简介:目的选择弓形虫RH株主要表面抗原P30、P22的有效基因片段和霍乱毒素A2/B亚基共同构建在同一真核表达载体pcDNA3.1(-)上,并保证其连接方向和开放读码框的正确.方法用PCR技术分别从弓形虫RH株基因组DNA和pUAB024-CTXA28/B质粒中扩增编码P30、P22基因片段和CTXA2/B,定向重组入pUC18克隆载体,然后酶切释放P30-P22-CTXA2/B复合基因片段,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,再经含氨苄青霉索的LB培养基筛选、酶切及测序鉴定.结果酶切产物经电泳显示条带清晰,P30、P22和CTXA2/B基因片段的泳动位置分别在786bp、492bp、512bp的位置,与预计结果一致;测序结果表明插入的基因片段方向及序列均正确.结论成功地构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B,保证了三个基因连接方向,序列及开放读码框的正确,为下一步融合蛋白P30-P22-CTXAA/B在哺乳动物细胞中的表达及动物实验奠定了基础.
简介:CCAAT/enhancer有约束力的蛋白质α(C/EBPα)是transcriptional禁止细胞增殖的规章的因素,和其他的翻译开始生产二多肽,C/EBPαp30并且C/EBPαp42。由表示介绍,C/EBPαp30specifically禁止了基因的一个唯一的集合,这被揭示,包括MPP11,p84N5和SMYD2,它没被C/EBPαp影响42在两根QSG-7701hepatocyte房间线和QGY-7703hepatoma,cells.Semi量的RT-PCR分析独立地证实了这些结果。Chromatinimmunoprecipitation试金显示出30比C/EBPαp更强烈绑了在这些基因的倡导者的那C/EBPαp42。在C/EBPα是调整的down的临床的hepatoma在样品,所有三基因明确地由30在上面的C/EBPαp禁止了调整。然而,MPP11,p84N5和SMYD2genes的压抑可能直接不涉及C/EBPαp30-mediated生长抑制。我们的数据建议30调整的那C/EBPαp目标基因的一个唯一的集合并且多于C/EBPαp的dominant-negativeregulator42。