简介:目的探讨非瓣膜病心房颤动(房颤)患者血清小分子RNA(miRNA)全基因组表达差异及其可能的调控作用和早期预警价值.方法15例房颤患者,分为阵发性、持续性和永久性房颤组,每组5例,对照组5例健康人.射频消融术前和术中分别取外周血和冠状窦血,提取血浆总RNA,使用microRNA芯片(microRNAv18.0)进行全基因组miRNA表达谱微阵列分析,VolcanoPlot法获得差异表达niRNAs,并用tMEV软件进行聚类分析,以及通过mirbase、miranda、targetscan数据库进行靶基因分析,并进行RT-PCR的差异表达验证.结果房颤组冠状窦血与外周血比较有14个miRNAs表达差异显著,其中6个表达上调:即miR-1266、miR-4279、miR-4787-5p、miR-4666a-3p、kshv-miR-K12-6-3p和miR-3150a-5p,8个表达下调:即miR-892a、miR-3149、miR-3171、miR-3664-5p、miR-3591-3p、miR-4423-5p、miR-4473和miR-574-3p.其中,miR-1266在阵发性、持续性和永久性房颤组均明显升高,而miR-3171则显著降低.房颤组与对照组外周血及冠状窦血比较miRNAs表达也有明显差异.结论房颤患者冠状窦血与外周血比较miRNAs表达均有显著差异,而冠状窦血miRNAs更能反映心脏的代谢与调控状况;血清miR-3171、miR-892a、miR-3149在房颤发生发展早期出现且持续表达差异,有可能成为早期预警诊断的标志物;miR-1266、miR-4279、miR-4666a-3p有可能成为未来治疗房颤的干预靶点。
简介:目的研究小分子干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰(RNAi)对卵巢癌紫杉醇耐药细胞TNC基因表达的影响,探讨TNC基因在紫杉醇耐药中的功能.方法用脂质体转染剂LipofectamineTM2000将针对TNC基因特异性合成的siRNA转染SKOV3/TAX30细胞,分别在转染后24、48、72h收集细胞,检测各组细胞TNCmRNA和TNC蛋白的表达水平.siRNA转染SKOV3/TAX30细胞后,采用MTT法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50).WesternBlot检测SKOV3/TAX30及SKOV3/TAX300两种耐药细胞Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin及下游CyclinD、E-cadherin蛋白的表达.结果siRNA转染SKOV3/TAX30细胞24、48、72h后,TNCmRNA和TNC蛋白表达水平均下降,SKOV3/TAX30细胞对紫杉醇药物的IC50下降.TNC表达升高的耐药细胞中,Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin及下游CyclinD蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调.结论针对TNC基因特异性合成的siRNA可激发RNAi介导的TNC沉默,并且逆转了紫杉醇化疗耐药,TNC表达上调与紫杉醇耐药相关,TNC可能通过Wnt信号通路的激活参与了化疗耐药.
简介:摘要目的RNA干扰技术靶向敲除TLR4基因对子宫颈癌Siha细胞生物学行为影响。方法试验分为重组载体组、空载体组与空白组3组,利用RT-PCR技术对3组细胞中的TLR4 mRNA表达情况进行检测,分别在MMT实验以及细胞划痕实验中对细胞的增殖情况进行观察并绘制其增长曲线。结果(1)重组载体组细胞中 TLR4 mRNA转染前的表达水平为(81.6±2.1)%,显著高于转染后的表达水平(23.6±1.8)%,差异有统计学意义(P<0.05);空载体组与空白组中的TLR4 mRNA增殖情况在转染前后对比,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)转染72 h时,重组载体组吸光度A值为(0.12±0.02),空载体组吸光度A值为(0.15±0.01),空白组吸光度A值为(0.16±0.02),空载体组与空白组的细胞增殖速度在转染72 h时均快于重组载体组,差异均统计学意义(均P<0.05)。(3)重组载体组细胞在划痕后培养细胞的48 h与72 h时的迁移率均慢于未转染组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论小分子RNA靶向敲除TLR4基因可有效抑制子宫颈癌Siha细胞的生长速度。
简介:摘要泪腺腺样囊性癌(lacrimal gland adenoid cystic carcinoma,LGACC)是一种常见的、发生于泪腺的恶性上皮性肿瘤,其复发率和转移率均较高。多种小RNA(miRNA)在LGACC的发生、发展中起重要作用。miR-24-3p过表达可降低LGACC中PRKCH的表达以促进p53/p21表达,从而抑制肿瘤的侵袭。miR-93-5p通过调控Wnt信号通路,靶向下调乳腺癌转移抑制因子1L,而促进LGACC细胞上皮细胞-间充质转化、迁移、侵袭和增生。LGACC中的miR-181a-5p表达上调,也是LGACC细胞增生和迁移的原因之一。(国际眼科纵览,2022, 46:157-161)
简介:摘要目的探讨环状RNA(circRNA,Circ)_101237调控肝癌细胞进展的分子机制。方法将新乡医学院第一附属医院2019年7月至2021年7月行手术切除的肝癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肝癌组织Circ_101237表达水平。采用sh-Con和sh-Circ_101237慢病毒感染人肝癌细胞系MHCC97H,建立sh-Con组和sh-Circ_101237组细胞系,细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分析Circ_101237对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。双荧光素酶报告实验分析Circ_101237的靶基因。组间数据比较采用t检验。结果癌旁组织中Circ_101237表达水平(1.01±0.18)明显低于肝癌组织Circ_101237表达水平(2.09±0.26),差异有统计学意义(t=30.560,P<0.05)。sh-Con组细胞吸光度值(A)、细胞克隆形成数量、划痕愈合率和侵袭数量[(1.97±0.09),(164.67±14.40)个,(62.50±5.51)%,(130.83±25.18)个]明显高于sh-Circ_101237组细胞A值\细胞克隆形成数量、划痕愈合率和侵袭数量[(1.33±0.18),(111.33±9.07)个;(28.63±6.84)%,(92.33±14.05)个],差异有统计学意义(t=7.782、7.675、9.444、3.270,P<0.05)。Circ_101237与miR-490-3p存在连续互补结合位点。sh-Con组细胞miR-490-3p表达水平(0.99±0.14)明显低于sh-Circ_101237组细胞miR-490-3p表达水平(2.17±0.24),差异有统计学意义(t=10.280,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞A值(1.01±0.13)明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组细胞A值(1.60±0.09),差异有统计学意义(t=9.143,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞划痕愈合率[(27.41±5.15)%]明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组划痕愈合率[(49.19±7.81)%],差异有统计学意义(t=5.703,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞侵袭数量[(90.83±9.87)个]明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组细胞侵袭数量[(122.33±11.09)个],差异有统计学意义(t=5.197,P<0.05)。结论Circ_101237在肝癌组织中呈高表达,通过miR-490-3p调节着肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性细胞生物学行为。
简介:【目的】探寻非编码小RNA分子BSR1350在羊布鲁菌适应环境压力和毒力中的作用。【方法】通过RT-PCR检测BSR1350在酸、营养缺乏、氧化应激等模拟巨噬细胞内环境的不同压力条件下的转录情况;采用融合PCR的方法构建BSR1350的缺失突变株,同时构建其回复株;比较布鲁菌野生株16M、BSR1350缺失突变株和过表达株在模拟巨噬细胞内环境条件下以及小鼠体内的生存能力。【结果】BSR1350位于羊布鲁菌16MI号染色体的反义链上,在模拟巨噬细胞内环境的应激条件下表达明显增加。BSR1350缺失后,布鲁菌抵抗高渗、氧化压力、热应激及酸性环境的能力明显下降,小鼠脾脏内的细菌载量显著下降,表明BSR1350与布鲁菌的胞内生存能力和毒力相关。【结论】非编码小RNABSR1350在羊布鲁菌适应环境压力和毒力中起着重要作用。
简介:摘要目的探讨环状RNA(circRNA)_0016624调控骨质疏松性骨折愈合的分子机制。方法30只SD大鼠按数字表法分为对照组、模型组和circRNA组。模型组和circRNA组构建去卵巢大鼠骨质疏松性骨折大鼠模型,对照组仅去卵巢,不做骨折处理。对照组和模型组骨折注射对照腺相关病毒,而circRNA组大鼠骨折部位注射过表达circRNA_0016624的腺相关病毒。治疗24 d后,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析3组大鼠骨折部位circRNA_0016624表达水平;采用X线片分析骨折愈合情况;采用CT扫描分析3组大鼠的骨骼参数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析骨折部位骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达水平。采用三点弯曲法检测3组大鼠骨折生物力学参数。计量数据比较采用单因素方差分析。结果circRNA组骨折部位circRNA_0016624表达水平(1.21±0.16)明显高于模型组(0.94±0.08),差异有统计学意义(t=8.851,P<0.05)。circRNA组大鼠X线评分(3.02±0.14)明显高于模型组大鼠X线评分(1.96±0.22),差异有统计学意义(t=12.880,P<0.05)。circRNA组大鼠骨密度评分[(0.254±0.010) g/cm2]明显高于模型组[(0.206±0.005) g/cm2],差异有统计学意义(t=12.110,P<0.05)。circRNA组大鼠骨小梁体积BV[(30.35±2.61) mm3]明显高于模型组[(25.40±1.40) mm3],差异有统计学意义(t=5.284,P<0.05)。circRNA组大鼠组织体积TV[(30.88±2.06) mm3]明显高于模型组[(23.28±2.23) mm3],差异有统计学意义(t=7.914,P<0.05)。circRNA组大鼠大鼠BV/TV比例[(61.37±1.94)%]明显高于模型组[(51.18±2.23)%],差异有统计学意义(t=10.891,P<0.05)。circRNA组大鼠骨折部位BMP-2和VEGF水平[(2.56±0.22)、(2.09±0.39) μg /L]明显高于对照组,差异有统计学意义(t=7.045、7.530,P<0.05)。circRNA组大鼠胫骨最大载荷、弹性载荷、刚度和最大挠度等三点弯曲指标[(145.76±14.00) N、(102.20±18.07) N、(149.43±10.32) N/mm]明显高于模型组大鼠,差异有统计学意义(t=9.412、5.728、5.288,P<0.05)。结论腺病毒介导circRNA_0016624在骨折部位表达可显著上调BMP-2蛋白等骨折愈合因子的表达水平,进而促进骨折愈合和增强其生物力学特性。