简介：

简介：内皮细胞是一个非造血细胞，却表达和／或产生大多数已知的造血受体和细胞因子，这些因子和受体的生物学作用仍不十分清楚，目的：本研究旨在探求内皮细胞自然产生IL－6及其生物学功能。试图阐明IL－6在造血调控中的作用，在建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型的基础上，收集原代培养内皮细胞1－9天培养上清液，离心，－20℃保存备用。采用双抗夹心ELISA法对上清液中IL－6进行定性和定量测定。结果：在未知任何刺激因素的条件下，从培养的人脐静脉内皮细胞培养上清液中可测及IL－6（735．3801±883．53pg/ml)，随着内皮细胞培养天数的增加，IL－6的释放量也随之增加，在第6天时接近释放峰值IL－6（2808．61pg/ml)，结论：体外培养的人脐静脉内皮细胞具有自然分泌IL－6的功能，IL－6对各系造血祖细胞的增殖均起促进作用。本研究为内皮细胞支持各系造血干／祖细胞的增殖和分化提供了理论依据。

简介：体外培养人脐静脉内皮细胞的光电镜观察姚忠祥，蔡文琴第三军医大学重庆６２００３８Ｐｕｐｎｉｃｋ等在培养微血管内皮细胞时，观察到内皮细胞具有多种不同的形态，并推测其原因可能是它们来源于不同节段的微血管。本研究取正常人足月产胎儿脐静脉内皮细胞体外培养，第五...

简介：目的利用已经构建好的腺相关病毒-人组织激肽释放酶基因重组体(rAAV-HTK),感染体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察HUVEC细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、凋亡蛋白酶(caspase-3)、内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素B1受体(ETR-B1)以及缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量变化情况,探讨利用rAAV-HTK治疗高血压、缺血性心脏病的可行性.方法将已经构建好的rAAV-HTK重组质粒感染体外培养的HUVEC细胞,应用半定量RT-PCR方法检测感染rAAV-HTK前后HUVEC中eNOS、caspase-3、ET-1、VEGF、ETR-B1以及缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量变化情况.结果转染有rAAV-HTK的HUVEC细胞内其细胞内eNOS的mRNA合成量增加,caspase-3的mRNA表达量降低,VEGF、ET-1、ETR-B1、缓激肽B1受体、缓激肽B2受体的mRNA表达量没有变化.结论rAAV-HTK重组体感染HUVEC细胞能够使HUVEC细胞内eNOS的mRNA表达量增高,caspase-3的mRNA表达量减低,提示HTK能够改善内皮细胞功能,转HTK能够应用于高血压等血管内皮功能异常的心血管疾病的基因治疗.

简介：摘要目的探索慢病毒感染人脐静脉内皮细胞研究。方法本实验共分为四组，即在细胞培养液中分别加入不同的慢病毒感染复数（MOI)空白对照组MOI为0，三个实验组MOI值分别为5、10、50。每组将进行2种不同的感染方法，并于感染48h后观察慢病毒感染效果。结果当MOI值为0时均未见荧光。MOI值为5时，2种条件下均可见荧光，L+P组强于L组。MOI值为10时,2种感染条件下均可见较强荧光，L+P组更强，病毒感染率可达90%。MOI值为50时，感染率下降，出现细胞死亡现象，L+P培养条件下细胞死亡更明显。结论MOI值为10时，L+P组的感染效果最佳，感染率可达90%，能满足后续实验的需求。

简介：目的观察Parthenohde对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖和凋亡的影响。方法胶原酶消化法培养HUVEC，在HUVEC培养基中加入不同浓度的Parthenolide作用不同的时间，以MTT法检测细胞的增殖活性，TUNEL法检测细胞凋亡。结果与对照组相比，1、5μmol／LParthenolide组对脐静脉内皮细胞增殖活性的抑制作用无明显影响（P〉0．05）；10、15、20μmol／LParthenohde组显著抑制HUVEC的增殖活性（均P〈0．01），并且呈时间依赖性和剂量依赖性增加。5μmol／LParthenolide组在6h、12h、24h时，细胞凋亡指数与对照组相比均无统计学差异（均P〉0．05），10、15μmol／LParthenofide组在6h、12h、24h各个时间段的凋亡指数均高于对照组（均P〈0．01）；且Parthenolide10μmol／L和15μmol／L组在12和24h的凋亡指数均高于6h（P〈0．01），但12和24h上述两组相比无统计学差异（P〉0．05）。结论一定浓度范围内的Parthenolide对内皮细胞的增殖和凋亡无明显影响，而高浓度时可同时抑制细胞增殖和诱导HUVEC凋亡。

简介：目的：探讨虾青素对脐静脉内皮细胞（HUVEC）的抗氧化作用。方法：体外培养HUVEC,分为空白组、模型组（H2O22mmol/L）、虾青素＋H2O2组（0.1,1,10μmol/L虾青素预处理48h后,加2mmol/LH2O2处理1h）。用MTT法检测细胞的存活率,DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,JC-1法检测线粒体膜电位,AnnexinV-FITC流式细胞术和DAPI法检测细胞凋亡,westernblot法检测Caspase-3和p53蛋白表达。结果：与空白组相比,H2O2能明显造成HUVEC细胞的凋亡和坏死。虾青素可以降低H2O2引起的细胞死亡,减少活性氧的产生,使线粒体膜电位升高,凋亡率减少,Caspase-3和p53的表达下调。结论：虾青素对H2O2引起的HUVEC细胞死亡具有保护作用,其机制可能与保护线粒体功能有关。

简介：摘要目的探讨人脐静脉内皮细胞（HUVECs）原代培养的方法，为体外研究血管内皮细胞功能提供实验基础。方法取健康剖宫产新生儿脐带15-20cm，2h内用0.1%II型胶原酶37℃孵育12min得细胞，用改良M199培养液于37℃，5%CO2培养箱中培养，倒置显微镜下观察细胞形态特点，免疫组织化学染色进行细胞鉴定，管腔形成实验观察细胞传代后小管形成能力变化。结果采用0.1%II型胶原酶灌注法及改良培养基可相当数量、细胞形态良好的HUVECs，利用Ⅷ因子相关抗原进行鉴定得到纯度大于99%，且传代后管腔形成能力与原代细胞无差别（P<0.05）。结论用0.1%II型胶原酶分离方法和改良的M199培养基可得到数量多、形态好、功能稳定的人脐静脉内皮细胞，可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。

简介：1目的通过检测间歇低氧刺激下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的凋亡率、炎性因子及氧化应激因子的水平．探讨不同间歇低氧暴露时间对HUVECs损伤的影响。方法：分别给予HUVECs间歇低氧刺激（1％0，5min；21％0，10min）及常氧（对照组）处理。在不同的间歇低氧暴露时间点应用膜联蛋白（annexin）V-异硫氰酸荧光素（FITC）／碘化丙啶（PI）检测细胞凋亡率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定细胞上清液中自介素（IL）-6和IL-8水平，分光光度法检测上清液中丙二醛（MDA）水平。结果：间歇低氧处理12、16、20和24h的细胞凋亡率逐渐增高，且均高于对照组（P〈0．01），间歇低氧处理的细胞上清液中IL-6水平均显著高于对照组（P〈0．01），在4、8、12、16h各时间点逐渐升高，并于16h达到高峰[（251．40±49．45）ng／L]。间歇低氧处理8、12、16、20和24h的细胞上清液内的IL-8和MDA水平均明显高于对照组（P〈0．01），且分别于20h和16h达到峰值[IL-8：（737．70±31．08）ng／L；MDA：（2．55±0．04）／μmol／L]。结论：间歇低氧刺激可导致HUVECs凋亡增加．炎症反应和氧化应激水平升高，在间歇低氧刺激一定时间后达到高峰。

简介：摘要目的研究姜黄素对棕榈酸(PA)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法以体外培养的HUVECs为研究对象,建立PA诱导的胰岛素抵抗模型,观察姜黄素对其保护作用。结果经姜黄素预处理的HUVECs能显著改善PA诱导的损伤,改善胰岛素抵抗。结论姜黄素对PA诱导的HUVECs损伤具有一定的保护作用。

简介：摘要目的探讨胺碘酮对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的损伤作用及可能的机制。方法取经过3代培养的HUVEC接种于96孔板，加入0、10、20、30或60 μmol/L胺碘酮培养24 h，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测细胞活力，以0 μmol/L组细胞活力为100%，计算各加药组的相对细胞活力。选择可将细胞活力降至70%左右的胺碘酮浓度用于后续各项实验。采用CCK-8法检测该浓度胺碘酮作用不同时间（6、12、24、36、48 h）对HUVEC活力的影响。以加入该浓度胺碘酮培养的HUVEC为实验组，不加入者为对照组，采用钙依赖性磷脂结合蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法流式细胞术检测细胞凋亡率；蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法分别检测B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、白细胞介素10（IL-10）、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）蛋白和mRNA表达水平；2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测活性氧（ROS）含量，水溶性四氮唑-1法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性，微板法检测还原型谷胱甘肽（GSH）含量。结果经10、20、30、60 μmol/L胺碘酮作用24 h的各加药组HUVEC活力与对照组（100%）相比分别为（88.82±2.64）%、（74.96±1.75）%、（64.95±2.10）%和（18.57±0.65）%，各加药组与对照组比较以及加药组之间两两比较均P<0.01。选择30 μmol/L胺碘酮用于后续实验。经30 μmol/L胺碘酮作用6、12、24、36、48 h的各实验组HUVEC活力与对照组（100%）相比分别为（90.19±1.88）%、（82.81±2.51）%、（75.33±1.37）%、（65.76±1.85）%和（47.01±3.29）%，各实验组与对照组比较以及实验组之间两两比较均P<0.01。实验组细胞凋亡率明显高于对照组（48.59%比16.34%，P<0.01），促凋亡蛋白Bax和caspase-3以及促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白和mRNA表达水平均高于对照组（均P<0.01），而抗凋亡蛋白Bcl-2和抗炎因子IL-10的蛋白和mRNA表达水平均低于对照组（P<0.05，P<0.01）。结论胺碘酮可导致HUVEC损伤，这种损伤作用随胺碘酮浓度升高和作用时间延长而增强；胺碘酮可能通过诱导细胞凋亡、炎症反应及氧化应激导致HUVEC损伤。

简介：目的研究miR-34a对脐静脉内皮细胞端粒酶活性及细胞衰老的影响。方法原代培养人脐静脉内皮细胞（Humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs），通过传代培养，计算细胞群体倍增水平（Populationdoublings，PDL），得到年轻的内皮细胞（PDL8）及衰老细胞模型（PDL44），检测两组细胞SIRT1、hTERT、c-myc、p53及miR-34a表达水平的差异。并在PDL8细胞中过表达miR-34a，PDL44细胞中抑制miR-34a的表达，qmCR检测以上基因表达水平、TRAP-qPCR法检测端粒酶活性、SA-β-gal法显示细胞衰老状态的变化。结果SIRTl、hTERT、c-myc基因在PDL44的HUVECs细胞中表达下调，p53及miR-34a表达上调。PDL8HUVECs过表达miR-34a48h后，SIRT1和hTERT表达分别下调43％和25％，TRAP．qPCR显示端粒酶活性降低21％，SA-β-gal法染色阳性细胞百分比由5．1％上升至8．7％；PDL44HUVECs抑制miR-34a的表达，SIRT1和hTERT表达水平分别上调63％和30％，端粒酶活性上升20％，SA-β-gal法染色显示衰老细胞数量未见显著性变化。结论MiR-34a可以抑制内皮细胞SIRT1、hTERT基因表达及端粒酶活性，加速细胞衰老；抑制miR-34a可以上调SIRT1及hTERT表达，端粒酶活性升高；因此miR-34a可能通过抑制SIRT1表达和端粒酶活性的共同作用，参与内皮细胞衰老的调节。

简介：摘要目的探讨自噬是否参与调节亚砷酸钠诱导的人脐静脉血管内皮细胞功能失调。方法分离培养人原代脐静脉内皮细胞，不同剂量亚砷酸钠处理24 h，分别为0（对照）、2、5、10、20、30、50 μmol/L，CCK8法检测细胞活力。根据细胞活力结果确定后续实验染砷剂量，流式细胞术检测细胞内一氧化氮（NO）含量（亚砷酸钠处理4 h），蛋白免疫印迹法（Western blot）检测自噬标志蛋白LC3表达（亚砷酸钠处理0、6、12、24 h），电镜检测自噬体（亚砷酸钠处理12 h）。同时，以0.1 mmol/L 3-MA（自噬抑制剂）预处理人原代脐静脉内皮细胞2 h，然后30 μmol/L亚砷酸钠诱导，与单独30 μmol/L亚砷酸钠组比较上述检测指标。结果成功分离培养人原代脐静脉内皮细胞。与对照组[细胞活力：（99.97 ± 5.33）%，NO含量：42 048.34 ± 789.61]比较，30 μmol/L亚砷酸钠组细胞活力[（73.00 ± 0.86）%]显著下降，细胞内NO含量（23 353.97 ± 971.85）显著降低，差异有统计学意义（P均< 0.01）。30 μmol/L亚砷酸钠分别处理6、12和24 h，LC3Ⅱ表达水平（5.782 ± 2.789、9.692 ± 2.222、5.573 ± 2.941）明显高于处理0 h（1.000 ± 0.383，P均< 0.05），其中12 h时LC3Ⅱ表达水平最高。30 μmol/L亚砷酸钠处理12 h，电镜下观察细胞内自噬体明显多于对照组。与单独30 μmol/L亚砷酸钠组[细胞活力：（68.78 ± 1.55）%；LC3Ⅱ表达水平：5.680 ± 0.545；NO含量：13 025.78 ± 962.61]比较，3-MA预处理组细胞活力[（79.54 ± 4.99）%]升高，LC3Ⅱ表达水平（3.956 ± 0.398）下降，差异有统计学意义（P均< 0.05）；细胞内NO含量（13 988.51 ± 1 671.07）差异无统计学意义（P > 0.05）。结论自噬参与砷诱导的人脐静脉血管内皮细胞功能失调。

简介：目的观察阿托伐他汀对人脐静脉内皮细胞增殖（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC）及超微结构的影响.方法将HUVEC分为3组进行培养,包括正常对照组、重组人白细胞介素-6（rhIL-6）刺激组和阿托伐他汀组.通过MTT法测定各组细胞的增殖活力,并用透射电镜观察各组细胞超微结梅的改变.结果①正常对照组、rhIL-6组及阿托伐他汀组的吸光度（A）分别为0.172±0.014、0.257±0.058及0.184±0.021;②rhIL-6作用下,HUVEC粗面内质网上核糖体较对照组明显增多,而阿托伐他汀可抑制rhIL-6对HUVEC的这种超微结构改变.结论阿托伐他汀能有效抑制rhIL-6,进而阻止HUVEC增殖.

简介：目的观察人骨髓间充质干细胞（Humanbonemarrowmesenchymalstromalcells,hBMSCs）与脐静脉内皮细胞（Humanumbilicalveinendothelialcells,hUVECs）体外共培养对hBMSCs成骨作用及hUVECs成血管功能的影响。方法分离鉴定hBMSCs和hUVECs,将hBMSCs及hUVECs按1∶1比例直接共培养,倒置相差显微镜观察细胞的生长特性和细胞相容性,Matrigel实验观察共培养对hUVECs体外血管形成能力的影响。将hBMSCs成骨诱导7d后,茜素红染色观察共培养对其成骨分化能力的影响。结果hBMSCs与hUVECs体外共培养细胞相容性良好,Matrigel实验显示共培养组形成的毛细血管状结构较单一细胞组多。成骨诱导的hBMSCs中,共培养组茜素红染色阳性,单一细胞组茜素红染色阴性。结论hBMSCs与hUVECs具有良好的细胞相容性,在共培养体系中,未诱导的hBMSCs能促进形成毛细血管状结构,已成骨诱导的hBMSCs成骨矿化能力增强。

简介：目的探讨体外条件下核受体Peroxisomeproliferator-activatedreceptorgamma（PPAR-gamma）激动剂罗格列酮（RosiglitazoneRGZ）对人腹膜间皮细胞（humanperitonealmesothelialcellsHPMCs）、人脐静脉内皮细胞（HumanUmbilicalVeinEndothelialCellsHUVECs）水孔蛋白-1（aquaporin1AQP1）增殖以及基因水平的影响。方法以HPMCs和HUVECs为研究对象,将实验分成四组：对照组、RGZ组（10uMRGZ）、GW9662组（peroxisomeproliferator-activatedreceptorgammaantagonist20uMGW9662）以及GW9662＋R组（20uMGW9662提前作用1H后加入10uMRGZ）。应用比色法（CCK-8）观察RGZ等对HPMCs和HUVECs增殖的影响。应用Realtime-PCR方法检测罗格列酮等对水孔蛋白-1基因水平表达的影响。结果①GW9662＋R组与对照组相比,可以明显抑制HPMCs增殖（P〈0.01）,其他组对HPMCs增殖没有明显影响（P〉0.05）。而对HUVECs,RGZ组、GW9662组以及GW9662＋R组都可以促进其增殖（P〈0.01）;②罗格列酮上调这两种细胞AQP1基因水平的表达。结论在体外,罗格列酮可影响HPMCs和HUVECs水孔蛋白质1基因水平的表达。其作用机制可能是通过激活PPAR-gamma从而影响上述两种细胞的AQP1的表达。

简介：目的探索在AngII干预下ACE2基因表达增加对人血管内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法原代培养人脐静脉血管内皮细胞。用构建、包装好的慢病毒重组ACE2基因表达载体（Lentiviral—ACE2）以感染复数为10（MOI=10）感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。感染72h后，以AnglI（终浓度为10。mol／L）干预细胞，倒置相差显微镜观察各组HUVEC的形态学变化，AlamarBlue试剂检测各组HUVEC增殖功能，TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测各组HUVEC的凋亡。结果AngⅡ组与AngII＋Lentiviral—GFP组细胞生长状态差，生长缓慢，形态不规则并且有不同程度脱壁悬浮的细胞；而正常细胞对照组与AngII＋Lentiviral—ACE2组细胞生长状态良好，圆形、卵圆形，饱满，形态正常呈“铺路石”样生长，紧密贴壁，悬浮细胞少。AngII组较正常细胞对照组、Ang1I＋Lentiviral—ACE2组AlamarBlue被还原率明显降低（P〈O．05）。Ang11组的凋亡指数为（0．1165±0．0181），与正常细胞对照组凋亡指数（0．0373±0．0113）和AngⅡ＋Lentiviral—ACE2组凋亡指数（0．0540±0．0061）相比差异有统计学意义（P〈0．05）。AngII组与AngⅡ＋Lentiviral—GFP相比、正常细胞对照组与AngII＋Lentiviral—ACE2组相比，AlamarBlue被还原率和凋亡指数差异无统计学意义。结论AngⅡ具有促进人脐静脉内皮细胞增殖能力下降和凋亡增加的作用。ACE2表达增~IIII抑制AngⅡ诱导的人脐静脉内皮细朐增殖活件降低和凋亡增加．对人脐静脉内皮细胞具有保护作用。

简介：目的观察溶血磷脂酰胆碱（Lysophosphatidylcholine,LPC）对人脐静脉内皮细胞（Humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs）血管紧张素系统的影响。方法体外培养HUVECs,分为正常对照组、低浓度（10μg/L）LPC组、中浓度（20μg/L）LPC组和高浓度（40μg/L）LPC组。采用放射免疫法和RT-PCR法检测LPC对HUVECs血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）蛋白及AngⅡ1型受体（An—giotensinⅡtype1receptor,AT1R）、AngⅡ2型受体（AngⅡtype2receptor,AT2R）mRNA表达的影响。结果与正常对照组相比,LPC可显著上调HUVECsAngⅡ蛋白及AT1RmRNA的表达。结论LPC能够上调人脐静脉内皮细胞血管紧张素系统部分组分的表达。

简介：目的初步探讨永生化人脐静脉内皮细胞（Humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC）构建血管瘤疾病模型的可行性。方法永生化HUVEC与猪骨髓间充质干细胞（BMSC）分别在普通的DMEM培养液（含10％FBS）中贴壁培养至完全融合后，胰酶消化为单细胞悬液；细胞计数后按不同细胞组合分组，与Matrigel混合后分别注射至裸鼠皮下，移植后1周及5周取材，HE染色观察血管生成情况。结果1周后HE所见：空白组与单纯注射BMSC组均无管样结构形成：单纯注射HUVEC组和注射混合细胞组均有管样结构形成。5周后HE所见：空白组被吸收；单纯注射BMSC组可见大量的脂肪组织；注射单纯HUVEC组以及混合组可见血管样结构存在。结论HUVEC在裸鼠皮下注射具有形成血管的能力，有望构建增生期血管瘤模型。

简介：摘要目的探讨脑源性微囊泡(BDMVs)对脐静脉内皮细胞骨架的影响。方法体外制备BDMVs，并予透射电镜观察及粒径检测。将PKH26荧光染料标记的BDMVs与脐静脉内皮细胞共培养0.5 h、1 h、2 h后，应用流式细胞术检测不同时间点的脐静脉内皮细胞吞噬BDMVs情况。将体外常规培养的脐静脉内皮细胞分为对照组、BDMVs组(加入终浓度1.5×107/mL的BDMVs处理细胞)及尼莫地平组[予2 μg尼莫地平(0.2 mg/mL)预处理10 min后加入终浓度1.5×107/mL的BDMVs处理细胞]，应用激光共聚焦显微镜观察罗丹明标记鬼笔环肽染色后各组脐静脉内皮细胞中纤维型肌动蛋白的荧光强度及应力纤维数目。结果透射电镜下可见体外制备的BDMVs具有完整的膜结构，粒径范围为100~1000 nm。流式细胞术检测显示，吞噬BDMVs的脐静脉内皮细胞比例随培养时间的延长呈时间依赖性升高(0.5 h：22.7%±1.2%；1 h：52.3%±1.3%；2 h：71.6%±1.9%)，各时间点间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察显示，与对照组相比，BDMVs组中纤维型肌动蛋白的荧光强度明显升高且应力纤维数目明显增多增粗；而与BDMVs组相比，尼莫地平组中纤维型肌动蛋白的荧光强度明显降低且应力纤维数目明显减少变细。结论脐静脉内皮细胞吞噬BDMVs的作用随时间延长而增强，且吞噬BDMVs后可导致细胞骨架重构，而尼莫地平可部分阻断该作用。