简介:目的:构建白细胞介素7(IL-7)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)共表达的重组腺病毒载体,为进一步感染干细胞奠定基础。方法:将目的基因IL-7克隆到含有报告基因EGFP的穿梭质粒中,然后再将构建的重组穿梭质粒转移至pAdxsi载体中,构建重组腺病毒载体质粒,继而在H293细胞中扩增,纯化后测定病毒滴度。结果:pShuttle-EGFP-mIL7重组穿梭质粒经酶切鉴定得到0.5kb和5.1kb2条带;pAdxsi-EGFP-mIL7重组腺病毒载体质粒经酶切鉴定得到14K、11.8K、3.1kb、2.66kb、2.47K、1.45K、0.6K7条带;TCID50法测定纯化后的病毒滴度为2×10^10pfu/ml。结论:pAdxsi-EGFP-mIL7重组腺病毒载体构建成功。
简介:摘要目的研究慢性乙型肝炎(乙肝)患者血清IL-7与IL-21、乙型肝炎病毒(HBV)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)、HBV DNA载量、T淋巴细胞表面CD127表达的关系,探讨IL-7对细胞免疫的影响。方法收集2017年9月至2020年3月至北京友谊医院就诊的560例慢性乙肝患者血清标本,采用ELISA法检测IL-7和IL-21;流式细胞仪检测HBV特异性CTL和T淋巴细胞表面CD127表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测HBV DNA。根据IL-7检测结果(低、中、高),将研究对象分为A、B、C 3组(A组:IL-7<20 pg/ml; B组:20 pg/ml≤IL-7<30 pg/ml; C组:IL-7≥30 pg/ml)。结果慢性乙肝患者血清IL-7平均浓度显著低于健康对照组(P<0.01),3组检测值差异有统计学意义(P<0.01),同时3组患者IL-21、HBV特异性CTL百分比、CD8+T淋巴细胞表面CD127的表达率也依次升高,3组检测值差异均有统计学意义(P<0.01),两两变量之间均呈正相关(P<0.01)。只有HBV DNA在A、B、C 3组呈下降趋势,3组检测值差异有统计学意义(P<0.01),与其他变量均呈负相关(P<0.01)。多重线性回归分析显示HBV特异性CTL是对HBV DNA回归分析的独立影响因素(P<0.01);IL-7、CD8+T淋巴细胞CD127表达、IL-21均是对HBV特异性CTL回归分析的独立影响因素(P<0.05)。结论慢性乙肝患者IL-7调节HBV特异性免疫应答,或可成为评价患者细胞免疫状态的有效细胞免疫指标。
简介:摘要目的观察脓毒症患者中膜型CD127(membrane-bound CD127,mCD127)和可溶型CD127(soluble CD127,sCD127)的表达,探讨IL-7调控脓毒症患者CD8+T细胞活性的机制。方法采用前瞻性研究队列,入组47例脓毒症患者和18例健康对照者,分离血清和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),纯化CD8+T细胞,酶联免疫吸附试验检测血清中IL-7和sCD127,流式细胞术检测CD8+T细胞表面mCD127表达,实时定量PCR法检测CD8+T细胞中总CD127 mRNA和sCD127 mRNA相对表达量。使用重组人IL-7刺激CD8+T细胞并抑制信号转导和转录激活因子5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)通路,检测CD8+T细胞表面mCD127表达、总CD127 mRNA和sCD127 mRNA相对表达量的变化,利用CD8+T细胞与MCF-7细胞共培养系统评估IL-7刺激后CD8+T细胞杀伤功能的变化。采用t检验或LSD-t检验进行统计分析。结果脓毒症患者血清中IL-7和sCD127水平均低于对照组[(101.82±12.58) pg/ml vs (111.07±11.10) pg/ml,P<0.01;(278.58±62.31) pg/ml vs (334.62±70.55) pg/ml,P<0.01],且两者水平呈正相关(r=0.46,P<0.01)。脓毒症患者CD8+T细胞中mCD127+CD8+T细胞比例和mCD127平均荧光强度均高于对照组(P<0.05)。脓毒症患者CD8+T细胞中sCD127 mRNA相对表达量低于对照组(1.34±0.33 vs 1.80±0.60,P<0.001)。重组人IL-7刺激后CD8+T细胞sCD127分泌水平、总CD127和sCD127 mRNA相对表达量升高(P<0.05),抑制STAT5后IL-7诱导的sCD127分泌水平、总CD127和sCD127 mRNA相对表达量降低(P<0.05),但抑制PI3K后IL-7诱导的sCD127分泌水平、总CD127和sCD127 mRNA相对表达量变化无统计学意义(P>0.05)。脓毒症患者CD8+T细胞诱导靶细胞死亡的比例低于对照组[(12.49±2.12)% vs (23.83±3.76)%,P<0.001],重组人IL-7刺激后CD8+T细胞诱导靶细胞死亡的比例升高(P<0.05),细胞因子和毒性颗粒分泌增加(P<0.05),抑制STAT5后IL-7诱导的CD8+T细胞杀伤功能减弱(P<0.05),但抑制PI3K后IL-7诱导的CD8+T细胞杀伤功能变化无统计学意义(P>0.05)。结论IL-7可增加sCD127分泌,通过STAT5信号通路增强脓毒症患者CD8+T细胞的体外杀伤功能。
简介:interleukin-24(IL-24)能在人的癌症的一个大系列导致apoptosis,是记录得好的MDA-7/IL-24基因的导出的房间线,而是效果在未知的老鼠黑瘤房间遗体上转。IL-24(pEGFP-IL-24)的真核细胞的表示plasmid被DNA再结合技术构造。再结合plasmid和空向量是进B16F0房间的transfected,IL-24的表情被LSM决定,B16F0房间的增长被MTT试金,和apoptosis率测量,B16F0房间的房间周期分发被FCM测量。在老鼠固体肿瘤的IL-24基因transfection的禁止的效果被观察并且测量。与控制相比,B16F0房间的增长被transfection与pEGFP-IL-24禁止,transfected房间的G2/M阶段也是increased.Moreover,在与pEGFP-IL-24与B16F0房间transfected接种以后,有可检测的肿瘤的鼠标的百分比被减少。在老鼠模型的肿瘤的生长率显著地与控制相比在IL-24基因治疗组被禁止。B16F0细胞的增长被pEGFP-IL-24的pEGFP-IL-24transfection.Theintratumor注射禁止能显著地在老鼠禁止稳固的肿瘤的生长。
简介:Objective:TostudythesynergiceffectsofIL-12andB7-1transfectantonantitumorimmunityinvivo.Methods:TheretrovirusvectorencodingmIL-12andmB7-1genewastranfectedintoEL-4thymiclymphomacellsrespectively.Thecellswereusedastumorvaccineandthetherapeuticeffectwasobserved.Results:IncontrasttothemiceimmunizedwithEL-4/WtorEL-4/Neogroups,thetumorigenicityofEL-4/IL-12transfectantwasdecreased(P<0.001).TheEL-4/IL-12andEL-4/B7-1cellsirradiatedwith60CoshowedsignificantsystematicprotectiveeffectsagainsttherechallengeofEL-4/Wt.60CoirradiatedEL-4/IL-12cellsdelayedtheoccurrenceoftumorandprolongedthesurvivalperiodoftumorbearingmice.CombinationofthevaccinesofEL-4/IL-12andEL-4/B7-1resultedintheenhancedtherapeuticeffectcomparedwitheachsingletransfectantgroup(P<0.001).Conclusion:TheresultsshowedthatIL-12transducedcellscouldenhancetheantitumorimmunityofhostascancervaccine.CombinationoftheEL-4/IL-12andEL-4/B7-1transfectantcouldimproveimmunityofhostandisaprospectcancervaccine.
简介:摘要目的探讨血清白细胞介素-6、8、10、22(IL-6、IL-8、IL-10、IL-22)水平在急性胰腺炎(AP)早期诊断中的价值。方法选择近3年滕州市中医院收治的123例轻度急性胰腺炎(MAP组)、37例中度和28例重度急性胰腺炎(MSAP+SAP组)患者以及30例健康体检者(对照组)作为研究对象。MAP组患者中男性70例,女性53例,年龄(43.7±13.7)岁;MSAP+SAP组患者中男性45例,女性20例,年龄(45.0±13.3)岁;对照组,其中男性17例,女性13例,年龄(45.3±11.8)岁。入院第1、3、7、10天采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清IL-6、IL-8、IL-10、IL-22水平,并比较分析其在急性胰腺炎早期诊断和病情严重程度判断中的价值。结果MSAP+SAP组第1天血清IL-6、IL-8、IL-22分别为(277.60±46.72)pg/ml、(99.84±18.66)pg/ml、(175.77±26.66)pg/ml,第3天分别为(231.47±57.72)pg/ml、(77.89±30.33)pg/ml、(140.97±44.31)pg/ml,第7天分别为(207.97±76.93)pg/ml、(68.59±38.11)pg/ml、(125.77±54.06)pg/ml,第10天分别为(187.21±89.94)pg/ml、(59.75±45.19)pg/ml、(111.44±61.54)pg/ml;MAP组第1天血清IL-6、IL-8、IL-22分别为(199.51±28.86)pg/ml、(97.36±19.05)pg/ml、(122.67±18.10)pg/ml,第3天分别为(148.30±30.94)pg/ml、(70.68±8.64)pg/ml、(94.00±13.53)pg/ml,第7天分别为(125.92±22.58)pg/ml、(52.04±6.82)pg/ml、(80.60±11.59)pg/ml,第10天分别为(97.36±19.05)pg/ml、(44.89±9.08)pg/ml、(59.46±17.28)pg/ml;两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。MAP组患者入院时血清IL-10水平升高,随后逐渐降低,第10天降至正常水平;MSAP+SAP组患者入院时血清IL-10水平略低于对照组,随后逐渐降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。AP患者血清IL-6、IL-8、IL-22水平与急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分均呈正相关,血清IL-10水平与APACHEⅡ评分呈负相关。ROC分析发现,血清IL-22水平对SAP的早期诊断效能最大(AUC=0.948),灵敏度及特异度分别为0.938和0.813。结论血清IL-6、IL-8、IL-10、IL-22有助于急性胰腺炎的早期诊断,且与病情严重程度密切相关。
简介:IthasbeenshownthatIL-2andIL-15canhaveopposingeffectsonlifeanddeathofTcells.However,theroleofIL-2andIL-15inregulatingthefateofothercelltypesislessclear.Inthepresentstudy,weexaminedtheimpactofIL-2andIL-15onlifeanddeathofpre-BcellsusingtheBAF-B03line.WeshowedthatBAF-B03cellsconstitutivelyexpressedtheprivateIL-2RαchainandIL-15Rαchain,andthesharedIL-2Rβchainandγcchain.StimulationofBAF-B03cellsinvitrowithIL-2andIL-15inducedvigorouscellproliferationinadose-dependentfashion.TitrationofIL-2andIL-15intheassayshowedthatthemitoticeffectsofIL-2andIL-15wereremarkablysimilar,Howerer,thesensitivitiesofBAF-B03cellstoFasmediatedapoptosisafterIL-2andIL-15stimulationwerestrikinglydifferent.CellsculturedinIL-2readilyunderwentapoptoticcelldeathuponcross-linkingoftheFasreceptorwhereascellsculturedinIL-15wereextremelyresistanttoFastriggeredcelldeath.Theanti-apoptoticeffectofIL-15inthismodelwasassociatedwithincreasedexpressionofBcl-xL.FLIPexpression,however,wascomparablebetweenIL-2andIL-15stimulatedcells.WeconcludethatIL-2andIL-15havediametricallyoppositeeffectonthefateofBAF-B03cells,althoughbothcytokinessharesimilarreceptorstructureandexhibitsimilarmitoticactivities.
简介:摘要目的探讨了肩周炎患者治疗前后血清IL-8,IL-32和IL-18水平的变化及意义。方法应用放射免疫分析法和酶联法对31例肩周炎患者进行了推拿治疗前后血清IL-8,IL-32和IL-18水平检测,并与35名正常健康人作比较。结果肩周炎患者在推拿治疗前血清IL-8,IL-32和IL-18水平均非常显著地高于正常人(P<0.01),经推拿治疗2周后则与正常人比较无显著性差异(P>0.05),且血清IL-8水平与IL-32,IL-18水平呈显著正相关(r=0.6118,0.4982,P<0.01)。结论检测血清IL-8,IL-32和IL-18水平的变化与疾病的发生发展密切相关,具有重要的临床价值。
简介:摘要目的研究4-羟基-3-甲基-2-烯基焦磷酸(HMBPP)和多肽E7对结核患者胸水及脐带血中γδ T细胞分泌白介素6(IL-6)的影响和机制。方法收集自广州市胸科医院临床诊断结核性胸膜炎患者胸水标本18例,自中山大学附属第三医院正常健康产妇脐带血标本17例。使用流式分选技术分选出结核性胸水和脐带血中的γδ T细胞与CD277+CD14+单核-巨噬细胞混合培养,分别用HMBPP或E7刺激后,运用流式细胞术检测分泌IL-6的γδ T细胞百分率及表达程序性死亡配体1(PD-L1)的CD277+CD14+单核-巨噬细胞百分率;利用RT-PCR技术检测细胞中IL-6、PD-L1的mRNA表达水平;用ELISA方法检测细胞培养上清中IL-6的含量;用PD-L1特异性小分子干扰RNA(siRNA)沉默PD-L1的表达以检测PD-L1是否参与分泌IL-6;在分选于结核性胸水和脐带血的共培养细胞中,HMBPP或E7刺激后上述指标在每一时间点对照组和实验组间分别采用独立样本t检验比较其差异,分析其统计学意义。结果在结核性胸水和脐带血中,给予HMBPP或E7刺激24 h之后,与对照组相比IL-6+γδ+ T细胞占比显著升高,给予HMBPP或E7刺激12 h之后γδ T细胞中IL-6在mRNA水平的相对表达量显著上调,以及在蛋白质水平的表达显著上调;在分选于脐带血的共培养细胞中,给予HMBPP或E7刺激,CD277+CD14+单核-巨噬细胞中PD-L1在mRNA水平的相对表达量显著上调[(3.70±0.33)vs(4.20±0.34)vs 1.00];在沉默PD-L1的表达后,γδ T细胞中IL-6的表达显著降低[(0.53±0.03)vs(0.55±0.01) vs 1.00],差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论HMBPP和多肽E7能够促进CD277+CD14+单核-巨噬细胞PD-L1表达上调,后者参与刺激与其共培养的γδ T细胞分泌更多的IL-6,这为γδ T细胞的抗结核免疫机制的研究以及结核患者的免疫治疗提供依据。