简介：目的利用免疫磁珠分离成人骨髓神经生长因子受体(nervegrowthfactorreceptor,NGFR)阳性细胞,获得同质性骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs).方法采用Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓中单个核细胞(mononuclearcells,MNCs).对MNCs进行常规贴壁培养或应用磁分离技术分离NGFR+细胞.分别检测NGFR+细胞和常规贴壁培养所获BMSCs体外扩增和集落形成能力,分析其细胞表型和细胞周期,并进行成骨、成脂肪诱导.结果免疫磁珠分离获得NGFR+细胞的纯度为(90.4±4.7)%,NGFR+细胞较贴壁培养获得BMSCs具备更强增殖能力和成骨及成脂肪分化潜能.结论利用免疫磁珠分离骨髓NGFR+细胞可以获得同质性原始BMSCs.

简介：目的研究Wistar大鼠胰岛细胞分离、纯化和培养的改良方法和条件,为进行细胞电生理实验提供胞膜完整、活性良好的胰岛细胞。方法水合氯醛腹腔麻醉,采用胶原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化大鼠胰岛,并分离、培养胰岛单细胞。结果采用该方法分离、纯化胰岛的获得率稳定;急性分离、培养的胰岛细胞12h～24h贴壁,（4～5）d胰岛细胞生长状态最佳,胞膜完整,折光性好。结论逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心为一种有效的分离、纯化胰岛细胞的方法,培养的胰岛细胞（4～5）d达到最佳状态,适合进一步研究的要求。

简介：植物细胞壁是由纤维素和果胶交联的蛋白质、多糖及其它无机成分构成的复合体。而伸展蛋白是高等植物初生细胞壁中一类最重要的结构糖蛋白，它可在各种病原物侵染的植物中积累，也可被各种诱导因子所诱导。因此它的合成在不同植物和不同诱导条件下是不同的，在番茄悬浮培养细胞能合成两种不同类型的伸展蛋白，而烟草愈伤组织能合成一种伸展蛋白。

简介：摘要目的探讨大鼠颅骨成骨细胞和骨细胞的分离纯化比较。方法对大鼠颅骨成骨细胞和骨细胞采用序列酶消化及EDTA整合法进行分析纯化，并进行染色，对活性进行检测。结果骨细胞有多个突触结构，形态比较丰满，呈现树枝状和星状，细胞之间都是通过突触相互连接的；成骨细胞呈现纤维细胞状形态和梭形细胞形态；经过Ⅰ型胶原免疫组化染色，骨细胞表达量低，为浅棕色，成骨细胞表达量高，为深棕黄色；经过BGP免疫荧光染色，骨细胞表达高，成骨细胞表达低；经过ALP免疫组化染色，成骨细胞的ALP活性高于骨细胞，呈现棕黄色。经过ALP活性检测，骨细胞ALP活性低于成骨细胞，两者比较具有统计学意义（P<0.05）。结论采用序列酶消化及EDTA整合法可以获得纯度较高的成骨细胞和骨细胞。

简介：摘要目的应用生物信息学技术对人类巨细胞病毒(HumanCytomegalovirus,HCMV)分子进行抗原表位预测,构建并表达具有多表位的重组融合蛋白并进行免疫原性鉴定.方法GenBank中查询HCMV氨基酸序列,利用BepiPred、ABCpred、BcePred、PREDICTED四种在线表位预测软件进行细胞表位预测,筛选出可能的抗原决定簇表位,构建、原核表达,并利用免疫印迹实验筛选出可用的表位抗原,原核表达出融合蛋白,用WesternBlot和ELISA检测其抗原性.结果综合预测分析结果,得出１３种可能的表位,构建出pET３２a原核表达载体,表达并纯化这１３种表位的融合蛋白,经免疫印迹技术筛选出gp５２、GB３、PP１５０－１、GB－５具有较强的抗原性表位,通过Ni２＋亲和柱纯化,对gp５２融合蛋白免疫印迹试验结果表明,蛋白抗原性较强;ELISA法鉴定具有较高的抗原性及特异性.结论在原核表达系统中能获得高效表达,纯化的融合蛋白具有较强的免疫反应性,对后期建立人HCMV免疫检测试剂提供了可能性.关键词预测软件;抗原表位;原核表达;纯化;鉴定中图分类号R３９２．１文献标识码B文章编号１００８－６３１５(２０１５)１２－０１４０－０１

简介：目的探讨大鼠胰腺干细胞体外分离、纯化的实验条件及其定向分化潜能。方法应用胰腺原位灌注V型胶原酶消化大鼠胰腺组织，100目滤网滤过，Ficoll400浓度梯度离心法分离胰腺干细胞，采用添加表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（hFGF）的培养基行体外培养。运用荧光免疫染色法检测细胞表面CK-19、Fdx-1、Nestin、Insulin和Glucagon蛋白，计算阳性细胞率。双硫腙（DTZ）染色鉴定诱导分化后的细胞，光电酶标记法ELISA检测胰岛素分泌功能。结果本实验获取的胰腺干细胞，体外培养可稳定传代培养8代以上。细胞表面CK-19、Pdx-1和Nestin蛋白均呈阳性，阳性细胞率分别为（88．6±6．2）％、（84．6±8．6）％和（81．3±7．5）％。诱导分化后细胞经DTZ染色呈棕红色。在高糖刺激下，培养上清液中胰岛素含量增高。结论本法可获取高纯度、多数量的胰腺干细胞，在人工诱导下可定向分化为具有胰岛素分泌功能的胰岛样细胞团，为临床胰岛移植获得足量细胞来源提供实验基础。

简介：摘要通过探讨脐血间充质干细胞(MSC)的培养纯化条件，得出结论脐血中含有MSC，可以作为细胞移植的种子细胞。

简介：目的报道一种新的雪旺细胞提纯方法一改良冷喷注法，并与其他2种方法进行对比，评价其优缺点。方法分离新生6d的Wistar大鼠双侧坐骨神经，双酶消化法分离雪旺细胞，用S-100免疫细胞化学染色方法对雪旺细胞进行鉴定。将收集到的细胞分为3组，分别应用冷喷注法、改良冷喷注法和酶消化法对细胞进行纯化，计算纯化后的细胞纯度，流式细胞仪测定细胞活性。结果改良冷喷注法提纯出的雪旺细胞，纯度和细胞活性与冷喷注法比较差异无统计学意义（P〉0．05），但二者均高于酶消化组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论改良冷喷注法提纯雪旺细胞的优点是操作简便，获得雪旺细胞纯度高且不影响细胞活性，缺点是对操作者实验操作技术和经验要求相对较高，初学者不易掌握。

简介：目的通过舍生长因子的无血清培养基（SFM）培养Hep-2喉癌细胞，分离并扩增肿瘤干细胞，为进一步制备放疗增敏剂做基础研究。方法含生长因子的无血清培养基（SFM）培养Hep-2喉癌细胞，流式细胞仪检测细胞中侧群细胞的比例。当侧群细胞比例达25％时，收集全部细胞球，FAcs筛选出CD133^＋、CD44^＋细胞作为喉癌干细胞。结果成功培养出侧群细胞，流式细胞仪检测其比例达26．2％，FACS筛选出CD133^＋CD44^＋细胞的比例均〉91％。结论成功培养出高浓度喉癌干细胞。

简介：目的：对大肠杆菌表达的人源重组肝细胞生长肽进行分离纯化获得目的蛋白rhALR。方法：其表达产物在大肠杆菌中以不溶性包含体形式存在，经过超声破菌、包含体抽提、洗涤处理、使包含体纯度达75％以上，用8mol/L尿素变性溶解包含体沉淀后上清直接稀释复性，再经浓缩、透析、离子交换凝胶过滤等系列纯化步骤。结果：纯化后目的蛋白纯度达95％以上。回收率达20％。

简介：目的：分离、培养、纯化家猫的骨髓间充质干细胞，并对获得细胞的表面标志物进行鉴定，为进一步利用骨髓间充质干细胞的细胞移植实验奠定基础。方法：采用全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化家猫骨髓间充质干细胞，通过多次更换培养液获得较纯化的骨髓间充质干细胞，倒置相差显微镜下对细胞形态进行观察；根据第1、3、5、7、9代细胞的镜下增殖情况绘制出生长曲线；通过流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD34、CD44和CD90的表达率。结果：在倒置相差显微镜下观察，分离培养的骨髓间充质干细胞贴壁呈梭形或纺锤形；原代细胞生长丛集成片，5～7d达到融合，进行传代；培养到第三代以后，细胞出现相对均匀的梭形扁平外观，迅速增殖的细胞呈涡流样排列；第3、5代骨髓间充质干细胞增殖能力强于第7、9代；采用流式细胞仪分析结果显示细胞的CD34、CD44和CD90阳性率分别为17．5％、97．9％和91％，这与骨髓间充质干细胞表面抗原的表达一致。结论：分离培乔的细胞具有骨髓间充质干细胞特性，成分相对单一，第3、5代细胞纯度高，增殖能力强，适用于进一步的实验研究.

简介：　　本实验首次报道重组hHSS融合蛋白的表达和纯化,　　1.4GST-hHSS融合蛋白的纯化与含量的测定将方法1.3中提取的可溶性蛋白和包涵体蛋白,取诱导前细菌总蛋白(30μg)、未纯化的细菌可溶性蛋白及包涵体蛋白(各30μg)、纯化的可溶性融合蛋白及包涵体融合蛋白(各3μg)

简介：目的利用哺乳动物细胞表达含有西尼罗病毒（WNV）prM和E蛋白，形成病毒样颗粒（virus-1ikepartcles，VLPs），为西尼罗病毒感染的免疫诊断试剂的研制奠定基础。方法筛选典型西尼罗病毒株，构建重组质粒，转染293T细胞，表达并纯化西尼罗病毒prM-E蛋白，利用透射电镜、免疫印迹试验、间接免疫荧光实验0FA）和酶链免疫吸附试验（ELISA）对表达产物进行鉴定。结果重组质粒转染细胞后产生病毒样颗粒（viruslikeparticlesVLPs），转染细胞上清纯化物中透射电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒，免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明，表达的病毒样颗粒蛋白能够与抗西尼罗病毒抗体特异结合，具有良好的抗原性；间接ELISA证实，重组蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体。结论在哺乳动物细胞中表达的西尼罗病毒样颗粒具有良好的抗原性，为西尼罗病毒感染快速特异诊断试剂研制奠定了基础。

简介：摘要：介绍水电解纯化设备纯化干燥过程的原理，干燥塔三塔流程零排放，并对纯化系统装置故障及排除方法研究分析。一般氢气纯化干燥再生工艺中，干燥器再生时加热吹除和冷却吹除过程要排放含有水汽的氢气。其排放量为整个生产产品氢气气量10-15%，这就造成了能源的浪费增加利润生产成本。因为水电解制氢生产主要用电，生产一立方氢气需要消耗5-6度电。实现再生气零排放的经济效益非常可观。介绍干燥器干燥氢气纯化工艺，其再生气零排放工艺利用生产本身的动力进行再生循环，使用冷冻水降低再生气出口温度排除大量的水分，是干燥再生过程零排放工艺实现。

简介：摘要：介绍水电解纯化设备纯化干燥过程的原理，干燥塔三塔流程零排放，并对纯化系统装置故障及排除方法研究分析。一般氢气纯化干燥再生工艺中，干燥器再生时加热吹除和冷却吹除过程要排放含有水汽的氢气。其排放量为整个生产产品氢气气量10-15%，这就造成了能源的浪费增加利润生产成本。因为水电解制氢生产主要用电，生产一立方氢气需要消耗5-6度电。实现再生气零排放的经济效益非常可观。介绍干燥器干燥氢气纯化工艺，其再生气零排放工艺利用生产本身的动力进行再生循环，使用冷冻水降低再生气出口温度排除大量的水分，是干燥再生过程零排放工艺实现。

简介：对我室克隆的小鼠胎肝基质细胞林(MFLSC株)的无血清培养上清中的造血活性物质进行了初步纯化。通过离子交换层析和凝胶过滤层析两步分离,从中得到一高活性的造血刺激因子,称为基质细胞造血刺激因子-1(SHF-1)。经凝胶过滤及电泳结果估测,此因子是分子量约为70kD的单体蛋白,耐碱,较耐热。在体外它对小鼠骨髓粒系、红系祖细胞、多向祖细胞及多能造血干细胞均有刺激作用。

简介：目的观察白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）、白细胞介素-12（interleukin-12,IL-12）对于纯化培养条件下视网膜神经节细胞（retinalganglioncells,RGCs）生存率的影响,进一步探讨自身免疫调节紊乱与视网膜神经节细胞损害之间的关系。方法应用抗小鼠Thy1.2抗体粘附两步纯化法,得到纯化的小鼠视网膜神经节细胞。Thy1.2单克隆抗体联合神经微管蛋白-2多克隆抗体对RGCs进行免疫细胞化学双标记法鉴定RGCs纯度。TUNEL染色法检测凋亡细胞、通过细胞形态学观察计数细胞。实验分为两个阶段,首先观察IL-4和IL-12对RGCs的直接影响;然后观察在NMDA兴奋性毒性作用下IL-4和IL-12对于RGCs的影响。结果正常培养条件下,除10U/mLIL-4外,IL-4和IL-12其余浓度组的RGC存活率均较对照组降低（P〈0.0083）;当有NMDA存在时,1、10、100U/mL的IL-4和IL-12浓度组的RGCs存活率分别为79.2%、87.2%、69.5%及77.5%、76.4%和73.7%,均较单纯NMDA处理组的RGCs存活率62.25%明显提高（P〈0.0083）。结论纯化的RGCs培养条件下,IL-4和IL-12不具有直接的神经保护作用,但具有增强细胞对抗NMDA兴奋性毒性损伤的作用,提示自身免疫调节紊乱可能损伤RGCs,与青光眼等发病有关。

简介：背景：骨髓间充质干细胞在骨髓中的含量极低,体外的长期培养过程中易丧失干细胞潜能以及体内移植后安全性等问题的存在,限制了骨髓间充质干细胞在临床上的广泛应用。目的：探索体外分离纯化、冻存大鼠骨髓间充质干细胞的最适方法,并观察以此方法培养的骨髓间充质干细胞移植体内后是否具有成瘤性。方法：分别采用差速贴壁结合24h首次换液、24h首次换液、48h首次换液的方法纯化培养骨髓间充质干细胞,筛选最适纯化方法进行后续实验。配制含体积分数为10%,20%,30%,40%,50%胎牛血清的细胞冻存液冻存细胞,复苏后计算细胞存活率,测定复苏后细胞的生长曲线及成脂诱导能力。将第3,15代骨髓间充质干细胞进行裸鼠肌肉、肝脏局部注射体内移植,45d后取注射部位行病理组织标本检查。结果与结论：差速贴壁结合24h首次换液法所获得骨髓间充质干细胞纯度最高,而细胞增殖能力与其他两组无明显差别,因此选用该方法纯化骨髓间充质干细胞,然后进行传代培养;含体积分数为30%血清冻存液既可保证细胞活性与增殖能力,又可保证干细胞特性及多向分化潜能。骨髓间充质干细胞传至15代仍保持间充质干细胞特性,骨髓间充质干细胞移植入裸鼠肝脏45d后仍可在肝脏局部存活,生长状态与体外培养相似,无异型性及向周围浸润生长,提示体外长时间培养15代以内的骨髓间充质干细胞可在裸鼠体内存活且无成瘤性。

简介：目的:利用昆虫细胞表达系统真核表达并纯化小电导钙激活钾离子通道蛋白1(KCNN1)。方法:以基因重组方法构建杆状病毒穿梭质粒reBacmid-KCNN1,将其转染至杆状病毒/Sf9细胞表达系统表达目的蛋白,并用Western印迹鉴定KCNN1的表达水平;用Ni-IDA-SepharoseCL-6B亲和层析柱纯化裂解细胞上清中的KCNN1,并用Western印迹鉴定纯化结果。结果:KCNN1在Sf9细胞中高效表达,通过亲和层析获得了纯化的KCNN1。结论:膜蛋白KCCN1在昆虫细胞Sf9中的表达与纯化,为深入研究其分子生物学功能提供了材料,也为全长膜蛋白的体外表达提供了一套可借鉴的实验方法。

简介：