK细胞存活率为（98.31±0.85）%，二者无显著性差异（P>0.05）。冻存之前以及冻存之后的NK细胞的IFN-γ表达量分别为（8152.5±501.2）pg/ml、（7575.9±744.7）pg/ml，二者无显著性差异（P>0.05）。与新鲜 NK细胞比较，经冻存后的 NK细胞的NKp30表达量降低，NKG2D无明显差异（P>0.05）。与冻存 NK细胞相比，在 E:T=20:1时，新鲜 NK对K562细胞的杀伤效果更明显（P<0.05) ，E:T=1:1、5:1和10:1的时候，两组比较没有显著差异（P>0.05）。结论：冻存 NK细胞在临床上具有良好的存活率和良好的抗肿瘤活性，可作为一种即刻使用的细胞制剂，在临床上有很好的应用前景。

简介：摘要目的通过研究不同的玻璃液对人卵巢组织冻存后的近期异种移植效果，以筛选出较优的玻璃化冷冻方案。方法收集2018年3月至2019年12月期间在北京大学深圳医院因妇科疾病行手术治疗的4例患者卵巢组织，将卵巢组织分割成5~10 mm×10 mm×1 mm的小块，分为新鲜对照组和4个处理组，4个处理组分别放入G1、G2、G3、G4不同的玻璃液中，经过4组玻璃液预平衡和平衡后冻存4周后复苏，复苏后的组织移植到胚龄10 ｄ的鸡卵绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane，CAM）上培养，培养5 d后取出移植于CAM的卵巢组织，HE染色比较移植后4组卵巢组织的正常原始卵泡率，免疫组织化学法检测CD105标记的4组卵巢组织的新生血管并比较其微血管密度；Western blotting法检测并比较4组卵巢组织Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果经过G1、G2、G3、G4玻璃液冻融并移植于鸡胚5 d后的卵巢组织，正常原始卵泡率分别为63.2%（24/38）、68.3%（28/41）、61.9%（26/42）、69.6%（32/46），新鲜对照组的正常卵泡率为82.8%（82/99），5组间的差异有统计学意义（P=0.044），进一步两两比较，各处理组间正常原始卵泡率均低于新鲜对照组（均P<0.05），而各处理组间的正常卵泡率差异无统计学意义（P>0.05）。G1组、G2组、G3组和G4组鸡胚移植后的卵巢组织均可见CD105表达量增加，CD105标记的微血管密度（microvascular density，MVD）在新鲜对照组和G1组、G2组、G3组、G4组分别为6.51±1.30/mm2、11.10±1.62/mm2、13.04±1.84/mm2、9.11±1.09/mm2、11.28±1.62/mm2，各处理组的MVD均高于新鲜对照组，差异有统计学意义（P<0.001，P<0.001，P=0.022，P<0.001），G1组、G2组和G4组的MVD均高于G3组（P=0.024，P<0.001，P=0.034）。Western blotting检测结果显示G1组、G2组、G3组、G4组和新鲜对照组的Bcl-2/Bax的比值分别为0.71±0.37、0.84±0.29、0.45±0.18、0.84±0.29和0.44±0.21，差异有统计学意义（P=0.013），G2组Bcl-2/Bax的比值明显高于新鲜对照组和G3组（P=0.025，P=0.038）。结论玻璃化冷冻保存的人卵巢组织，在移植早期原始卵泡丢失较多。经过G2和G4玻璃液冷冻复融后的人卵巢组织，在移植5 d后血管化程度较高，抗凋亡能力强，是适用于人卵巢组织冷冻的较优的玻璃化冷冻方案。

简介：摘要目的观察外周血干细胞在-80℃条件下保存时间与细胞活性的关系。方法采用一种简便的-80℃干细胞冻存方法，其干细胞保护剂终浓度为5%二甲基亚砜（DMSO），3%羟乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HAS）,不经程序降温，直接-80℃冰箱冻存，并调整细胞浓度为（2～4）×107/ｍｌ，分别对冻存１、３、６、９、１２月干细胞活性进行检测，观察台盼蓝拒染率和ＭＮＣ、ＣＤ３４＋细胞的回收率。结果干细胞活性在１２个月内均无明显下降，其台盼蓝拒染率和ＭＮＣ、ＣＤ３４＋细胞的回收率都在８０％以上。不同时间冻存的干细胞活性比较无明显统计学差异（Ｐ＞０.０５）。结论5%DMSO、3%HES和4%HAS作为干细胞冷冻保护剂直接在-80℃冰箱冻存外周血干细胞的方法能有效地保护外周血干细胞活性。

简介：背景：骨髓间充质干细胞在骨髓中的含量极低,体外的长期培养过程中易丧失干细胞潜能以及体内移植后安全性等问题的存在,限制了骨髓间充质干细胞在临床上的广泛应用。目的：探索体外分离纯化、冻存大鼠骨髓间充质干细胞的最适方法,并观察以此方法培养的骨髓间充质干细胞移植体内后是否具有成瘤性。方法：分别采用差速贴壁结合24h首次换液、24h首次换液、48h首次换液的方法纯化培养骨髓间充质干细胞,筛选最适纯化方法进行后续实验。配制含体积分数为10%,20%,30%,40%,50%胎牛血清的细胞冻存液冻存细胞,复苏后计算细胞存活率,测定复苏后细胞的生长曲线及成脂诱导能力。将第3,15代骨髓间充质干细胞进行裸鼠肌肉、肝脏局部注射体内移植,45d后取注射部位行病理组织标本检查。结果与结论：差速贴壁结合24h首次换液法所获得骨髓间充质干细胞纯度最高,而细胞增殖能力与其他两组无明显差别,因此选用该方法纯化骨髓间充质干细胞,然后进行传代培养;含体积分数为30%血清冻存液既可保证细胞活性与增殖能力,又可保证干细胞特性及多向分化潜能。骨髓间充质干细胞传至15代仍保持间充质干细胞特性,骨髓间充质干细胞移植入裸鼠肝脏45d后仍可在肝脏局部存活,生长状态与体外培养相似,无异型性及向周围浸润生长,提示体外长时间培养15代以内的骨髓间充质干细胞可在裸鼠体内存活且无成瘤性。

简介：摘要冷冻保存技术已成为细胞治疗、辅助生殖、组织工程和疫苗储存等生物医学应用的必要方法。冰晶的形成是冷冻保存的主要限制因素，并会对生物样本造成致命性损伤。二甲基亚砜(DMSO)是传统上常用的冷冻保护剂，然而考虑到DMSO自身细胞毒性和给药后对机体产生的潜在不良反应，因此寻找具有安全性和有效性的替代DMSO方法的需求逐渐增长。本文拟概述多种治疗性细胞的无DMSO保存的研究进展及面临的问题和挑战，以期推动新型细胞冷冻保存技术更好地开展。

简介：目的：研究深低温冻存对牙周膜干细胞膜片增殖和分化能力的影响。方法：将牙周膜干细胞膜片用90％胎牛血清＋10％DMSO冻存液冻存3月后复苏，采用甲基噻唑基四唑（MTT）法、vonKossa染色和油红O染色法检测冻存对增殖和分化的影响。结果：冻存牙周膜干细胞膜片与新鲜牙周膜干细胞膜片的增殖率和成骨、成脂分化能力没有明显差异。结论：牙周膜干细胞膜片经深低温保存后可继续保持冻存前原有的增殖能力和多向分化能力。

简介：目的探讨-80℃下不同冻存时间对脐血造血干细胞保存效果的影响。方法对-80℃下分别冻存1、2、3、4、8、16、32w的脐血细胞进行复苏,比较各组间有核细胞数、CD34^＋数和台盼蓝拒染率的差异。结果脐血细胞在-80℃下保存1、2、3、4、8w后,各组的有核细胞数和CD34^＋数的差异无统计学意义,而在冻存16、32w后较1w的差异有统计学意义（P〈0.05）。台盼蓝拒染率在8、16、32w较1w的差异均有统计学意义（P〈0.05）,1、2、3、4w各组间的差异无统计学意义。结论-80℃直接冻存对于短期（〈8w）脐血细胞的活性（有核细胞数、CD34^＋数和台盼蓝拒染率）无明显影响,但对于需要长期保存的脐血细胞的效果有影响。